181頭(只)病死圈養野生動物幾種臟器帶菌情況的調查

黃淑芳 王才益 陳玎玎 龔利洋 應志豪

(杭州動物園，杭州，310008)

181頭(只)病死圈養野生動物幾種臟器帶菌情況的調查

黃淑芳 王才益 陳玎玎 龔利洋 應志豪

(杭州動物園，杭州，310008)

通過對2013～2015年的181頭(只)發病和死亡動物進行細菌培養，在118個陽性樣本中純培養出28種病原菌(138株)，陽性率為65.19%，同時存在一種動物體內分離多種細菌的現象。其中禽類陽性率為54.79%(40/73)，分離出13種病原菌；爬行類動物陽性率為80.64%(25/31)，分離出18種病原菌；哺乳類動物陽性率為68.83%(53/77)，分離出20種病原菌。在分離出的病原菌中，除常見的腸桿科菌、革蘭氏陽性球菌外還出現了巴斯德菌、假結核耶爾森氏菌、豬霍亂沙門氏菌亞利桑那亞種、支氣管炎博德特菌、枯草芽孢桿菌、解鳥氨酸烏拉爾菌等不常見的病原菌，其中假結核耶爾森氏菌在禽類的巨嘴鳥組織中分離較多，豬霍亂沙門氏菌亞利桑那亞種在爬行類紅尾蚺的內臟組織中分離較多。

野生動物；病原菌；圈養；分離；鑒定

細菌是微生物中的一個大家庭成員，廣泛存在于自然界環境及正常動植物體內，形成一個平衡的生態體系。一旦這一環境出現異常或機體免疫防御功能下降，可能會出現一種或幾種細菌異常繁殖，釋放毒性物質，引起動植物感染而致病。圈養野生動物某一個或幾個細菌引起的病例時有報道[1-5]，但系統分析動物病原菌的情況較少，而實踐中需要明確環境衛生因素與動物疾病的相關關系[6]，希望能給獸醫工作提供一點參考。

1 材料

1.1 樣本對象

2013年1月至2015年12月杭州動物園內圈養的患病野生動物，樣本取其病變部位，如咽拭子、肛拭子、皮膚潰瘍分泌物、鼻腔分泌物等；死亡動物在死亡后2～5 h內，按要求取其心、肝、肺、脾、腎的病變組織及腸道出血處的內容物。

1.2 試劑和設備

MH培養瓊脂、中國蘭瓊脂、SS瓊脂、雙糖鐵瓊脂、藥敏紙片采購于杭州濱和微生物試劑有限公司，API20E鑒定試劑條及配套的鑒定試劑、API20NE鑒定試劑條及配套的鑒定試劑、滅菌液狀石蠟、ABI細菌鑒定軟件庫采購于杭州怡丹生物技術有限公司，37℃培養箱、高壓滅菌鍋、直徑7和9的平皿、酒精燈、接種環、鑷子等采購于化東醫藥股份有限公司器材化劑分公司。

2 實驗方法

2.1 取樣

在無菌條件下按要求接種大便、腸內容物、肺病料、心病料、脾病料、肝病料等接種于中國蘭、SS、M-H或血培養基中，37℃培養24 h，觀察菌落數量及形態。

2.2 分離

腸道樣本中細菌若只有中國蘭平皿生長不做進一步分析，若SS平皿中也生長并且數量較多則做進一步分析；組織器官中細菌在血平皿或者M-H平皿中生長超過10個并且菌落比較單一，對可疑菌落進行革蘭氏染色鏡檢，并且接種雙糖管，進行37℃純培養18～24 h。

2.3 鑒定

革蘭氏陰性菌純培養的細菌通過其對雙糖管的反應，制備成0.5麥氏單位的濁度，接種于API20E或者API20NE反應糟中，37℃溫育24 h進行結果分析，通過陰陽性比對得出7個數字的編碼，然后把編碼輸入ABI細菌庫中，軟件根據編碼分析出該細菌的菌種名稱，出現幾種細菌都可疑時就要根據提示進行補充實驗。革蘭氏陽性球菌就根據革蘭氏染色觀察細菌形態，做氧化酶和觸酶試驗來判定。革蘭氏陽性桿菌送到杭州市第一人民醫院微生物室通過MALDI-TOF-MS基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜的方法進行鑒定。

3 結果

73只禽類患病動物中有40只分離出13種病原菌(表1)。31只(條)爬行類患病動物中，25只(條)分離出18病原菌(表2)。77只(頭)哺乳類患病動物中，53只(頭)分離出20種病原菌(表3)。

共分離出138株病原菌，其中腸桿科菌18種104株，占總菌株的75.36%；弧菌科2種10株，占總菌株的7.25%，非發酵菌1種4株，占總菌株的2.90%；其他革蘭氏陰性菌4種6株，占總菌株4.35%；革蘭氏陽性菌3種14株，占總菌株的10.14%(表4)。

從分離出細菌的部位來看，心、肝、肺、脾和腎共有84次，其中肺組織48次；腸道組織56次，其他組織15次(表5)。

表1 禽類動物病原菌情況

Tab.1 The pathogens of avians

續表1

表2 爬行類動物病原菌情況

Tab.2 The pathogens of amphibians and reptiles

表3 哺乳類動物病原菌情況

Tab.3 The pathogens of mammals

續表3

表4 病原菌情況分析

Tab.4 Analysis of the pathogens

續表4

表5 不同種類動物組織分離出的病原菌次數

Tab.5 The number of pathogenic bacteria isolated from the different kinds of animal tissue

續表5

續表5

4 討論與分析

4.1 物種帶菌率

從病原菌分離的陽性率來分析，禽類動物陽性率最低54.79%，爬行類動物陽性率最高80.64%，哺乳類動物陽性率68.83%，說明爬行類和哺乳類動物平時帶菌情況比禽類動物高，在機體抵抗力下降時病原菌就可能導致出現感染。爬行類動物混合感染現象較多，感染后臨床癥狀往往表現不突出，對其環境衛生的要求就要更高。

4.2 獸醫工作思考

分離的138株病原菌中，除沙門氏菌外其他大部分是條件致病菌，其中腸桿科菌所占比達到近80%，分離的病原菌中沙雷氏菌、大腸埃希氏菌、假結核耶爾森氏菌、鏈球菌、葡萄球菌等與伍清林、張鄧華等[7-9]在動物籠舍環境中分離的病原菌相同，提示平時在獸醫的預防工作中要重視革蘭氏陰性菌的消毒及防治，認識籠舍衛生及消毒的重要性。

巴斯德菌、假結核耶爾森氏菌、豬霍亂沙門氏菌、支氣管炎博德特菌、鳥氨酸烏拉爾菌這幾種病原菌雖然不常見，但也有過報道[10-12]，豬霍亂沙門氏菌亞利桑那亞種在紅尾蚺的心肝肺中出現7次，假結核耶爾森氏菌在巨嘴鳥的肝中出現4次，脾中出現1次，這2種菌集中出現某一區域某一種類動物體內，提示必要的預防措施。

4.3 由于條件所致所有病原菌株均未進行動物復制實驗，對于致病性還有待于進一步研究。

[1] 鄧家波，牛李麗，王強，等.金絲猴金黃色葡萄球菌感染的診治一例[J].四川動物，2008，27(3)：436-436，439.

[2] 陳永林，趙京，張成林，等.長臂猿克雷伯氏菌病病原鑒定[J].中國獸藥雜志，2007，41(10)：58-59.

[3] 陳永林，臂哲，張成林，等.斑馬鏈球菌病的病原診斷[J].中國獸藥雜志，2000，34(5)：33-34.

[4] 陳永林，張成林，劉燕，等.袋鼠摩根氏菌病病原鑒定[J].中國獸藥雜志，2007，41(8)：49-50.

[5] 陳武，田純見，蔡勤輝，等.鹿科動物和斑馬巴氏桿菌病的診斷[J].中國預防獸醫學報，2000，22(1)：67-70.

[6] 祝俊杰.淺談動物疫病與其生存環境之間的相關性[J].北京農業，2007(2)：16-17.

[7] 伍清林，金蘭梅，鄧長林，等.動物園部分動物舍內外環境中常見病原菌的調查[J].家畜生態學報，2010，31(5)：70-75.

[8] 張鄧華，陳清鳳，鄧蕓，等.重慶市動物園動物環境中常見病原菌的調查及預防保健措施[J].中國畜牧獸醫，2009，36(8)：140-143.

[9] 伍清林，金蘭梅，皺瑩，等.圈養野生動物環境中常見病原菌的調查研究[J].金陵科技學院學報，2011，27(2)：82-88.

[10] 周紫峣，周瀟瀟，彭廣能，等.松鼠猴感染假結核耶爾森菌的診治[J].獸醫學報，2014，34(2)：181-187.

[11] 汪斌，梁慧，韓彬，等.海藻巴斯德菌感染導致腦膿腫1例[J].中國人獸共患病學報，2007，23(1)：98.

[12] 郭俊杰，崔征，羅燕萍.支氣管敗血博德特菌菌血癥1例[J].中華醫院感染學雜志，2007，17(8)：1034.

Investigation of Pathogenic Bacteria Isolated from Organs of 181 Captive Wildlife Individuals

Huang Shufang Wang Caiyi Chen Dingding Gong Liyang Ying Zhihao

(Hangzhou Zoo，Hangzhou，310008，China)

We cultured samples from 181 animal individuals during 2013 to 2015，and isolated 138 strains of pathogenic bacteria of 28 species from 118 samples，the positive rate of culture was 65%.We separated more than one strain of bacteria in one individual.Thirteen species of pathogenic bacteria were isolated from 40 of 73 birds，for a positive rate of 55%.Among 31 amphibians and reptiles，we isolated 18 pathogens from 25 animals for a positive rate of 81%.As for the 77 mammals，20 pathogenic bacteria were isolated from 53 samples for a positive rate of 69%.Pathogens were mostly intestinal bacteria and gram positive coccus.Also included were uncommon bacteria likePasteur，Yersiniapseudotuberculosis，Salmonellacholeraesuissubsp.diarizonae，Bordetellabronchiseptica，BacillussubtilisandRaoultellaornithinolytica.Y.pseudotuberculosiswas mostly isolated from toucan tissues，andSalmonellacholeraesuissubsp.diarizonaewas mostly isolated from Red Tail Boa.

Wildlife；Pathogen；Captive；Separation；Identification

稿件運行過程

2016-09-23

修回日期：2017-02-14

發表日期：2017-08-10

S858.9

A

2310-1490(2017)03-360-07

黃淑芳，女，39歲，高級獸醫師；主要從事野生動物臨床檢驗和動物疾病預防工作。E-mail：376000527@qq.com