國產凝膠滲透色譜在測定豬肉農藥殘留中的應用

來福*

(1.北京出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心, 北京 100026;2.上海屹堯儀器科技發展有限公司，上海 201108)

國產凝膠滲透色譜在測定豬肉農藥殘留中的應用

劉鑫1云環1高峰1劉來福1*齊娜2陳向斌2金曉靜2

(1.北京出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心, 北京 100026;2.上海屹堯儀器科技發展有限公司，上海 201108)

選擇乙酸乙酯/環己烷(V/V 1/1)作為提取液，提取液經凝膠滲透色譜(Gel Permeation Chromatography，GPC)后，除去脂類、蛋白質和大部分大分子雜質，樣品凈化后使用GC/MS進行多種農藥殘留同時分析。針對豬肉樣品進行了添加回收試驗，回收率在82.21%-98.09%，0.05 μg/mL～1.0 μg/mL線性相關系數良好，相對標準偏差為3.72%～11.38%。本方法具有操作簡便，自動化程度高，凈化效果好、精密度好等優點，適用于豬肉中農藥殘留的日常檢測工作。

凝膠滲透色譜 國產儀器 農藥 豬肉

1 概述

由于長期大量的使用和濫用，農藥已成為食品的重要污染物之一，特別是隨著我國人民生活水平的提高，肉、水產品、蛋和乳類等動物源性食品在居民膳食結構中所占的比例越來越大。通過環境接觸、食物鏈富集等進入動物體內的農藥殘留問題成為了關注的熱點。近年來，我國在蔬果、茶葉等植物性食品及水體、土壤等環境中的農殘檢測上已取得了較大進展。但針對動物源性食品的農殘檢測，尤其是針對不同類型農藥的多殘留檢測則較少研究，檢測技術上的差距還導致我國出口動物源性食品遭遇歐美發達國家的技術性貿易壁壘。因此，提高我國動物源性食品農藥多殘留的檢測水平，顯得十分重要和緊迫。

動物源性食品中含有的大量油脂和蛋白質，其極性大小與常用的農藥相似。目前常用的凈化技術如固相萃取技術，液液萃取技術很難將農藥從上述雜質中凈化出來。而凝膠滲透色譜是一項成熟的農藥殘留凈化技術，其利用不同體積的分子在凝膠色譜柱保留的時間差異來分離目標物。可以有效的去除油脂、蛋白質等大分子雜質的干擾。本實驗利用GPC凈化，結合GC-MS進行分析，建立了豬肉中7種農藥殘留的測定方法。

2 材料與方法

2.1 樣品

將豬肉樣品用絞肉機攪碎，充分混勻，用四分法縮分至少不少于500g，作為試樣，裝入清潔容器內，密封后于-18℃冷凍保存。

2.2 儀器與試劑

儀器型號：上海屹堯儀器科技發展有限公司FLEXI 全自動凝膠滲透色譜儀(配有400mm×25mm(內經)，內裝BIO-Beads S-X3填料的凈化柱)，用于樣品中大分子雜質的凈化；氣相色譜-質譜儀，配有電子轟擊離子源(EI)；分析天平，感量為0.0001g；離心機，最大轉速為10000 r/min；環己烷：色譜純；乙酸乙酯：色譜純；乙酸乙酯+環己烷(1+1，體積比)；乙草胺、五氯硝基苯、地蟲硫磷、西瑪津、艾試劑、撲草凈、毒死蜱單個標準儲備液100mg/L；無水硫酸鈉：分析純(用之前在650℃灼燒4h，貯存于干燥器中，冷卻后備用)；微孔過濾膜(尼龍)。

2.3 方法建立

準確稱取10g試樣(精確至0.01g)，放入50mL離心管中，并加10g無水硫酸鈉，加25mL乙酸乙酯+環己烷(1+1，體積比)，超聲提取15分鐘，以3000r/min離心3min，上清液過裝有無水硫酸鈉的漏斗，收集于旋蒸瓶中，殘渣再用35mL乙酸乙酯+環己烷(1+1)提取一次，合并提取液，并將提取液于40℃水浴蒸發濃縮至約5mL，將上述提取液轉移至10 mL容量瓶中，用5 mL乙酸乙酯+環己烷(1+1)分兩次洗滌梨形瓶，并轉移至上述10 mL容量瓶中，定容至刻度，搖勻。將樣液過0.45 μm微孔濾膜濾入10 mL試管，供凝膠滲透色譜儀凈化。

凝膠滲透色譜凈化條件，見表1、表2。

表1 全自動凝膠凈化方法進樣程序表

進樣流速：5mL/min

表2 全自動凝膠凈化方法收集程序表

收集液于40℃水浴旋轉蒸發至約5mL，將濃縮液轉移至15mL離心管中，氮吹濃縮至近干，加入1 mL的正己烷溶解殘渣，混勻，供氣相色譜-質譜測定。

氣相色譜-質譜條件如下：

色譜柱：DB-5MS 30m × 0.25mm × 0.25μm。柱溫(程序升溫)：70℃保持3min，15℃每分鐘升到180℃，保持2min，10℃每分鐘升到280℃，保持10min。

進樣口溫度：250 ℃。進樣口壓力：77 kPa。流速：1.0 mL/min。分流比：不分流。進樣量：1.0 μL。

2.4 線性關系

5 mg/L混合標準溶液配制如下：

分別從濃度為100mg/L的乙草胺、五氯硝基苯、地蟲硫磷、西瑪津、艾試劑、撲草凈、毒死蜱標準儲備液中，各移取0.5mL標準液于10mL容量瓶中，使用正己烷定容至刻度，配制成濃度為5mg/L的10種農藥混合標準溶液，避光，0～4℃保存。

基質混合標準工作溶液配制如下：

用空白樣品基質溶液配制成濃度分別為0.05、0.1、0.2、0.5、0.8、1.0mg/L的混合標準工作溶液，用于標準工作曲線的繪制，線性方程見表3。

表3 8種農藥線性方程

2.5 加標回收率

在豬肉樣品中加入0.5 μg的混合標準溶液，重復進樣7次，采用基質標準曲線定量，檢測數據及RSD見表4。

3 結論

建立了凝膠凈化-氣相色譜-質譜法檢測豬肉中農藥殘留的方法。該方法具有自動化程度高，萃取效率高、凈化效果好、精密度好，分析快速等優點，適用于豬肉中農藥殘留的日常檢測工作。

表4 8種農藥測定結果

[1] 高雪，王翠芬，劉萍，劉曉慧，齊雅薇.凝膠滲透色譜-氣相色譜法測定豬肉中11種有機磷農藥殘留[J].食品安全質量檢測學報，2014 (6) :1782-1786.

[2]劉潤珠，王松，崔鶴，高建國.張靖坤牛肉和豬肉基質中多農藥殘留GCMS分析方法[J].食品研究與開發，2013，34 (22) :25-28.

[3]國家質量監督檢驗檢疫總局，國家標準化管理委員會.GB/T 19650-2006 動物肌肉中478種農藥及相關化學品殘留量的測定 氣相色譜-質譜法[S]：1-68.

Purificationofpesticideresiduesinporkbydomesticgelpermeationchromatography.

LiuXin1,YunHuan1,GaoFeng1,LiuLaifu1*,QiNa2,ChenXiangbin2,JinXiaojing2

(1.BeijingEntry-ExitInspectionandQuarantineBureau,Beijing100026,China; 2.PreeKemScientificInstrumentsCo.,Ltd.,Shanghai201108,China)

The seven kinds of pesticide residues in pork were determined by gel permeation chromatography (GPC) combined with gas chromatography hyphened mass (GC-MS). With the extraction solvent of ethyl acetate-cyclohexane (V/V 1/1), the extract was purified by GPC, then lipids, proteins and most of the macromolecular impurities were removed from the sample matrix,followed by GC/MS analysis. The spiked recovery was 82.21%—98.09% with relative standard deviation (RSD) of 3.72%—11.38%. The method ranged from 0.05 μg/mL to 1.0 μg/mL with good linearity. In conclusion, the method was simple and accurate with high automation and extraction efficiency. It was suitable for routine detection of the pesticide residues in pork.

gel permeation chromatography; domestic instrument; pesticide residues; pork

北京市科技計劃課題《國產分析儀器驗證與綜合評價市場化推廣研究與實踐》(Z161100003016006)資助。

10.3969/j.issn.1001-232x.2017.06.028

2017-10-04

劉鑫，高級工程師，liuxin@bjciq gov cn。