Toll樣受體4通過PI3K/Akt信號通路調(diào)節(jié)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞凋亡

陳文明，蹇明輝，趙永超，龍禹哲，劉圍圍，龍仙萍，石 蓓

(遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 心血管內(nèi)科，貴州 遵義 563099)

基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究

Toll樣受體4通過PI3K/Akt信號通路調(diào)節(jié)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞凋亡

陳文明，蹇明輝，趙永超，龍禹哲，劉圍圍，龍仙萍，石 蓓

(遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 心血管內(nèi)科，貴州 遵義 563099)

目的研究Toll樣受體4(TLR4) 對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 (MSCs) 凋亡的影響及其可能的機制。方法本實驗運用脂多糖(LPS)作用于的大鼠MSCs，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)鑒定MSCs；實驗分成4組：對照組、LPS組、TLR4阻斷劑+LPS組、LY294002+LPS組，缺氧處理6h后，用Western blot法檢測TLR4、p-Akt、Akt、Bax、Bcl2、Caspase-3蛋白的表達(dá)變化；流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率。結(jié)果與對照組比較，LPS作用后TLR4的表達(dá)明顯上調(diào)(P<0.01)，p-Akt表達(dá)增加，Bax表達(dá)降低，Bcl-2的表達(dá)上升，Caspase-3表達(dá)減少，且MSCs的凋亡率也減少(P<0.05)；TLR4阻斷劑處理后p-Akt較LPS組減少，Bax表達(dá)上調(diào)，Bcl-2的表達(dá)下降，Caspase-3表達(dá)增加，MSCs的凋亡率也增加(P<0.01)，LY294002預(yù)處理后p-Akt表達(dá)較LPS組明顯降低，Bax表達(dá)顯著上調(diào)，Bcl-2的表達(dá)下降，Caspase-3表達(dá)明顯增加，且MSCs的凋亡率也增加(P<0.01)。結(jié)論TLR4對MSCs的凋亡具有抑制作用，其作用機制可能與激活I(lǐng)P3K/Akt信號通路，繼而抑制Caspase-3活性有關(guān)。

Toll樣受體4；PI3K/Akt信號通路；骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞；細(xì)胞凋亡

心肌梗死(Myocardial Infarction，MI)是臨床常見的危重癥，嚴(yán)重威脅著人類生命和健康。近年來，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal Stem Cells，MSCs)治療心肌梗死，已成為心血管領(lǐng)域的研究熱點[1]。然而在心肌局部組織缺血、缺氧等微環(huán)境和早期炎性反應(yīng)均不利于移植MSCs的存活[2]。Toll樣受體4(Toll-like receptors 4，TLR4)是抵御病原體入侵的先天免疫和特異性免疫必不可少的介質(zhì)，TLR4除了可引發(fā)炎癥反應(yīng)，還可以直接調(diào)控細(xì)胞增殖和細(xì)胞存活[3]。有研究報道，激活的TLR4能影響MSCs的生存、分化、增殖，但其作用機制尚不明確[4]。因此本研究擬采用脂多糖(LPS)刺激 MSCs，初步探討 TLR4能否通過調(diào)節(jié)MSCs 凋亡的作用，提高移植細(xì)胞的成活，為MSCs治療心肌梗死提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 清潔級4周齡SD大鼠，雌雄不限，重50～100 g，由中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院動物中心提供[許可證號SCXK(渝)2012-0005]。……