淺談水中銅綠假單胞菌盲樣考核的方法與步驟

【摘 要】 國家食品藥品監督管理局為考核檢驗機構的檢驗能力，組織了銅綠假單胞菌的盲樣考核。本文記錄了檢驗銅綠假單胞菌的方法與步驟。

【關鍵詞】 銅綠假單胞菌 盲樣考核 方法

【DOI編碼】 10.3969/j.issn.1674-4977.2017.07.007

1 基本特性

銅綠假單胞菌屬于非發酵革蘭陰性桿菌、假單胞菌屬，因其在感染傷口時形成綠色膿液，在瓊脂培養基形成藍綠色綠膿素，故又名綠膿桿菌。該菌分布廣泛，常存在于正常人腸道、皮膚及呼吸道中，屬條件致病菌，免疫功能低下的人群可致病，如長期服用免疫抑制劑患者、腫瘤放、化療患者、長期使用激素的患者及艾滋病患者等。

1.1 生物學性狀（形態與染色）

革蘭陰性專性需氧桿菌，菌體大小（0.5～1.0）[μm]×（1.5～3.0）[μm]，呈稍彎桿狀或線狀，多見成對或短鏈狀排列，單側有1～3根鞭毛。動力陽性，且運動活躍。

1.2 培養特性

銅綠假單胞菌最適宜生長溫度為35℃，普通培養基上形成光滑濕潤的菌落。血瓊脂平板上形成濕潤、藍綠色有金屬光澤、大而扁平的菌落。在麥康凱瓊脂平板上，可形成典型型、大腸菌樣型、粗糙型、黏液型、侏儒型五種菌落。

銅綠假單胞菌可產色素，如藍綠色綠腺素、綠色熒光素或紅褐色膿紅素。

1.3 生化特性

銅綠假單胞菌氧化酶試驗陽性，但發酵糖類能力低下，氧化葡萄糖獲取能量，不分解乳糖、麥芽糖、甘露糖和蔗糖。枸櫞酸鹽、硝酸鹽還原和精氨酸雙水解酶試驗均陽性，賴氨酸和鳥氨酸脫羧酶試驗陰性。

1.4 鑒別要點

（1）培養后形成藍綠色或熒光色菌落，培養基多見亮綠色染色，血瓊脂平板產生透明溶血環；菌落有生姜味；動力和氧化酶試驗陽性。

（2）不產色素的銅綠假單胞菌（占4%～10%）的鑒定。氧化酶和精氨酸雙水解酶試驗陽性，葡萄糖O/F試驗為氧化型；鞭毛染色呈極端鞭毛（少于3根），動力陽性。

（3）銅綠假單胞菌42[℃]時生長，可區別不能在42[℃]生長的熒光假單胞菌和惡臭假單胞菌。

（4）氧化酶及七葉苷水解陽性、藍綠色色素可以用于與淺黃假單胞菌、棲稻假單胞菌區別。

2 致病性

銅綠假單胞菌的主要致病物質是內毒素，除此之外還包括莢膜、菌毛、外毒素、酶及本身結構成分均可致病。

銅綠假單胞菌是正常菌群，免疫力底下時發生感染，是醫院內感染的重要病原菌，據統計10%的醫源性感染是由銅綠假單胞菌引起的，而燒傷、腫瘤及介入診斷治療的患者感染率更高達30%。感染源主要是污染的醫用器具及帶菌的醫護人員。銅綠假單胞菌在患病人的病灶中，通常與其他毒力較強的細菌共存，但有時也可單獨致病。

銅綠假單胞菌感染部位以受損皮膚黏膜為主，如燒傷、創傷后的皮膚。該菌可引起局部化膿性感染或全身性的感染，引起如尿道炎、下呼吸道感染、中耳炎、角膜炎、胃腸炎、腦膜炎、心內膜炎、骨髓炎等等。銅綠假單胞菌感染率在重癥監護室位于病菌感染率的第2位。艾滋病患者適應性免疫功能嚴重缺陷，因此很容易感染該菌而致病。

3 銅綠假單胞菌盲樣考核的步驟

2016年10月中旬接到國家食品藥品監督管理局組織的水中銅綠假單胞菌盲樣考核樣品。

3.1 樣品接收

樣品正常：10個西林瓶和10個水樣品保存完整，編號清晰。編號分別為2958，2975，2978，2982，2991，2993，2963，2971，2980，2983。確認簽收后按照GB/T 8538-2008《飲用天然礦泉水檢驗方法》中的4.54部分開始樣品的檢測。

3.2 檢驗步驟

3.2.1 樣品的前處理

在生物安全柜內將包裝飲用水中銅綠假單胞菌樣品的瓶子打開，將相同編號的西林瓶內的菌球倒入瓶內（取出干燥球），充分混勻后使用濾膜過濾。將過濾水樣后的濾膜以無菌操作移放在CN瓊脂培養基上，依此法，分別對10件樣品進行混合處理。

3.2.2 培養

將平板置于36℃培養48h，并防止干燥。

3.2.3 結果觀察

CN瓊脂上的菌落有兩種形態，將非藍/綠菌落，在365nm紫外線（使用暗箱式紫外燈）下進行觀查。記錄觀察結果。

3.2.4 確證性試驗

將需做確證性試驗的產熒光（非藍/綠）菌落劃線接種營養瓊脂培養基，36℃培養24h。再將純培養物和陽性對照菌株接種到商品化乙酰胺肉湯生化試劑管中，36℃培養24h。

確認試驗結果：疑似菌落均為陰性。

3.3 結果報告

2958，2975，2978，2982，2991，2993檢出銅綠假單胞菌，2963，2971，2980，2983未檢出銅綠假單胞菌。

作者簡介

高元，研究生，中級職稱，現任錦州市產品質量監督檢驗所微生物室主任。

劉暢，本科，中級職稱，現任錦州市產品質量監督檢驗所中心檢驗部副部長。

柏楊楊，本科，現任錦州市產品質量監督檢驗所微生物室檢驗員。