ABO、RH（D）血型鑒定中卡式微柱凝膠技術的應用

劉建華

ABO、RH（D）血型鑒定中卡式微柱凝膠技術的應用

劉建華

目的探討ABO、RH（D）血型鑒定中卡式微柱凝膠技術的應用價值。方法以我院檢驗科2015年8月—2016年8月的956份血液篩查標本為研究對象，對所有標本進行卡式微柱凝膠ABO、RH（D）血型鑒定，對鑒定結果及輸血結局進行統計分析。結果956份標本內共5例Rh（-）者，占總份數的0．52%，951例Rh（+）者，占總份數的99．48%。患者A、B、O、AB血型中Rh陰性率差異有統計學意義（P＜0．05）。血型鑒定后進行交叉配血及輸血之后，所有受血者輸血之后沒有溶血癥狀等不良反應。結論卡式微柱凝膠技術操作簡單，鑒定準確，是血站進行ABO、RH（D）血型鑒定的首選。

血型鑒定；卡式微柱凝膠技術；應用價值

現代醫療治療中，臨床輸血是治療的一項重要措施手段，輸血時對血型進行精準鑒定是確保輸血安全，避免溶血性輸血反應的前提保障。RH（D）血型是同ABO 血型一樣具有重要意義的血型系統，RH（D）血型系統遺傳多態性強，只有通過特定手段對血型精準鑒定才能預防輸血反應，改善治療結局，確保輸血安全，為患者生命健康提供有利保障[1]。

玻片法及試管法是最傳統進行血型鑒定的方法，但是這兩種鑒定方法費力費時，敏感性不佳，鑒定操作中自動化、規范化難以實現，鑒定后難以對檢測結果有效保存。Lipierre 1986年發明了微柱凝膠血型鑒定技術，此種技術標準化、自動化檢測容易實現，檢測結果可靠，被許多血站、醫院廣泛應用[2]。

1 資料及方法

1.1 一般資料

自我院檢驗科隨機抽取2015年8月—2016年8月的956份血液篩查標本，其中男512例，女444例，患者年齡22日～56歲，平均年齡（31.42±3.16）歲。

1.2 試劑儀器

1.2.1 試劑 ABO標準血清（長春博得生物技術有限公司生產），抗-D血清，5%標準A1、B、O型紅細胞懸液（上海血液生物制藥公司生產），凝聚胺試劑盒（康肽生物科技北京有限公司生產，ABO-Rh血型卡，稀釋液（強生（中國）醫療器材有限公司生產）。

1.2.2 儀器 AUTOVUE INNOVA全自動血型分析儀，配套離心機，孵育器[強生（中國）醫療器材有限公司生產]。

1.3 檢測方法

1.3.1 血型鑒定 每位供血者、受血者在交叉配血前均要首先進行ABO血型的正向、反向血型復檢，進行Rh 血型復檢[3]。對于正定型還有Rh 血型，將供血者、受血者的血液制備成1.5%的紅細胞懸液，取其中20μl加入至血型卡中，專用離心機進行5 min離心后進行結果判定。對于反定型，自供血者、受血者血漿中取40 μl，將這些血漿中加入20 μl ABO 標準紅細胞，隨后用專用離心機進行5 min離心后進行結果判定。

1.3.2 交叉配血 分別制備好1.5%的紅細胞懸液及同型供血者、受血者血清，對抗人球卡進行標記，在卡上每孔都滴加50 μl Liss 液；卡的主側添加20 μl 1.5%的紅細胞懸液及受血者血清40 μl；卡次側添加20 μl 1.5%的紅細胞懸液及供血者血清40 μl。隨后將血型卡在孵育器中37℃溫度下孵育10 min，專用離心機進行5 min離心后對結果進行觀察，如果凝膠管的底部出現紅細胞沉積則血型為陰性；如果凝膠帶上部出現紅細胞聚集則血型為陽性。

1.3.3 輸血治療 在進行ABO血型及RH（D）血型篩查之后對不規則抗體進行陽性篩查，選擇血型抗體完全相合的血液對用血者進行配血輸注；如果一時沒有找到血型抗體相合的，如抗-C抗體Rh陰性的A型血用血者可以選擇用Rh表面抗原是CCdee的O型血進行輸注。

1.4 統計學處理

將所獲得的數據輸入到SPSS 17.5軟件處理，計量資料用（±s）形式表示，用t檢驗，計數資料用數（n）及百分率（%）的形式表示，用χ2檢驗，當P＜0.05，差異有統計學意義。

2 結果

956份標本內共5例Rh（-）者，占總份數的0.52%，951例Rh（+）者，占總份數的99.48%。患者A、B、O、AB血型中Rh陰性率差異有統計學意義（P＜0.05）。血型鑒定后，及時交叉配血，輸血之后，所有受血者輸血之后沒有溶血癥狀等不良反應。具體如表1所示。

3 討論

對血型鑒定來說，玻片法、試管法為最傳統鑒定，不同鑒定方法具有不同優勢。試管法是ABO、RH（D）血型鑒定的一個金標準，鑒定的結果更準確，但是試管檢測法操作復雜，對檢測鑒定難以實行規范化、標準化管理，因此從大規模血樣標本來說，這種方法并不適合。玻片鑒定法血樣無需離心處理，操作簡單，適合血液普查，但這種鑒定方法反應速度慢，鑒定時間長，鑒定中容易忽略反應弱凝集，從而出現定型上的判斷錯誤[4]。

隨醫學技術不斷發展，微柱凝膠技術廣泛應用于血型鑒定中，這種檢測技術屬免疫學范疇，凝膠檢測下會出現分子篩效應，在紅細胞為主的凝膠內，在這種分子篩作用下，紅細胞能同對應抗體進行結合。低速離心處理之后，所凝集的紅細胞會懸浮在凝膠內，但是如果紅細胞同抗體沒有結合，這些凝集的紅細胞會在凝膠底部沉淀。

當前微柱凝膠交叉配血已經成為了國際上比較公認的一種安全輸血方法，近些年來，國家出臺了輸血安全管理條例，在此種背景下，卡式微柱凝膠試驗也被列入到血型檢測指標中，能夠在血型檢測中對不規則抗體進行篩查，臨床用血安全性大大提高。

Rh（-）血是比較稀有的熊貓血，此類血量儲備比較少，而不同類型輸血過程中因為血液中所攜帶的抗原不同，抗原間出現排斥反應，這種排斥反應也會讓輸血中發生溶血。有學者研究顯示反復輸血下，Rh抗原會在輸血刺激下產生新的抗體，新抗體一旦產生，患者再次輸血時，會有較高幾率產生輸血反應，如果血站沒有新抗體所對應的血液，患者生命安全會受到嚴重威脅[5]。因此在輸血前對Rh血型進行預見性篩查檢測是非常必要的。患者輸血反應輕則發熱、寒戰，重則出現溶血反應，不僅影響輸血效果，嚴重還可能導致患者死亡。

卡式微柱凝膠技術檢測的原理為將凝膠過濾技術同抗原抗體的免疫反應有機結合，檢測過程中通過凝膠濃度對凝膠間隙大小進行自動調節，讓凝膠間間隙同紅細胞保持差不多大小，讓間隙只能通過游離狀態下的紅細胞通過。低速離心之后，抗原抗體發生反應，并同紅細胞凝集起來，凝集后的紅細胞體積增大，此時就不能自孔隙通過了，只能在凝膠的上層漂流凝集。而沒有凝集的紅細胞則可以通過凝膠孔隙向凝膠柱底運動，這樣就將有無凝集實現了良好區分。

表1 血型鑒定結果

卡式微柱凝膠檢測過程中已經將抗人球蛋白及各類血型抗體添加到了凝膠中，此時凝膠內只要將樣本細胞加入之后便可以實現定型，檢測操作過程簡便[6]。強生血型儀試劑卡采用玻璃珠介質，這種介質可常溫保存，耐熱耐壓[7]。試劑卡檢測加樣、離心還有孵育所需要的時間都不多，經過不同打孔器打孔后能夠避免交叉污染，試劑卡還存在急診插入功能，且結果顯示采取雙面讀取方式，讀取方式更安全，也能夠有效杜絕輸血過程中的安全隱患。

卡式微柱凝膠檢測具有敏感度高、檢測影響因素少、易于觀察、檢測特異性強等優點，這種檢測技術已經成為臨床ABO、RH（D）血型鑒定及交叉配血的一個首選檢測方法。

此次研究的956例標本中存在5例Rh（-）者，占總份數的0.52%，這個檢測結果比國家原衛生部所統計的0.4%這個統計結果略高些[8]。血型鑒定之后，同受血者進行交叉配血檢測，配血正常，給受血者輸血治療之后，患者沒有1例出現輸血反應，ABO、RH（D）血型鑒定的準確率達到了100%。

綜上所述，對ABO、RH（D）血型進行準確血型鑒定為確保臨床輸血安全，預防輸血過程中發生溶血性疾病的一個必要手段。卡式微柱凝膠檢測技術，價格低廉，操作簡便，患者在存在輸血需要時能夠及時檢測，檢測靈敏度高，準確率高，更安全可靠，且在檢測過程中容易發現亞型，便于檢測實現標準化、規范化操作，為臨床大批量標本快速檢測提供了保障，標準化操作后，檢測中認為因素差錯率少，能永久保存，臨床應用價值高，是醫院進行ABO、RH（D）血型鑒定的首選。

[1] Noah DN，Njouom R，Bonny A，et al． HBs antigene prevalence in blood donors and the risk of transfusion of hepatitis b at the central hospital of yaounde，cameroon[J]． Open Journal of Gastroenterology，2011，1（2）：61-65．

[2] Andoulo F A，Tagnisartre M，Noah D N，et al． Prevalence of the hepatitis B surface antigen in a population of workers in Cameroon[J]．Open Journal of Gastroenterology，2013，3（8）：323-327．

[3] 吳濤，周俊，王勤，等． ABO、Rh（D）血型快速鑒定紙卡臨床應用研究 [J]． 人民軍醫，2015，58（12）：1404-1405．

[4] 李健，劉喜龍，譚為，等． 手工微柱凝膠免疫檢驗法在ABO、RhD血型抗原鑒定中的應用[J]． 當代醫學，2016，22（10）：27-28．

[5] 周慧盈． 4819份新生兒臍帶血ABO 及 Rh（D）血型鑒定結果分析 [J]． 國際檢驗醫學雜志，2015，36（20）：3048-3050．

[6] 張勇萍，杜娟，楊世明，等． 4397例孕產婦ABO和RhD血型檢測及不規則抗體的分析[J]． 細胞與分子免疫學雜志，2016，32（5）：680-682．

[7] 王晨，張學慧，張鵬． GALILEO NEO自動血型儀在ABO及Rh（D）血型鑒定中的應用[J]． 檢驗醫學，2016，31（2）：119-122．

[8] 黃會金． 微柱凝膠卡式法和試管抗人球蛋白法在新生兒ABO溶血三項試驗中的效果觀察[J]． 中國當代醫藥，2015，22（18）：129-131．

Application of Cassette Microcolumn Gel Technique in Identification of ABO and RH (D) Blood Groups

LIU Jianhua Clinical Laboratory Department, The Fifth People's Hospital of Ji'nan, Ji'nan Shandong 250022, China

ObjectiveTo investigate cassette microcolumn gel technique in identification of ABO and RH (D) blood groups.Methods956 blood screening specimens in our hospital from August 2015 to August 2016 were selected as the research object, were performed on all specimens card micro column gel ABO, RH (D) blood group identification. Statistical analysis was made on the results of identification and blood transfusion.ResultsOf the 956 specimens, 5 cases were Rh (-), accounting for 0.52% of the total number, and 951 of Rh (+) accounted for 99.48% of the total number. There was no statistically significant difference in Rh negative rate in patients with A, B, O, and AB (P ＜ 0.05). After cross matching and blood transfusion, all blood recipients did not have hemolysis and other adverse reactions after blood type identification.ConclusionThis technique is simple and accurate.It is the first choice for ABO and RH (D) blood group identification in blood bank.

blood type identification; cassette microcolumn gel technology;application value

R446

A

1674-9316（2017）23-0122-03

10．3969/j．issn．1674-9316．2017．23．060

濟南市第五人民醫院檢驗科，山東 濟南 250022