微小RNA-873-5p通過靶向作用于PYGO2基因?qū)Π螂装┘?xì)胞生長(zhǎng)的影響

王 勇，郭永連，陳 琳，李國(guó)灝，余家俊，程 薇

(1.華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬武漢中心醫(yī)院 泌尿外科，湖北 武漢 430014；2.華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬梨園醫(yī)院耳鼻喉科，湖北 武漢 430077)

臨床醫(yī)學(xué)研究

微小RNA-873-5p通過靶向作用于PYGO2基因?qū)Π螂装┘?xì)胞生長(zhǎng)的影響

王 勇1，郭永連1，陳 琳1，李國(guó)灝1，余家俊1，程 薇2

(1.華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬武漢中心醫(yī)院 泌尿外科，湖北 武漢 430014；2.華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬梨園醫(yī)院耳鼻喉科，湖北 武漢 430077)

目的探討微小-873-5p(miR-873-5p)轉(zhuǎn)染對(duì)PYGO2基因表達(dá)的調(diào)控作用及對(duì)膀胱癌細(xì)胞5637生長(zhǎng)的影響。方法根據(jù)處理不同，膀胱癌細(xì)胞分為對(duì)照組(轉(zhuǎn)染miR-NC)和實(shí)驗(yàn)組(轉(zhuǎn)染miR-873-5p)。qRT-PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染后兩組細(xì)胞中miR-873-5p表達(dá)量。生物信息學(xué)預(yù)測(cè)PYGO2為miR-873-5p可能的靶基因。qRT-PCR檢測(cè)PYGO2 mRNA的表達(dá)。構(gòu)建PYGO2基因的 3’UTR 野生型及突變型序列雙熒光素酶報(bào)告基因載體并進(jìn)行熒光素酶活性檢測(cè)。Western blot檢測(cè)PYGO2及下游靶蛋白的表達(dá)。流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞周期分布，MTS法和集落形成實(shí)驗(yàn)分析細(xì)胞活力和增殖能力。結(jié)果實(shí)驗(yàn)組中miR-873-5p表達(dá)量顯著上升(P<0.01)。雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)結(jié)果顯示PYGO2是miR-873-5p的靶基因。與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞中PYGO2 mRNA水平下調(diào)58.48%(P<0.01)。PYGO2及下游靶蛋白表達(dá)明顯下調(diào)。轉(zhuǎn)染miR-873-5p后，細(xì)胞周期被阻滯在G0/G1期(P<0.01)，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的活力和增殖能力均明顯降低(P<0.05)。結(jié)論miR-873-5p通過干擾膀胱癌細(xì)胞5637中PYGO2基因的表達(dá)，阻滯細(xì)胞周期進(jìn)展，抑制細(xì)胞的增殖，可能成為膀胱癌基因治療的靶標(biāo)分子。

微小RNA；PYGO2；膀胱癌；C-Myc；細(xì)胞周期蛋白D1;CDK4

膀胱癌是世界上第9大最常見的惡性腫瘤。美國(guó)癌癥學(xué)會(huì)預(yù)估美國(guó)在2017年將有79 030例膀胱癌新發(fā)病例和16 870例死亡病例[1]。近年來，針對(duì)膀胱癌的治療主要是部分或全膀胱切除術(shù)以及術(shù)后化學(xué)治療，但是膀胱癌的高復(fù)發(fā)率使得治療效果不理想[2]。分子靶向治療已成為膀胱癌臨床治療研究關(guān)注的熱點(diǎn)[3]。微小RNA(miRNA)是一類長(zhǎng)度約為22個(gè)核苷酸的非編碼小分子RNA，負(fù)責(zé)調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、分化、衰老和凋亡等多種細(xì)胞生物學(xué)行為，研究發(fā)現(xiàn)miRNA在多種腫瘤組織內(nèi)存在異常表達(dá)，起著抑癌或促癌的作用[4-5]。……