瑪咖酰胺快速測定方法應用研究

楊 軍，王艷菊，白永文

（云南省麗江市質量技術監督綜合檢測中心，云南 麗江 674100）

瑪咖酰胺快速測定方法應用研究

楊 軍，王艷菊，白永文

（云南省麗江市質量技術監督綜合檢測中心，云南 麗江 674100）

主要以瑪咖中的瑪咖酰胺作為研究對象，通過試驗，建立了快速、高效的瑪咖酰胺液相色譜-串聯質譜測定方法。在研究中所選擇的瑪咖樣品均經由石油醚-超聲輔助進行提取，并運用型號為ZORBAX C18的色譜柱對樣品進行分離，用紫外檢測器進行檢測，同時，將質量分數為0.1%的甲酸作為流動相，運用乙腈-1 mml/L乙酸銨水溶液進行洗脫。最終結果表明，在質量濃度為0.01～10.0 μg/L的瑪咖酰胺中具備線性關系，其定量限為20 ng/kg，檢出限為5.0 ng/kg。其中，加標量分別為0.1、0.2和0.02μg/kg時，回收率保持在92.0%～115.6%，這也進一步說明此方法滿足瑪咖酰胺分析測定要求。

瑪咖；瑪咖酰胺；快速測定；檢出限

瑪咖在我國的云南迪慶、麗江、昭通等地均有分布，而瑪咖酰胺作為瑪咖中的特征化合物，其生物活性呈現出多樣化的特點，對其特征進行測定時，多運用液相色譜方法，但由于瑪咖中蘊含的成分較為復雜，僅采用液相色譜方法測定的雜峰較多，也會干擾瑪咖酰胺的基質。同時，也有相關文獻資料指出，運用液相色譜-高分辨質譜方法可以有效對瑪咖酰胺的定性進行分析。在本文中，對瑪咖中瑪咖酰胺進行測定主要采用現代定量能力比較強的三重四極桿質譜儀，并在此基礎上，結合超高效液相色譜對瑪咖酰胺質譜斷裂的方式展開了研究，進而了解和分析了瑪咖酰胺特征光譜學信息，也為瑪咖中瑪咖酰胺更加深入的研究提供了參考。

1 快速測定實驗

1.1 實驗儀器和材料

1.1.1 實驗儀器

在本次實驗中所需要運用到的儀器有以下幾個：①高效液相色譜儀（配置紫外檢測器），島津LC-20A；②液質聯用儀，島津LCMS-8030；③色譜柱為Waters XTerra C18（規格為250 mm×4.6 mm，5 μm）；④超聲清洗機（功率≥200 W）；⑤旋轉蒸發儀；⑥離心機（可放置50 mL離心管）。

1.1.2 實驗材料

在本次實驗中所涉及到的材料有以下幾種：①分析純的石油醚、色譜純的乙腈和純凈水；②5種瑪咖酰胺對照品（間甲氧基-芐基-亞麻酰胺、芐基-亞麻酰胺、間甲氧基-芐基-亞油酰胺、芐基-亞油酰胺、芐基-十六烷酰胺）；③其他使用的實驗材料的純度都在97%以上。

1.2 實驗方法

先對5種瑪咖酰胺對照品進行稀釋，運用甲醛進行定容得到混合的標準溶液，對溶液進行避光保存；將瑪咖中瑪咖酰胺用石油醚進行超聲輔助提取，旋蒸干燥后乙腈定容，主要運用乙腈對瑪咖酰胺進行溶解，并將之以待測溶液的方式呈現，注入高效液相色譜儀，經反相色譜分離，紫外檢測器檢測。根據保留時間定性、與峰面積的比較進行定量。

5種瑪咖酰胺對照品液相分離示意圖如圖1所示。

圖1 5種瑪咖酰胺對照品液相分離示意圖

2 實驗結果討論

2.1 瑪咖中瑪咖酰胺的質譜研究

運用乙腈-水對5種瑪咖酰胺對照品進行稀釋，并運用一級質譜對5種瑪咖酰胺進行全面掃描，同時，以這些離子分別進行二級質譜掃描，發現含有m/z91碎片離子，通過化學結構展開推測，在m/z91瑪咖酰胺結構中其長鏈脫落之后剩余的芐基基團，如圖2所示。

2.2 瑪咖酰胺快速測定方法的應用

2.2.1 對提取條件的改進

對石油醚、乙腈、甲醛提取溶劑進行對比分析發現，石油醚對提取瑪咖酰胺的應用效果最好，而乙腈和甲醛提取溶液效果相對較差。將超聲波應用到提取過程中，可以提升提取物的分散效率，瑪咖酰胺作為低極性類化合物，可以吸附到細胞其他物質之上，因此，將超聲波運用到其中可以有效對細胞壁進行破壞，使得游離細胞在提取溶劑中溶解，在最后實驗結果中也表明了超聲波能夠發揮很好的輔助效果。

圖2 瑪咖酰胺斷裂方式推導圖

2.2.2 對質譜條件進行優化

在上述中提到運用一級質譜和二級質譜進行掃描，但由于不同的瑪咖酰胺的化學結構裂解的規律不一致，且m/z91在二級質譜掃描中強度比較低，為了提高測定的穩定性，需要選擇強度較高的瑪咖酰胺離子碎片，對其電壓優化之后，得到MRM模式下質譜條件。

2.2.3 對色譜條件進行優化

由于瑪咖中瑪咖酰胺的化學結構中包含了長鏈脂肪酸結構，并且這一結構的化學極性較小，在C18柱上保留的時間比較長，根據實驗顯示結果，將甲醛-水作為測定的流動相，延長了出峰的時間，在這過程中所需要使用的甲醛比例也比較大，因此，在實驗中盡量選擇乙腈，其具有很好的洗脫效果，且縮短了出峰時間。

2.3 線性范圍及檢出限

對5種瑪咖酰胺對照品稀釋成不同的濃度，并根據不同種瑪咖酰胺的峰面積對不同濃度的瑪咖酰胺進行線性回歸。由于瑪咖樣本身含有一定的瑪咖酰胺，且含量高低不同，因此，在定量限和檢出限時，樣品質量為0.5 g，以3倍和10倍信噪比對瑪咖酰胺的定量限和檢出限進行有效判定，最終實驗結果顯示瑪咖酰胺的相關系數較好，瑪咖酰胺的檢出限也比較低，可以滿足瑪咖中瑪咖酰胺快速測定要求。

2.4 精密度及回收率

上述樣品稱取0.5 g，并根據其定量限以1倍、5倍、10倍定量限作為添加濃度，對瑪咖酰胺開展回收實驗。對5種瑪咖酰胺分別進行3次回收實驗，并對其回收率進行計算和記錄。最終結果顯示，瑪咖酰胺的回收率在92.0%～115.6%，相比標準差的范圍在6.1%～12%，符合其測定的要求。

3 結論

本文對瑪咖中瑪咖酰胺的快速測定方法進行了應用研究，主要通過實驗的方式展開，以瑪咖酰胺在高效液相中的特征光譜作為快速測定的基礎，采用超高效液相色譜-串聯質譜方式，選擇石油醚作為瑪咖酰胺的提取溶液，超聲波在其中發揮了輔助作用，并結合MRM監測模式，可以快速、有效地對瑪咖酰胺進行定性和定量分析，從而實現瑪咖中瑪咖酰胺的快速測定分析。

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R284

A

10.15913/j.cnki.kjycx.2018.02.152

2095－6835（2018）02－0152－02

張思楠〕