宮頸癌組織PCNA 、Ki-67的表達及其與HPV感染的相關性研究

趙建芳 石 芳

宮頸癌組織PCNA 、Ki-67的表達及其與HPV感染的相關性研究

趙建芳 石 芳

目的探討宮頸癌增殖細胞核抗原(PCNA)、Ki-67表達及其與人乳頭瘤病毒(HPV)感染的相關性。方法

隨機選取72例宮頸病變患者作為觀察組，并以同期40例慢性宮頸炎患者作為對照組，分別應用免疫組織化學S-P法和聚合酶鏈反應法檢測患者宮頸組織HPV感染情況。結果CINⅠ組、CINⅡ組、CINⅢ組及宮頸癌組中PCNA和Ki-67陽性率、強陽性或過表達檢出率均高于對照組(P<0.05)，且CINⅡ組、CINⅢ組及宮頸癌組PCNA和Ki-67陽性率、強陽性或過表達檢出率均高于CINⅠ組(P<0.05)。PCNA表達強度與Ki-67表達強度呈正相關關系(γ=0.713，P<0.05)，且PCNA表達強度和Ki-67表達強度與HPV感染均呈正相關關系(γ=0.701,0.684，P<0.05)。結論PCNA、Ki-67和HPV感染在不同宮頸病變中的表達均存在較大差異，臨床聯合檢測這3個指標，可以提高宮頸病變的診斷率，值得進一步推廣和應用。

宮頸癌；增殖細胞核抗原；Ki-67；人乳頭瘤病毒

宮頸癌是常見的婦科惡性腫瘤之一，其發病率僅次于乳腺癌，且逐漸趨于年輕化，嚴重危害女性的身體健康及生命安全。研究表明，人乳頭瘤病毒(HPV)感染是誘發宮頸病變的主要病因[1]。增殖細胞核抗原(PCNA)、Ki-67是與細胞增殖相關的核抗原，是近年來廣泛應用的細胞增生標記物[2]。其中，PCNA是真核細胞DNA合成所必需的1種酸性核蛋白，在細胞增殖過程中可以直接參與DNA的復制，因此對PCNA進行檢測主要可了解DNA合成情況，可作為腫瘤細胞增殖活性的客觀指標[3]；Ki-67為增殖細胞核相關抗原，易通過免疫組化方法進行檢測，是反映細胞增殖狀態的理想標記物[4]。本次選取近年來我院收治的72例行手術治療的宮頸癌患者作為研究對象，并與同期40例慢性宮頸炎患者的PCNA、Ki-67表達及其與HPV的感染情況進行對比分析，以期為宮頸癌的臨床診斷提供可靠參考。

1 材料與方法

1.1 研究對象與分組

隨機選取我院72例宮頸病變患者作為觀察組，收治時間為2010年8月至2016年8月，均行子宮切除術或宮頸錐切術，年齡26～75歲，其中宮頸癌40例，均為高分化鱗癌，Ⅰ期18例，Ⅱa期22例；宮頸上皮內瘤變(CIN)32例，CIN Ⅰ期16例，CIN Ⅱ期7例，CIN Ⅲ期9例。對照組為同期40例慢性宮頸炎患者。宮頸癌、CIN及慢性宮頸炎患者的納入標準[5-6]：①知情并接受本次研究；②經組織病理學檢查確診，宮頸癌、CIN患者術前活檢確診為CIN及以上病變，慢性宮頸炎患者經術前組織活檢排除宮頸癌前病變；③適合行子宮切除或宮頸錐切術；④術前未進行放療、化療；⑤未合并急性婦科炎癥等其他合并癥。

1.2 方法

檢測病變組織的PCNA、Ki-67抗原表達均采用免疫組織化學S-P法，應用HPV通用引物MY09/11行聚合酶鏈式反應(PCR)檢測病變組織中的HPV感染情況。試劑材料主要有：小鼠抗人單克隆PCNA抗體、兔抗人單克隆Ki-67抗體、S-P 通用型試劑盒(均購于福州邁新生物技術開發公司)，DAB顯色試劑盒(北京中山生物技術有限公司)，PCR反應試劑盒(上海生工生物工程公司)。組織標本以10% 福爾馬林溶液固定，并用石蠟包埋切片，陽性對照為已知陽性鱗癌組織切片，陰性對照由PBS代替一抗。

1.3 結果判斷

閱片均采用盲法，由2～3名經驗豐富的病理科醫生獨立進行，相差范圍若>10%則重新判斷。PCNA、Ki-67陽性為細胞核內出現棕黃色顆粒。結果判斷采用半定量法，分為4個級別：陽性細胞占腫瘤細胞比例<10%為“-”，10%～25%為“+”，26%～50%為“++”，>50%為“+++”；++～+++為強陽性或過表達。

1.4 統計學分析

應用SPSS 13.0統計軟件，計數數據以(n，%)表示，顯著性檢驗經卡方分析或Fisher 確切概率法，等級相關性分析用Spearman相關分析。檢驗水準取0.05。

2 結果

2.1 宮頸組織中PCNA、Ki-67陽性率比較

從表1中可以看出，CINⅠ組、CINⅡ組、CINⅢ組及宮頸癌組織中PCNA、Ki-67陽性率均高于對照組，且差異具有統計學意義(P<0.05)，且CINⅡ組、CINⅢ組及宮頸癌組織中PCNA、Ki-67陽性率均高于CINⅠ組(P<0.05)。

表1 各宮頸組織中PCNA、Ki-67陽性率比較/例

注：①表示與對照組相比較，P<0.05；②表示與CINⅠ組相比較，P<0.05。

2.2 各宮頸組織中PCNA、Ki-67強陽性或過表達檢出率比較

從表2中可以看出，CINⅠ組、CINⅡ組、CINⅢ組及宮頸癌組PCNA、Ki-67檢出率均高于對照組(P<0.05)，且CINⅡ組、CINⅢ組及宮頸癌組PCNA、Ki-67檢出率均高于CINⅠ組(P<0.05)。通過相關分析發現，PCNA表達強度與Ki-67表達強度呈正相關關系(γ=0.713，P<0.05)。

2.3 PCNA、Ki-67各組與HPV感染相關性分析

72例宮頸病變和40例慢性宮頸炎患者PCR檢測結果顯示：HPV陽性64例，HPV陰性48例。經過Spearman分析，PCNA、Ki-67表達強度與HPV感染均呈正相關關系(γ分別為0.701、0.684，P<0.05)，見表3。

表2 各組PCNA、Ki-67強陽性或過表達檢出率比較(例,%)

注：①表示與對照組相比較，P<0.05；②表示與CINⅠ組相比較，P<0.05。

表3 HPV陽性、陰性患者PCNA、Ki-67表達情況/例

3 討論

宮頸癌的發生與發展是1個漸變的過程，宮頸上皮內瘤變(CIN)是宮頸癌的癌前病變，其在發病過程中的重要階段。宮頸上皮細胞轉化為惡性腫瘤細胞時表現為過度增殖和異常分化，必然伴有增殖活性改變，所以評價與細胞增殖相關的標志物的表達水平對宮頸癌和CIN的臨床診斷具有重要意義。

PCNA和Ki-67均是存在于細胞增殖期的蛋白質，是目前最常用的腫瘤增殖標記物。有研究表明，PCNA具有協調轉換細胞周期阻滯、修復損傷DNA的功能[7]，它能夠確切反映細胞增殖的活躍程度，只在正常組織的增殖部位表達，且在細胞周期的不同階段表達有所不同。Ki-67主要表達在增殖細胞的細胞核中，在靜止期細胞不表達，因此不僅能夠用于判斷腫瘤的良、惡性及惡性程度，而且還能用于評價細胞增殖的活性、細胞周期與腫瘤生長、浸潤、復發和轉移等生物學行為與預后的關系[8]。苗龍等[9]通過對胃癌患者腫瘤組織中PCNA和Ki-67的表達進行檢測和分析，認為二者隨著患者病情的加重強陽性表達顯著增多，且陽性表達的范圍逐漸增大。董永學等[10]采用免疫組織化學S-P法對宮頸病變組織標本PCNA、Ki-67的表達進行檢測和分析，認為CIN組織的PCNA、Ki-67表達陽性率高于正常宮頸炎組織，宮頸癌組織的PCNA、Ki-67均存在強陽性或過表達。本次研究結果顯示，不同分期CIN、宮頸癌腫瘤組織的PCNA、Ki-67表達水平不同，且二者的表達陽性率均高于慢性宮頸炎腫瘤組織，與上述文獻報道結論基本一致。此外，CINⅡ組、CINⅢ組及宮頸癌的PCNA、Ki-67陽性率均高于CINⅠ組，PCNA、Ki-67強陽性或過表達用于預測CINⅡ、CINⅢ期病變均具有較高的靈敏度，因此可將PCNA、Ki-67用于對CIN的臨床篩查與預測。

報道顯示[11]，HPV感染與宮頸癌的發生具有密切的關系，其在宮頸癌、CIN和正常宮頸組織中的表達存在統計學意義。目前，宮頸癌的病因及發病機制尚不十分明顯，而HPV被認為是宮頸癌的最主要的影響因素，尤其是高危型HPV在宮頸癌的篩查和預后中具有重要作用[12]。本次研究結果顯示，宮頸組織中PCNA表達強度與Ki-67表達強度呈正相關，且二者的表達強度與HPV感染也呈正相關性，說明了HPV感染與PCNA、Ki-67表達均呈正相關性，因此在檢測HPV感染時，可以聯合PCNA、Ki-67等相關指標，有助于提高檢測的特異性和靈敏度。綜上所述，PCNA、Ki-67和HPV感染在不同宮頸病變中的表達均存在較大差異，臨床中聯合檢測這三個指標，可以提高宮頸病變的診斷率，值得進一步推廣和應用。

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[4] 李 幔.PCNA,Ki67 及 p27 在子宮內膜腺癌中表達的臨床意義及相關性研究〔D〕.鄭州大學,2012.

[5] 齊朝陽,陳 艷,曾 鴻,等.宮頸上皮內腫瘤 P16,P53,Ki67,P63 的表達與 HPV 感染及其臨床意義〔J〕.實用醫學雜志,2011,27(20):3638-3640.

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[7] 陳廷玉,盧春鳳,苗 智,等.宮頸癌 PCNA 和 PTEN 的表達與癌細胞增殖及淋巴結轉移的關系〔J〕.解剖學研究,2010,32 (1):17-20.

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[11] 魏 聰,劉遠程,王友強,等.宮頸病變中 PCNA,Ki-67 的表達及其與 HPV 感染的相關性分析〔J〕.中國婦幼保健,2015,30(22):3873-3876.

[12] 趙 義,楊義軍,涂海健.宮頸病變中 PCNA,Ki-67 的表達及其與高危型 HPV 感染的相關性分析〔J〕.海南醫學院學報,2015,21(4):523-526.

ExpressionofPCNAandKi-67inCervicalCancerandtheCorrelationwithHPVInfection

ZHAOJianfang,SHIFang.

Yan’anTCMHospital,Yan’an,716000

ObjectiveTo investigate the expression of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) and Ki-67 in cervical carcinoma and the correlation with human papilloma virus (HPV) infection.Methods72 cases of cervical lesions patients were selected as the observation group.And 40 cases of chronic cervicitis in the same period as the control group.The HPV infection of cervical cancer were detected by immunohistochemistry S-P method and polymerase chain reaction.ResultsThe positive rates and the strong positive or over expression detection rate of Ki-67 and PCNA in CINⅠ group,CINⅡ group,CINⅢ group and the cervical cancer group were higher than those of the control group(P<0.05).And the positive rates and the strong positive or over expression detection rate of Ki-67 and PCNA in CINⅡ group,CINⅢ group and the cervical cancer group were higher than those of CINⅠ group (P<0.05).The expression intensity of PCNA was positively correlated with the intensity of Ki-67 expression,and the correlation coefficient was 0.713(P<0.05).The expression intensity of PCNA and Ki-67 were positively correlated with HPV infection,and the correlation coefficients respectively were 0.701,0.684(P<0.05).ConclusionThe expression of PCNA,Ki-67 and HPV in different cervical lesions are significantly different.Combined detection of these 3 indicators can improve the diagnosis rate of cervical lesions.It is worthy of further popularization and application.

Cervical cancer;Proliferating cell nuclear antigen(PCNA);Ki-67;Human papilloma virus( HPV)

(ThePracticalJournalofCancer,2017,32:1774～1776)

716000 陜西省延安市中醫醫院

10.3969/j.issn.1001-5930.2017.11.010

R737.33

A

1001-5930(2017)11-1774-03

2016-10-07

2017-04-20)

(編輯：吳小紅)