枸杞提取物對慢性高尿酸血癥的治療作用及機制研究

佳奇

沈陽藥科大學，遼寧 本溪 117004

實驗研究

枸杞提取物對慢性高尿酸血癥的治療作用及機制研究

孫銘劉春雨傅文綺唐營德劉曉琛孫佳奇趙劍*

沈陽藥科大學，遼寧 本溪 117004

目的研究枸杞提取物對氧嗪酸鉀聯合酵母膏致慢性高尿酸血癥小鼠的尿酸(Uric Acid,UA)代謝及黃嘌呤氧化酶(Xanthine Oxidase,XOD)活性的影響。方法KM小鼠予枸杞提取物(10、5、2.5 g/kg) 預防給藥1周，后邊造模邊給藥3周，給藥4周后檢測各組小鼠血清UA、XOD活性、TNF-α及IL-1β水平并進行腎組織病理學檢查。結果與模型組相比，枸杞提取物高、中劑量組小鼠血清UA水平、XOD活性、TNF-α及IL-1β水平明顯降低(P<0.05)。腎小球萎縮情況有明顯好轉。結論枸杞提取物對氧嗪酸鉀聯合酵母膏建立的慢性高尿酸血癥模型有一定療效且高劑量與別嘌醇作用相當，其作用機制可能與抑制炎癥因子TNF-α、IL-1β有關。

痛風；枸杞；氧嗪酸鉀；酵母膏

痛風是一種由于嘌呤代謝紊亂產生過多尿酸及(或)尿酸排泄減少，并在體內蓄積所致的一組代謝性疾病[1]。近年來，痛風的發病率呈上升趨勢，由于高尿酸血癥與痛風、糖尿病、高血壓、冠心病、高脂血癥等很多疾病都有密切的相關性[2]。在經歷了長期的西藥治療痛風的過程中逐漸發現西藥雖能較快改善患者的臨床癥狀，但也僅以糾正高血尿酸為主要目的，且需長期甚至終身服藥[3]。目前，西藥不良反應較多無法達到安全理想的治療目的，而中醫藥治療不良反應小且效果明顯，逐漸開始被重視起來。例如張氏等[4]探討痛風靈方對痛風的治療；艾氏等觀察骨洗方配合加味四妙散治療急性痛風性關節炎患者臨床治療效果等[5]。查閱中藥治療痛風的古方中發現，許多治療痛風的方劑中均含有枸杞，故推測枸杞可能對痛風具有一定療效。枸杞提取物是從茄科枸杞屬枸杞中提取的一類有效成分，主要藥用成分有枸杞多糖、甜菜堿、類胡蘿卜素、黃酮、維生素等[6]。現將實驗探究單方枸杞對酵母膏聯合氧嗪酸鉀致慢性慢性高尿酸血癥模型動物的影響及作用機制報告如下。

1 儀器與材料

1.1 實驗動物 6周齡雄性昆明(KM)種小鼠,18～22g，SPF級，許可證號：SCXK(遼)2015-0001共48只，由沈陽藥科大學實驗動物中心提供。

1.2 藥品與試劑 枸杞子(批號：16111601，國藥樂仁堂河北藥業有限公司)；別嘌醇(批號：20161122，世貿天階制藥(江蘇)有限責任公司)；氧嗪酸鉀(批號：lotM0123A，美侖生物)；酵母膏(批號：20160102，北京奧博星有限責任公司)；血尿酸測定試劑盒、黃嘌呤氧化酶檢測試劑盒(南京建成生物有限公司)；TNF-α、IL-1β試劑盒(博士德生物有限公司)。

1.3 儀器 TDL-80-2B低速臺式離心機(上海安亭科學儀器廠)；Multiskan Mk3酶標儀(美國Thermo公司；SAFA1004電子分析天平(上海精科公司)。

2 方法

2.1 枸杞浸膏的制備 稱取100 g枸杞加入9倍體積的蒸餾水常溫浸泡30min，后煮沸10min，用三層紗布濾出藥渣；將濾出的藥渣加7倍體積的水大火煮沸10min，去渣。將兩次液體合并濃縮至80 g左右，放入65℃烘箱中2d即得。稱取的浸膏用蒸餾水溶解。

2.2 含酵母膏小鼠飼料制備 酵母膏與普通小鼠飼料按照1∶3充分混勻后重新壓制，冷凍后，給予該實驗組小鼠自由飲食。

2.3 慢性高尿酸血癥模型建立 氧嗪酸鉀250 mg/kg灌胃聯合含25%酵母膏飼料造模3周。

2.4 小鼠分組與處理 雄性昆明(KM)小鼠48只適應性飼養3d后，取48只雄性KM小鼠按體重隨機分為6組:模型組、空白組(等量蒸餾水)、別嘌醇組(40 mg/kg)、枸杞高劑量(10 g/kg)治療組、枸杞中劑量(5 g/kg)治療組、枸杞低劑量(2.5 g/kg)。除模型組外每組按照0.2 mL/10g灌胃給予相應劑量藥物，每天1次，連續灌胃6d，休1d。1周后開始造模，除空白組外每組再給予氧嗪酸鉀(250 mg/kg)灌胃聯合含25%酵母膏飼料造模3周，每日上午10∶00給予治療藥物，4 h后給予氧嗪酸鉀灌胃，酵母膏飼料不間斷供應。造模三周后小鼠取血后處死，下腔靜脈取血，同時取出腎臟。血液樣本室溫靜置3h后3000 r/min離心10 min取血清，上清液-20 ℃保存，一周內用于檢測各項指標；組織樣本固定于中性4%的多聚甲醛溶液中，做病理切片。

3 結果

3.1 對血清尿酸、血清黃嘌呤氧化酶含量的影響 黃嘌呤氧化酶是一種多功能的黃素蛋白酶，可催化次黃嘌呤在鉬喋呤中心氧化生成黃嘌呤，進而生成尿酸，是體內尿酸代謝的關鍵酶[7-8]。因此，檢測慢性高尿酸血癥的最重要的指標，通過抑制黃嘌呤氧化酶,能夠有效降低血漿尿酸水平。與空白組相比，模型組小鼠血清尿酸、XOD濃度明顯增高(P<0.05)，表明造模成功。與模型組比較，別嘌醇組(陽性藥)小鼠血清尿酸、XOD濃度明顯降低(P<0.01)，枸杞中(P<0.05)、高劑量組(P<0.01)小鼠血清尿酸、XOD濃度明顯降低，且枸杞高劑量組和枸杞中劑量組與別嘌醇組相比無統計學差異；別嘌醇組與空白組相比無統計學差異(P>0.05)，以上表明陽性藥效果明顯，枸杞各劑量組均能不同程度的降低高尿酸血癥小鼠血清尿酸、XOD含量且高劑量效果最佳，對氧嗪酸鉀聯合酵母膏建立的慢性高尿酸血癥有一定療效。見表1。

表1 枸杞提取物對高尿酸血癥小鼠血清尿酸、XOD含量的影響

注：與空白組相比，*P<0.05；與模型組相比，#P<0.05,##P<0.01； 與別嘌醇組相比，△P<0.05。

3.2 對血清TNF-α、IL-1β含量的影響 急性痛風性關節炎的致炎因子是尿酸鹽結晶體(NUS)，這種結晶體能刺激局部組織釋放出大量TNF-α、IL-1β等多種炎癥介質與致炎因子，引起關節周圍廣泛的炎癥[9]。IL-1β在中性粒細胞趨化、激活過程中起重要作用，是調節炎癥的始動因素和炎癥反應的重要介質[10]；TNF-α由巨噬細胞、單核細胞經致炎因子刺激后釋放，可引起細胞死亡和組織損傷。綜上表明枸杞對慢性高尿酸血癥的作用可能與降低血清中這兩種炎性因子含量有關。由表2可知，枸杞中、高治療組與模型組相比存在明顯差異(P<0.01)，說明枸杞具有降低TNF-α、IL-1β兩種炎性因子的作用且高劑量效果最佳。

表2 枸杞提取物對高尿酸血癥小鼠血清TNF-α、IL-1β含量的影響

注：與空白組*P<0.05,**P<0.01； 與模型組比較，#P<0.05,##P<0.01；與別嘌醇組比較，△P<0.05,△△P<0.01。

3.3 腎臟病理組織學檢查 腎組織切片結果表明：空白組小鼠腎組織結構完好，無明顯病變和炎癥現象。模型組小鼠腎組織可見腎小球萎縮跡象，與空白組相比具有明顯差異，說明造模成功。陽性藥組(別嘌醇)腎小球萎縮情況較模型組有明顯好轉但仍與空白組有差異。枸杞高、中、低劑量組與模型組相比均有好轉，高劑量組效果最佳并且高劑量組與陽性藥組相比無明顯差異。

4 討論

化學藥物治療痛風的研究還在不斷進行中，但至今仍然沒有一種不良反應小、安全可靠的藥物問世，因此從中醫藥領域的開發開始逐漸被研究者們所關注。枸杞作為一種藥食同源的中藥，首先解決了不良反應多、無法長期無損害服用的問題；其次，在民間多種偏方和方劑中都含有枸杞這一組分，反映了枸杞可能在治療痛風上發揮了一定的作用。盡管國內外學者對枸杞的研究很多，但筆者未見文獻報道有其對抗痛風作用的研究，希望通過本次實驗，對研發治療痛風更加安全有效的藥物提供參考。實驗研究結果顯示，枸杞高(10 g/kg)、中(5 g/kg)劑量組均可明顯降低酵母膏聯合氧嗪酸鉀致慢性高尿酸血癥小鼠血清中尿酸、XOD及TNF-α、IL-1β兩種炎性因子的含量。并且呈劑量效應關系，高劑量組的治療效果與陽性藥別嘌醇相比無明顯差異。證實了枸杞提取物對氧嗪酸鉀聯合酵母膏建立的慢性高尿酸血癥有一定療效。腎組織病理學檢查顯示：模型組與空白組相比有明顯差異，表明造模成功。枸杞提取物能夠明顯恢復慢性高尿酸血癥造模所致的腎小球萎縮情況，并且高劑量組(10 g/kg)恢復情況與陽性藥(別嘌醇)相比無明顯差異。但是實驗所有受試藥物均無法完全恢復腎組織的損傷，表明慢性高尿血酸癥對小鼠的腎臟的損傷在一定程度上是不可逆轉的。從以上結果綜合分析，枸杞提取物一方面可以降低黃嘌呤氧化酶含量減少尿酸生成，減少炎癥因子產生緩解炎癥作用，另一方面可以一定程度的恢復慢性高尿酸血癥對小鼠腎臟的損傷，從而達到治療痛風緩解痛風炎癥的作用。

[1]顏海燕,馬穎,劉梅,等.雞矢藤提取物對酵母膏和氧嗪酸鉀致小鼠高尿酸血癥的影響[J].安徽醫科大學學報，2007(6):676-678.

[2] Kong LD，Zhou J，WenY L，et a1．Aesculin possessespotent hypouficemic action in rodents but is devoid of xan thine oxidase/dehydrogenase inhibitory activity[J]．Planta Med，2002，68(2)：l75 -178．

[3] 李慧．五藤痛風飲對痛風性腎病模型大鼠血尿酸/膽固醇及甘油三酯的影響[D].哈爾濱:黑龍江中醫藥大學，2013．

[4]張榮華,張春,唐怡,等.痛風靈方對急性痛風時VCAM-1表達影響的實驗研究[J].中國中醫急癥，2006(9):1011-1012.

[5]艾亮,陳柳丹.骨洗方配合加味四妙散治療急性痛風性關節炎的臨床觀察[J].中國處方藥，2016(11):89-90.

[6]鄭國琦,胡正海.寧夏枸杞的生物學和化學成分的研究進展[J].中草藥，2008(5):796-800.

[7] Ken O，Koji M，Russ H，et a1．The crystal structure ofxanthine oxidoreductase during catalysis： implications forreaction mechanism and enzymeinhibition[J]. Proc NatlAcadSciUSA, 2004(101):7931-7936．

[8]Ojha R，Singh J，Ojha A，et a1． An updated patent review：xanthine oxidase inhibitors for the treatment of hyperuricemiaand gout(2011-2015)[J]．Expert Opin Ther Pat，2017(27)：311-345．

[9]王紅梅,楊中華,張明,等.急性痛風性關節炎的炎癥機制研究進展[J].國外醫學: 老年醫學分冊，2005(3):124-127.

[10]姚紅,楊飛燕,劉昌盛,等.濕痹通對大鼠急性痛風性關節炎模型抗炎作用機制的探討[J].湖南中醫藥大學學報，2012(7):15-18.

EffectandMechanismofChineseWolfberryExtractonSerumMetabolicSubstancesinMicewithChronicHyperuricemia

SUN Ming LIU Chunyu FU Wenqi TANG Yingde LIU Xiaochen SUN Jiaqi ZHAO Jian*

Shenyang Pharmaceutical University，Benxi 117004，China

ObjectiveTo investigate the influence of the Chinese wolfberry extract on the metabolism of uric acid(UA)and the activity of xanthine oxidase (XOD) in mice with chronic hyperuricemia induced by combination of oteracil potassium and yeast extract.MethodsMices (KM) were prevented with Chinese wolfberry extract(10、5、2.5 g/kg)for one week.Then the mices were built the model for three weeks while were given medicine. After fourweeks of administration, serum UA levels,the activities of XOD, TNF-α levels and IL-1β levels of mice were measured and the histological analysis of mices’kidney tissues were examined.ResultsCompared with the model group, the serum UA levels, XOD activity, TNF-α levels and IL-1β levels of high and medial group mice were significantly reduced(P<0.05). The situation of glomerulus atrophy was remarkably better.ConclusionThe Chinese wolfberry extract exerted certain curative effect on mice with chronic hyperuricemia induced by combination of oteracil potassium and yeast extract and high dose of the wolfberry extract was comparative to the positive medicine Allopurinol in curative effect.The possible mechanism is related with the reduction of inflammatory factors of TNF-α and IL-1β.

Gout; Chinese Wolfberry;Oteracil Potassium; Yeast Extract

沈陽藥科大學2016年度大學生創新創業訓練計劃項目(201610163075)。

孫銘(1996-)，女，漢族，本科生在讀，研究方向為藥學。E-mail：1970603760@qq.com

趙劍(1977-)，男，漢族，博士研究生，副教授，研究方向為內分泌藥理與毒理。E-mail：zll0625@sohu.com

R285.5

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1007-8517(2017)24-0035-03

2017-11-14 編輯：程鵬飛)