TAT-DV3-Bcl-2 siRNA促進U251膠質(zhì)瘤細胞凋亡的研究

胡曉芳，劉茂生，盧 巍，李建平，羅江福，陳 躍

(1.遵義醫(yī)學院 珠海校區(qū)人體解剖與組織胚胎學教研室，廣東 珠海 519041；2.遵義醫(yī)學院 珠海校區(qū)臨床醫(yī)學系2016級，廣東 珠海 519041)

基礎醫(yī)學研究

TAT-DV3-Bcl-2 siRNA促進U251膠質(zhì)瘤細胞凋亡的研究

胡曉芳1，劉茂生1，盧 巍1，李建平1，羅江福2，陳 躍2

(1.遵義醫(yī)學院 珠海校區(qū)人體解剖與組織胚胎學教研室，廣東 珠海 519041；2.遵義醫(yī)學院 珠海校區(qū)臨床醫(yī)學系2016級，廣東 珠海 519041)

目的設計合成腫瘤靶向穿膜肽TAT-DV3，聯(lián)合Bcl-2 siRNA，體外實驗研究其對U251膠質(zhì)瘤細胞的作用。方法設計合成特異性Bcl-2 siRNA及靶向肽TAT-DV3，利用靜電作用使兩者結(jié)合。體外培養(yǎng)U251膠質(zhì)瘤細胞，TAT-DV3-Bcl-2 siRNA復合物處理細胞后，激光共聚焦顯微鏡追蹤Bcl-2 siRNA進入細胞的分布。PCR檢測靶基因Bcl-2沉默情況，Western blot檢測Bcl-2蛋白表達；Annexin-V FITC與PI聯(lián)合標記細胞后，流式細胞儀檢測細胞凋亡。結(jié)果激光共聚焦顯微鏡結(jié)果證明TAT-DV3-Bcl-2 siRNA成功進入U251細胞內(nèi)。PCR及Western blot驗證了TAT-DV3-Bcl-2 siRNA沉默了目標基因Bcl-2。利用流式細胞儀進行凋亡檢測，發(fā)現(xiàn)與對照組相比TAT-DV3-Bcl-2 siRNA可以顯著促進U251細胞凋亡。結(jié)論靶向肽TAT-DV3可有效投遞Bcl-2 siRNA進入U251膠質(zhì)瘤細胞，通過降解Bcl-2 mRNA抑制Bcl-2的表達并促進膠質(zhì)瘤細胞的凋亡。

腦膠質(zhì)瘤；siRNA；靶向肽；Bcl-2；U251

RNA干擾技術(shù)(RNAi)作為一種新的治療方法攻克腫瘤為當前研究熱點[1]，siRNA可有效沉默特定基因，但其本身的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)阻礙了基于siRNA的治療方法的發(fā)展，比如分子量大，且自身帶負電荷等，普通脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染效率較低[2-3]。TAT是第一個發(fā)現(xiàn)的穿膜肽，有較強的穿膜作用，DV3是趨化因子受體-4(CXCR4)的結(jié)合區(qū)域,可與腫瘤特異性結(jié)合[4]，以TAT-DV3作為siRNA投遞系統(tǒng)來抑制腫瘤生長尚未見文獻報道，本課題將二者結(jié)合，作為靶向投遞Bcl-2 siRNA進入膠質(zhì)瘤細胞的載體，使siRNA發(fā)揮抑制膠質(zhì)瘤生長的作用。……