八聚體結合轉錄因子4在子宮內膜異位癥組織中的表達及臨床研究

張英芝，勞佩維，朱淼華

(寧波大學醫學院附屬醫院，浙江 寧波 315020)

·基礎與臨床研究·

八聚體結合轉錄因子4在子宮內膜異位癥組織中的表達及臨床研究

張英芝，勞佩維，朱淼華

(寧波大學醫學院附屬醫院，浙江 寧波 315020)

目的：探討八聚體結合轉錄因子4(OCT4)在子宮內膜異位癥組織中的表達情況及其臨床意義。方法采用免疫組化方法檢測OCT4蛋白在60例子宮內膜異位癥患者的異位內膜組織及在位內膜組織中、50例正常在位子宮內膜組織中的表達情況。結果OCT4蛋白在子宮內膜異位癥的異位內膜組織中和正常在位內膜組織中的陽性表達率分別是81.7%和42.0%，差異有統計學意義(P<0.05)。AFS分期為Ⅲ-Ⅳ期的子宮內膜異位癥的異位內膜組織中的OCT4蛋白的陽性表達率高于Ⅰ-Ⅱ期(P<0.05)。結論OCT4在子宮內膜異位癥的發生、發展中發揮作用，且OCT4隨臨床分期的加重而表達量增加，表明OCT4在子宮內膜異位癥的發展中有促進作用。

子宮內膜異位癥； OCT4； 異位子宮內膜； 免疫組化法

子宮內膜組織(腺體和間質)出現在子宮體以外的部位時，稱為子宮內膜異位癥(Endometriosis，EMT)[1]。異位子宮內膜來源至今尚未闡明，最近研究發現，子宮內膜異位癥的發生與子宮內膜組織中干細胞的異常活性有關[2]。作為干細胞相關基因的八聚體結合轉錄因子4(Octamer-Binding Transcription Factor 4，OCT4)在子宮內膜癌組織中的異常表達已經有較多的研究[3]，但是，OCT4是否與子宮內膜異位癥的發生相關，在子宮內膜異位癥中OCT4的表達情況等研究報道較為少見。本研究應用免疫組織化學的方法，檢測OCT4蛋白在子宮內膜異位癥組織中的表達情況，探討OCT4在子宮內膜異位癥發生發展中的作用以及與臨床分期的關系。

1 資料與方法

1.1 資料來源

選取2016年6-12月期間在寧波大學醫學院附屬醫院婦一科行腹腔鏡手術、病理證實為子宮內膜異位癥的患者60例，按美國生育學會(AFS)的“修正子宮內膜異位癥分期法”[1]分期為Ⅰ-Ⅱ期的27例，Ⅲ-Ⅳ期的33例，每例患者均取異位內膜組織和在位內膜組織作為標本。另選同期因宮腔粘連行宮腔鏡手術患者的正常在位子宮內膜組織50例作為對照組。所有入選的患者術前半年內均未行激素類治療，未放置過宮內節育器，子宮內膜無其他病變，并取得患者知情同意。所有標本均經病理證實。

1.2 實驗試劑和儀器

兔抗人OCT4多克隆抗體(美國eBioScience公司)；SABC 免疫組化試劑盒及DAB顯色試劑盒(武漢博士德生物工程有限公司)；PBS緩沖液(武漢博士德生物工程有限公司)；其他試劑及儀器由寧波市病理中心提供。

1.3 實驗方法

所有標本組織經10%中性福爾馬林液固定，石蠟包埋，制成4μm連續切片。采用免疫組織化學SABC法檢測組織中OCT4蛋白量，嚴格按照SABC試劑盒說明書進行操作。實驗中均設陽性和陰性對照片，用PBS代替一抗處理的切片作為陰性對照，以試劑公司提供的陽性片作為陽性對照。

1.4 結果判定

OCT4蛋白主要在細胞核和細胞質中表達。切片中以細胞質和細胞核內出現棕黃色或棕褐色顆粒為陽性染色，所有切片均由2名高級職稱病理醫師雙盲閱片。結果判定采用sinicrope改良法[4]，取4個高倍鏡視野計數陽性細胞，陽性細胞百分比<5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分；染色強度分級評分：0分，無染色；1分，弱染色；2分，中度染色；3分，強染色。根據2項得分相乘之積判斷陽性強度，0分為(-)，1～4分為(+)，5～8分為(++)，9～12分為(+++)。以乘積≤4分定義為陰性表達，>4分為陽性表達。

1.5 統計學處理

數據應用SPSS17.0軟件處理，采用t檢驗比較研究組和對照組的年齡、體重指數(BMI)及血清CA125的差異；用χ2檢驗比較2組的痛經情況以及不同組織、不同分期的內膜組織中的OCT4蛋白的陽性表達率，以P<0.05為差異有統計學意義(3組間兩兩比較取P<0.0167為差異具有統計學意義)。

2 結果

2.1 研究對象一般情況的比較

研究組和對照組患者的一般情況比較見表1，2組患者在年齡、BMI方面無明顯差異，但研究組患者的痛經發病率明顯高于對照組(P<0.05)，而且血清CA125水平也顯著升高(P<0.05)。

表1 研究對象的一般情況比較

2.2 組織中OCT4蛋白的表達

OCT4蛋白主要表達于細胞核和細胞質中，在EMT患者的異位膜、在位內膜以及對照組的子宮內膜腺上皮細胞及間質細胞中均有表達。不同組織中的OCT4蛋白的表達情況見表2，與對照組的子宮內膜比較，EMT患者的異位內膜中OCT4的陽性表達率明顯增高(χ2=18.54，P=0.000)，差異有統計學意義(P<0.0167)。

表2 OCT4蛋白在不同組織中的表達情況

2.3 不同分期的異位內膜組織中OCT4蛋白的表達

AFS分期為Ⅲ-Ⅳ期的EMT患者異位內膜中OCT4蛋白的陽性表達高于Ⅰ-Ⅱ期(P<0.05)，見表3。

表3 不同AFS分期的EMT異位內膜組織中 OCT4蛋白的表達

3 討論

八聚體結合轉錄因子(OCT4)是近年來發現的一種轉錄因子，是胚胎干細胞維持自身更新及分化潛能的核心轉錄因子。在正常成體細胞及惡性腫瘤組織中OCT4的表達已有較多的報道。Padykula[5]提出人類子宮內膜的強再生能力是由子宮內膜干細胞調控的。在子宮內膜組織中存在子宮內膜上皮細胞及基質細胞的祖細胞，而且發現OCT4也存在于子宮內膜組織中。本文中檢測正常子宮內膜組織中有OCT4的表達，與文獻相符。

近幾年研究發現，子宮內膜異位癥的發生與子宮內膜組織中干細胞的異常活性有關[2]。作為干細胞相關基因的OCT4，在子宮內膜異位病灶的形成中發揮上調作用[6]。本文的研究結果顯示OCT4在EMT患者異位內膜組織中的表達明顯高于對照組內膜組織，提示OCT4因其干細胞特性在子宮內膜異位癥的發病機制中發揮一定作用。另外，在子宮內膜異位癥臨床分期期別越高的組織中OCT4的表達量越大，隨病情發展而增加，提示了OCT4對子宮內膜異位癥的促進作用。

CA125是目前比較公認的卵巢上皮性癌的檢測指標，合并有卵巢內異囊腫的卵巢癌患者的血清CA125值明顯升高。有研究表明，OCT4可促進異位子宮內膜細胞的自我更新及增強細胞生存能力，而且是促進子宮內膜細胞轉移的分子機制基礎[7]。本研究中，卵巢內異癥患者的血清CA125水平明顯高于對照組，因此可推測OCT4在促進EMT向卵巢癌轉變中發揮重要作用。

綜上所述，子宮內膜異位癥患者異位內膜組織中OCT4蛋白的表達均顯著高于正常的子宮內膜組織，提示OCT4在子宮內膜異位癥的發生、發展中可能發揮作用。且隨著臨床分期的加重，OCT4的表達量增加，表明OCT4對子宮內膜異位癥的病情發展可能有促進作用。這是OCT4對子宮內膜異位癥作用的初步研究，并不能揭示OCT4在EMT發生、發展中的作用機制，仍需大量的實驗數據證實其在異位子宮內膜組織中高度表達，及促進子宮內膜細胞轉移的作用。隨著對OCT4研究的不斷深入，也許可以為探討子宮內膜異位癥的發病機制提供一條新的思路，為治療EMT帶來一種新的方法。

[1]謝幸，茍文麗，等. 婦產科學[M].第8版. 北京：人民衛生出版社，2014:268-275.

[2]Chan RW, Ng EH, Yeung WS. Identification of cells with colony-forming activity, self-renewal capatity, and multipotency in ovarian endometriosis. Am J Pathol ,2011,178:2832-2844.

[3]Wu Y, Liu S, Xin H, Jiang J, Younglai E, Sun S, et al. Up-regulation of microRNA-145 promotes differentiation by repressing OCT4 in human endometrial adenocarcinoma cells. Cancer ,2011,117:3989-3998.

[4]Makoto S, Isao O. Changes in Expression of Estrogen Receptors α and β in Relation to Progesterone Receptor and pS2 Status in Normal and Malignant Endometrium. Cancer Sci, 2000, 91:510-518.

[5]Park JH, Daheron L, Kantarci S, Lee BS, Teixeira JM. Human endometrial cells express elevated levels of pluripotent factors and are more amenable to reprogramming into induced pluripotent stem cells. Endocrinology ,2011,152:1080-1089.

[6]Proestling K , Birner P , Balendran S , Nirtl N , et al. Enhanced?expression of the?stemness-related?factors?OCT4,?SOX15 and TWIST1 in ectopic endometrium of endometriosis patients. Reprod Biol Endocrinol. 2016,14:81.

[7]ExpressionChang JH, Au HK, Lee WC, Chi CC, et al. Expression of the pluripotent transcription factor OCT4 promotes cell migration in endometriosis. Fertil Steril. 2013, 99:1332-1339.

ExpressionofOCT4anditsclinicalsignificanceinendometriosis

ZHANGYingzhi,LAOPeiwei,ZHUMiaohua

(The Affiliated Hospital of Ningbo University Medical School,Zhejiang 315020,China)

ObjectiveTo investigate the expression of OCT4 protein in endometriosis and its clinical significance.MethodOCT4 protein expression in ectopic endometrium tissues and eutopic endometrium tissues obtained from 60 patients with endometriosis,and the normal endometrium tissues from 50 patients with intrauterine adhesion were detected by immunohistochemistry.ResultThe positive rates of OCT4 in ectopic endometrium tissues and eutopic endometrium tissues with endometriosis,and the normal endometrium tissues were 81.7%,63.3% and 42.0%, respectively (P<0.05).The positive rates of OCT4 in endometriotic tissues with AFS stage for Ⅲ-Ⅳ of endometriosis were significantly higher than that with Ⅰ-Ⅱ phase(P<0.05).ConclusionOCT4 correlates to the occurrence and progress of endometriosis. The expression of OCT4 were increased significantly with the clinical stage of the increase .OCT4 may play an important role in the development of endometriosis.

endometriosis; OCT4; ectopic endometrium; immunohisto chemistry

張英芝(1976-)，女，浙江金華人，碩士，副主任醫師。研究方向：婦科腫瘤及婦科內鏡診療

R711.71

B

1672-0024(2017)06-0049-03