mTORC1相關蛋白在胃腸胰神經內分泌腫瘤中的表達及其與預后的相關性

趙 濤 樂 靜 李傳靜 劉愛林

mTORC1相關蛋白在胃腸胰神經內分泌腫瘤中的表達及其與預后的相關性

趙 濤 樂 靜 李傳靜 劉愛林

目的探討mTORC1相關蛋白在胃腸胰神經內分泌腫瘤中的表達與預后之間的相關性。方法納入75例胃腸胰神經內分泌腫瘤的患者，采用免疫組織化學方法檢測mTORC1相關蛋白的表達水平，通過病理學分級、臨床分期分析mTORC1相關蛋白在不同分層患者中的表達情況，采用Cox回歸分析及log-rank檢驗分析預后與mTORC1相關蛋白表達的相關性。結果mTOR1相關蛋白在胃腸胰神經內分泌腫瘤中陰性表達率遠高于陽性率；病理學分級惡性程度高的標本mTOR1、Bcl-2、TSC2、PS6、SSR2、β-catenin的陰性率高，臨床分期進展程度高的標本中，mTOR1、Bcl-2、TSC2、PS6、SSR2、β-catenin的陰性率高。Cox回歸分析及log-rank檢驗分析mTORC1相關蛋白表達陰性是預后不良的獨立影響因素。結論mTORC1相關蛋白在胃腸胰神經內分泌腫瘤中的低表達與病理學分級、臨床分期差、預后不良具有一定的相關性。

mTORC1；胃腸胰神經內分泌腫瘤；預后；表達；相關性

胃腸胰神經內分泌腫瘤是一組以臨床表現到疾病預后均存在著較大差異的惡性腫瘤，表現為低度惡性、緩慢生長及高侵襲性等一系列生物行為學表現[1]，發病率為2.5/10萬。mTOR通路是近年來被發現的與細胞的增殖、血管發生、腫瘤發展具有重要相關性的蛋白，目前關于該通路的mTOR1相關蛋白對胃腸胰神經內分泌腫瘤的預后影響研究較少。本研究通過對胃腸胰神經內分泌腫瘤的臨床分期、病理分型等參數和mTOR1相關蛋白與患者預后之間的關系進行分析，探尋mTOR1相關蛋白是否可以作為潛在的靶點蛋白，以求為患者預后的判斷提供依據。

1 材料與方法

1.1 病例收集

收集我院2010年1月1日至2013年12月31日在我院胃腸胰神經內分泌腫瘤根治術的75例患者資料。所有胃腸胰神經內分泌腫瘤組織標本來源于石蠟包塊(包括10例癌旁組織蠟塊)，經2位不同的病理醫生確診為胃腸胰神經內分泌腫瘤[2]。胃腸胰神經內分泌腫瘤的病理學分級采用2004年WHO的分級[3]，分別為NEC：核分裂象>20/10HPF和(或)Ki-67增殖指數>20%；NETG1：核分裂象<2/10HPF和(或)Ki-67增殖指數≤2%；NETG2：核分裂象2/10HPF～20/10HPF和(或)Ki-67增殖指數3%～20%。根據診斷原發腫瘤時的B超、X線射片、CT、MR等輔助檢查，以及綜合術后病理結果確定胃腸胰神經內分泌腫瘤的TNM臨床分期。患者診斷為胃腸胰神經內分泌腫瘤的平均年齡為(52.94±14.85)歲。病例隨訪中，最短的隨訪14個月，最長的58個月，中位隨訪時間為45個月。

1.2 免疫組織化學

采用經典免疫組化方法。mTOR1相關蛋白(mTOR1、Bcl-2、TSC2、PS6、SSR2、β-catenin)染色極少數在細胞核中也有染色，陽性以細胞質為主。綜合染色強度及陽性細胞百分率進行評分，每張切片觀察5個400倍鏡下視野。陽性細胞計分：0分(視野內無陽性細胞)，1分(視野內陽性細胞<25%)，2分(視野內陽性細胞25%～50%)，3分(視野內陽性細胞>50%)；染色強度計分：0分(陰性)，1分(弱陽性)，2分(中等陽性)，3分(強陽性)。兩項分數相加>2分者為陽性，0～2分者計為表達陰性。

1.3 統計學方法

本研究統計學數據采用SPSS 18.0進行統計分析，精確概率法、卡方檢驗對計數資料進行分析，log-rank檢驗了解生存曲線的差異，Kaplan-Meier法估計生存率，多因素的生存分析采用Cox回歸檢驗，數據分析以P<0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 胃腸胰神經內分泌腫瘤組織中mTOR1相關蛋白表達

在收集的75例胃腸胰神經內分泌腫瘤組織中，mTOR1相關蛋白表達呈陽性與表達為陰性的細胞數比較，差異有統計學意義(P<0.05)。分析胃腸胰神經內分泌腫瘤患者病例中mTOR1相關蛋白表達，發現mTOR1相關蛋白表達在患者年齡、性別等方面無統計學差異(P>0.05)，見表1。

表1 胃腸胰神經內分泌腫瘤組織中mTOR1相關蛋白表達異常/例

注：※為與陽性比較，差異具有統計學意義，P<0.05。

2.2 胃腸胰神經內分泌腫瘤組織中mTOR1相關蛋白的表達與臨床標本的病理學分級及臨床分期的相關性

mTOR1相關蛋白在高級別(低分化)中陰性率最高；低級別(中分化)胃腸胰神經內分泌腫瘤組織中mTOR1相關蛋白的陰性率次之；低度惡性傾向(高分化)陰性率最低，組間差異有統計學意義(P<0.05)，mTOR1相關蛋白的陰性率與胃腸胰神經內分泌腫瘤的浸潤程度相關，從NET期到NEC期依次降低，組間差異有統計學意義(P<0.05)，見表2。

2.3 生存分析

75例胃腸胰神經內分泌腫瘤病例中，分別對mTOR1蛋白表達情況進行生存分析，陽性、陰性平均生存時間分別為86.5和62.0個月，統計學分析2組差異具有統計學意義(P<0.001)。見圖1。

3 討論

神經內分泌腫瘤可發生于全身的各個器官中，在病理學及臨床癥狀上具有共同的特點，但是對于腫瘤類型、發生部位等仍有不同的生物學行為的差異，與激素產物的形成有關，也被歸為功能性腫瘤[4-6]。胃腸胰腺是神經內分泌腫瘤最好發的部位，是一種復雜的異質性腫瘤，該類腫瘤生長迅速，但是腫瘤呈現生長緩慢，且臨床癥狀不明顯等特點，部分腫瘤分泌激素并表現出與激素高分泌相關癥狀，由于該病的發病率不高，因此研究相對較少[7]。

表2 胃腸胰神經內分泌腫瘤mTOR1相關蛋白的表達與臨床標本的病理學分級情況/例

圖1 mTOR1蛋白表達與胃腸胰神經內分泌腫瘤患者生存率的相關性

雖然臨床病理學、WHO分級等參數可以協助預測腫瘤的惡性程度及預后情況，但是對于這一神經內分泌腫瘤，只采用病理學參數很難良好地預測該此類腫瘤的生物學行為，對于腫瘤日后的復發及轉移等預后情況并未得到良好的預測作用[8-9]。因此我們為此需尋找更為敏感的生物學蛋白標記物以探討腫瘤生物學行為，試圖篩選出能夠成為治療靶點的藥物。

已有關于神經內分泌腫瘤的研究相關的通路包括mTOR通路，研究發現該類腫瘤的發生與mTOR通路活化有一定的相關性，不同分級及病理分型的腫瘤患者的預后差異性較大[10]，因此對該通路重要蛋白的研究，有助于更好地預測疾病的轉歸及治療[11-12]。因此本研究重點放在mTOR通路的mTOR1相關蛋白上。mTOR的活化及低表達在多種腫瘤上均得到了證實，上調具有抑制凋亡，促進腫瘤生長及血管發生的作用，因此低表達延長了腫瘤的生存時間，導致預后較差。在本研究中，我們通過對75例胃腸胰神經內分泌腫瘤組織免疫組化染色分析，mTOR1相關蛋白在胃腸胰神經內分泌腫瘤中的陰性表達要遠高于陽性表達，差異具有統計學意義。結果表明mTOR1相關蛋白表達下調與胃腸胰神經內分泌腫瘤的發生可能有密切的關系。

目前國內外研究顯示，mTOR1相關蛋白可能具有維持細胞分化能力或促進細胞分化。研究發現mTOR1相關蛋白在鱗癌干細胞樣細胞中低表達，能夠抑制腫瘤細胞的增殖和轉移[13-15]。上述這些研究結果充分說明，mTOR1相關蛋白與腫瘤的增殖、轉移、干細胞樣特性密切相關。惡性腫瘤中病理學分級往往代表腫瘤惡性的侵襲程度，也代表細胞的分化程度，低分化的惡性程度高，高分化的癌細胞惡性程度相對較低。本研究發現mTOR1相關蛋白的表達在不同病理學分級的胃腸胰神經內分泌腫瘤細胞中陽性率存在差異。另外，本研究分析了mTOR1相關蛋白的表達與胃腸胰神經內分泌腫瘤的臨床分期的關系，發現臨床分期越高，mTOR1相關蛋白陽性率越低，胃腸胰神經內分泌腫瘤早期，mTOR1相關蛋白陽性率最高。通過log-rank檢驗和Cox回歸分析發現，mTOR1相關蛋白陽性表達的患者的預后明顯優于于mTOR1相關蛋白表達陰性的患者。mTOR1相關蛋白的表達是影響胃腸胰神經內分泌腫瘤患者預后一種獨立影響因素，mTOR1相關蛋白的表達下調與胃腸胰神經內分泌腫瘤的惡性程度及預后相關。

本研究未收集mTOR1相關蛋白的表達對胃腸胰神經內分泌腫瘤術后輔助治療對預后的影響，因此我們將在之后的研究中進一步擴大樣本量，詳細收集胃腸胰神經內分泌腫瘤術后輔助藥物治療對胃腸胰神經內分泌腫瘤預后的影響，分析mTOR1相關蛋白的表達在藥物治療效果的差異性和耐藥性中的作用。綜上所述，mTOR1相關蛋白在胃腸胰神經內分泌腫瘤的發生發展中扮演重要的角色，mTOR1相關蛋白可能成為胃腸胰神經內分泌腫瘤的治療的新靶點，對胃腸胰神經內分泌腫瘤診斷及預后有重要的價值。

[1] Kasajima A,Pavel M,Darb-Esfahani S,et al.mTOR expression and activity patterns in gastroenteropancreatic neuroendocrine tumours〔J〕.Endocr Relat Cancer，2010,18(1):181-192.

[2] Jensen RT,Delle Fave G.Promising advances in the treatment of malignant pancreatic endocrine tumors〔J〕.N Engl J Med,2011,364(6):564-565.

[3] 中國胄腸胰神經內分泌腫瘤病理專家組.中國胃腸胰祌經內分泌腫瘤診斷病理學共識〔J〕.中華病理學染志,2011,40(4):257-262.

[4] Raymond E,Dahan L,Raoul JL,et al.Sunitiriib malate for the treatment of pancreatic neuroendocrine tumors〔J〕.N Engl J Med,2011,364(6):501-513.

[5] Yao JC,Shah MH,Ito T,et al.Everolimus for advanced pancreatic neuroendocrine tuinors〔J〕.N Engl J Med,2011,364(6):514-523.

[6] Aguirre A,Cosme A,Bujanda L,et al.Diagnosis,treatment and follow-up of gastric carcinoid tumors.Analysis of 14 cases〔J〕.Rev Esp Enferin Dig,2011,103(9):493-494.

[7] Vos B,Rozema T,Miller RC,et al.Small cell carcinoma of the esophagus:a multicentre Rare Cancer Network study〔J〕.Dis Esophagus,2011,24(4):258-264.

[8] Rindi G,Bordi C,La Rosa S,et al.Gastroenteropancreatic(neuro)endocrine neoplasms:The histology report〔J〕.Dig Liver Dis,2011,43(Suppl 4):S356-S360.

[9] Vos B,Rozema T,Miller RC,et al.Small cell carcinoma of the esophagus:a multicentre Rare Cancer Network study〔J〕.Dis Esophagus,2011,24(4):258-264.

[10] Righi L,Volante M,Rapa I,et al.Mammalian target of rapamycin signaling activation patterns in neuroendocrine tumors of the lung〔J〕.Endocr Relat Cancer,2010,17(4):977-987.

[11] Shida T,Kishimoto T,Furuya M,et al.Expression of an activated mammalian target of rapamycin(inTOR)in gastroenteropancreatic neuroendocrine tumors〔J〕.Cancer Chemother Pharmacol,2010,65 (5):889-893.

[12] Modlin IM,Pavel M,Kidd M,et al.Review article;somatostatin analogues in the treatment of gastroenteropancreatic neuroendocrine (carcinoid) tumours〔J〕.Aliment Pharmacol Ther,2010,31 (2):169-188.

[13] Yao JC,Lombard-Bohas C,Baudin E,et al.Daily oral ever-olimus activity in patients with metastatic pancreatic neuroendocrine tumors after failure of cytotoxic chemotherapy:a phase 11 trial〔J〕.J Clin Oncol,2010,28 (1):69-76.

[14] Yachida S,Vakiani E,White CM,et al.Small cell and large cell neuroendocrine carcinomas of the pancreas are genetically similar and distinct from well-differentiated pancreatic neuroendocrine tumors〔J〕.Am J Surg Pathol,2012,36 (2):173-184.

[15] Jiao Y,Shi C,Edil BH,et al.DAXX/ATRX,MENl,and inTOR pathway genes are frequently altered in pancreatic neuroendocrine tumors〔J〕.Science,2011,331 (6021):1199-1203.

ExpressionandPrognosticResearchmTORC1-relatedProteinintheGastrointestinalandPancreaticNeuroendocrineTumors

ZHAOTao,LEJing,LIChuanjing,etal.

XiaoganAffiliatedHospitalofWuhanUniversityofScienceandTechnology,Xiaogan，432000

ObjectiveTo investigate the correlation between mTORC1-related protein and prognosis in gastrointestinal and pancreatic neuroendocrine tumors.Methods75 cases of gastrointestinal and pancreatic neuroendocrine tumors were selected,immunohistochemical methods was used to detect mTORC1-related protein expression,patients with normal and cancerous tissues beside compared by pathological grade,clinical stage analysis mTORC1-related protein stratification in patients with different expression,using Cox regression analysis and log-rank test to analyze the correlation with prognosis mTORC1 related proteins.ResultsmTOR1 related proteins in the gastrointestinal and pancreatic neuroendocrine tumors was much higher than the negative expression of the positive expression,the difference was statistically significant (P<0.001);high-grade malignant pathology specimens mTOR1,Bcl-2,TSC2,negative rate PS6,SSR2,β-catenin,the high degree of progression of clinical stage samples,mTOR1,Bcl-2,TSC2,PS6,SSR2,negative rate of β-catenin,Cox regression analysis and log-rank test analysis independent factors of mTORC1 negative expression was associated with poor prognosis.ConclusionLow expression of mTORC1-related protein in gastrointestinal and pancreatic neuroendocrine tumors is related with pathological grade,poor clinical staging and poor prognosis.

mTORC1;Gastrointestinal and pancreatic neuroendocrine tumors;Prognosis;Expression;Correlation

(ThePracticalJournalofCancer,2017,32:,1752～1755)

432000 武漢科技大學附屬孝感醫院

10.3969/j.issn.1001-5930.2017.11.004

R736

A

1001-5930(2017)11-1752-04

2016-10-09

2017-04-04)

(編輯：甘艷)