非小細胞肺癌患者中醫證型與外周血樹突狀細胞功能的相關性分析*

鮑建敏 沈丹 喻長法 付海衛 陳莉莉 陳丹 張紹文

浙江省臺州市第一人民醫院浙江臺州318020

診法求索

非小細胞肺癌患者中醫證型與外周血樹突狀細胞功能的相關性分析*

鮑建敏 沈丹 喻長法 付海衛 陳莉莉 陳丹 張紹文

浙江省臺州市第一人民醫院浙江臺州318020

非小細胞肺癌中醫證型樹突狀細胞

自1973年加拿大學者Steinman發現樹突狀細胞（DC）以來，大量研究表明DC是目前已知的體內抗原提呈功能最強的專職抗原提呈細胞（APC）[1-2]，其表面能高表達MHC-Ⅱ類分子和共刺激因子CD80、CD83、CD86、CD40等，對T細胞免疫產生免疫應答[3]，有效激發機體的抗腫瘤免疫應答或激發細胞毒T細胞產生抗腫瘤效應，在機體抗腫瘤免疫中發揮重要作用。近年來一些研究提示，機體存在著不同程度的免疫力低下，與DC數量上的減少及功能上的缺陷關系密切。在此基礎上，相關研究表明DC對肺癌的預后判斷存在一定價值，但肺癌中醫證候分型與樹突狀細胞功能的相關性研究鮮有報道。為此，筆者通過對非小細胞肺癌（NSCLC）患者，進行外周血血清CD80、CD83、CD86的測定，來探討肺癌中醫證型與樹突狀細胞功能之間的關系。

1 資料與方法

1.1 研究對象：自2012年1月至2016年10月在臺州市第一人民醫院中醫科、呼吸科及腫瘤科就診符合條件的患者。納入標準：①有胸片或胸部CT等影像學檢查結果；②經病理學或細胞學確診；③同意參加本研究并簽署知情同意。排除標準：①無病理或細胞學診斷者；②轉移性肺癌或合并其他腫瘤；③有心、腎等重要臟器功能不全者；④孕婦及哺乳期婦女。最終入組研究對象113例，參照國際抗癌組織關于肺癌的TNM分期（UICC2002），其中I期43例，II期16例，III期47例，IV期7例。根據中醫證型分組：脾虛痰濕組33例、腎陽虧虛組11例、氣滯血瘀組26例、陰虛內熱組22例、氣陰兩虛組21例。其中男性84例，女性29例，平均年齡60.37±12.72歲。正常對照組為健康成人，共30例，男性22例，女性8例，平均年齡59.77±13.76歲。各組患者性別、年齡等基本資料比較，無顯著性差異（P＞0.05），具有可比性，見表1。

1.2 研究方法：分述如下。

1.2.1 臨床癥狀記錄：由具有一定臨床經驗的中級職稱以上醫師，記錄入組患者咳聲和痰的色、質、量，胸悶氣短及兼癥，飲食，二便，舌象，脈象等。

1.2.2 中醫分型標準：根據NSCLC患者臨床癥狀表現，并參照中華中醫藥學會《腫瘤中醫診療指南》（2008-11-30發布）擬定的標準，分為脾虛痰濕證、陰虛內熱證、氣陰兩虛證、腎陽虧虛證及氣滯血瘀證5組。

1.2.3 標本收集：清晨抽取空腹患者靜脈血，肝素抗凝，采用淋巴細胞分離液密度梯度離心法，收集外周血單個核細胞(PBMC)，再從中分離收集CDl4+單核細胞。1.2.4DC的分離、純化與培養：于分離好的CDl4+單核細胞中加入RPM1640完全培養基，并加誘導因子rGMCSF(1000U/ml)、rIL-4(500U/ml)，5%CO2、37.0℃條件下培養。每隔2天換半液，保持細胞因子終濃度一致，誘導2天后加入成熟誘導因子rTNF-a(10ng/ml)、IL-1β(10ng/ml)、IL-6(10ng/ml)、PGE2(1μg/ml)培養2天，即得到成熟DC。

1.2.5 DC的檢測：成熟DC與用異硫氰酸酯（FITC）標記的CD80、CD83、CD86單克隆抗體4℃孵育30min，PBS洗滌2次，用流式細胞儀檢測。

1.2.6 主要試劑及儀器：CD80、CD83、CD86檢測采用美國BD-FACScalibus流式細胞儀，試劑為公司配套提供。RPMI1640完全培養基購自荷蘭Duchefa公司，rGM-CSF、rIL-4、rTNF-a、IL-1β、IL-6、PGE2購自以色列Cyto-Lab/PeprotechAsia公司。

1.3 統計學方法：采用SPSS17.0軟件進行分析，計數資料的比較采用RxC列聯表資料的χ2檢驗；計量資料用±s表示，多組之間比較采用單因素方差分析，方差齊時用LSD法，方差不齊時用Tambane’sT2法。P＜0.05表示差異有統計學意義。

表2 各組NSCLC癌患者外周血CD80、CD83、CD86的表達情況（±s，%）

表2 各組NSCLC癌患者外周血CD80、CD83、CD86的表達情況（±s，%）

注：與正常對照組比較，*P＜0.05；與脾虛痰濕組比較，△P＜0.05；與腎陽虧虛組比較，▲P＜0.05；與氣滯血瘀組比較，☆P＜0.05；與陰虛內熱組比較，★P＜0.05。

CD86 108.21±19.50 102.61±13.79 99.95±11.74 91.33±14.09*△85.47±10.17*△▲85.27±12.42*△▲組別正常對照組脾虛痰濕組腎陽虧虛組氣滯血瘀組陰虛內熱組氣陰兩虛組例數30 33 11 26 22 21 CD80 92.75±16.42 66.13±12.87*60.66±11.87*53.51±12.19*△53.45±8.06*△39.09±7.76*△▲☆★CD83 51.49±8.60 44.46±8.75*46.15±9.04 42.88±6.04*39.70±7.75*△▲34.99±8.31*△▲☆

2 結果

NSCLC患者不同中醫證型與外周血CD80、CD83、CD86的關系。詳見表2。

3 討論

中醫學對肺癌的認識，多歸屬于“息賁”“肺積”等范疇，早在《黃帝內經》中就有類似肺癌證候的描述。肺癌的病機多責之于人體正氣虛損，臟腑功能失調，導致肺氣失宣、氣滯血瘀、聚痰生癖而形成腫塊。肺癌臨床表現復雜多樣，但總體來說，早期仍以實證為主，表現為痰濕、氣滯、血瘀；晚期則以本虛標實為主，甚至單純虛證，如陽虛、陰虛、氣陰兩虛等。

成熟的樹突狀細胞表面所表達的共刺激因子CD80、CD83、CD86等，是T細胞免疫應答所必需的信號分子，它能唯一激活初始型T細胞致敏，產生初次免疫應答，從而啟動機體的特異性免疫應答；此外，DC還介導了外周免疫耐受及腫瘤免疫逃逸現象[4]。機體存在著不同程度的免疫力低下，與DC數量上的減少及功能上的缺陷關系密切。相關研究表明：DC對NSCLC的預后判斷存在一定價值。如劉杜姣等[5]報道老年肺癌患者的死亡可能與DC細胞表面表型表達下降有關，尤其是CD83、CD86的表達下降與肺癌患者死亡的關系較為密切；侯安繼等[6]報道老年NSCLC患者CD83、CD1a低表達與患者疾病進展和生存期相關。本研究表明非小細胞肺癌患者中脾虛痰濕組CD80、CD86均高于氣滯血瘀組、陰虛內熱組及氣陰兩虛組，提示病變尚處于腫瘤的早期階段，致癌病變的各種病邪作用于機體，可以有效地激發機體的抗腫瘤免疫應答或激發細胞毒T細胞產生抗腫瘤效應，起到自我保護作用，而從中醫病機分析早期正氣尚足，外邪初犯，正邪交爭，預后尚可；在氣陰兩虛組中CD80、CD83、CD86均偏低，提示機體免疫功能狀態底下，多為疾病的晚期階段，正氣虛衰已無力抗拒外邪，提示疾病預后不佳。此外，化療作為惡性腫瘤的常規治療手段之一，極易耗氣傷陰，也一定程度上造成臨床上晚期NSCLC患者中氣陰兩虛證候較為多見[7]。

由此可見，非小細胞肺癌不同中醫證型與外周血樹突狀細胞功能之間存在著一定的相關性，并間接表明不同證型患者其細胞免疫功能具有強弱差異。目前從細胞免疫角度研究不同中醫證型非小細胞肺癌的差異表現還處于初期階段，今后可以此為橋梁，來進一步研究證候類型與生存期之間的關系；并為中醫治療NSCLC提供客觀的療效標準。

[1] OstbergJR,RepaskyEA.Emergingevidenceindicates that physiologically relevant thermal stress regulates dendritic cell function[J].Cancer Immunology Immunotherapy,2006,55(3)：292-298.

[2] Kissel K,Berber S,Noekher A.Human platelets targetdendriticcelldifferentiationandproduction ofproinflammatorycytokines[J].Transfusion,2006,46(5)：818-827.

[3] Sharpe A,Freeman G.The B7-CD28 superfamily[J].Nature Reviews Immunology,2002,2(2)：116-126.

[4] TabarkiewiczJ,RybojadP,JablonkaA.CD1c+and CD303+dendriticcellsinperipheralblood,lymph nodes and tumor tissue of patients with non-small cell lung cancer[J].Oncology Reports,2008,19(1)：27.

[5] 劉杜姣,歐建峰,馬曉惠,等.老年肺癌患者外周血細胞表面DC分子的表達與生存的關系[J].中國腫瘤臨床與康復,2007,14(1)：5-7.

[6] 侯安繼,胡艷,周莉,等.老年非小細胞肺癌患者外周血樹突狀細胞表面分子研究[J].中國醫藥指南,2010,8(19)：105-106.

[7] 高繼良.沙參麥冬湯維持治療化療后非小細胞肺癌31例觀察[J].浙江中醫雜志,2015,50(2)：90-91.

浙江省中醫藥科技計劃項目NSCLC中醫證候分型與其外周血樹突狀細胞功能的相關性研究，編號：2012ZB172

2017-05-26