氣相色譜法測定葉菜類蔬菜上的殺蟲雙

朱慧敏 蒲云月

（蘇州出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫綜合技術(shù)中心 蘇州華博日化品檢測服務(wù)有限公司，江蘇蘇州 215104）

殺蟲雙是由貴州化工研究所于1976年研發(fā)出的一種廣譜性殺蟲劑。殺蟲雙是沙蠶毒類殺蟲劑的一種，對人畜毒害相對較低，無致畸、致癌作用，主要運用于麥類、蔬菜、水果、水稻等農(nóng)作物，但過量或不當(dāng)使用也會產(chǎn)生藥害。從文獻來看，目前關(guān)于殺蟲雙檢測方法的研究并不是很多，最為常見的是帶有火焰光度檢測器的氣相色譜法、氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法以及高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法。由于殺蟲雙與另一種沙蠶毒素殺蟲劑殺蟲單結(jié)構(gòu)十分相似，用氣質(zhì)或液質(zhì)方法比較繁瑣，而且葉菜類蔬菜的基質(zhì)在氣相色譜儀中相對比較簡單，因此本研究選用氣相色譜法。

殺蟲雙是雙鈉鹽的一種，極易溶于水，可溶于95%的熱乙醇、無水乙醇以及甲醇。殺蟲雙在堿性條件下可轉(zhuǎn)化為沙蠶毒素，通過GC-FPD進行檢測，測定葉菜類樣品中殺蟲雙的殘留量。本文主要探討了樣品前處理過程中遇到的一些問題以及創(chuàng)建檢測方法時各項條件的選擇，并比較了幾類葉菜殺蟲雙的回收情況，此方法相對比較簡單，定量準(zhǔn)確度也相對較高。這樣在讓消費者健康得到保障的同時，也為國家制定相應(yīng)的檢出限及定量限提供技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 試劑和材料

純度93.5%殺蟲雙標(biāo)準(zhǔn)品、純度97.5%沙蠶毒素標(biāo)準(zhǔn)品，Dr.Ehren.storfer公司；三氯甲烷、甲醇、石油醚，均為色譜純；無水乙醇，優(yōu)級純；硫化鈉、無水硫酸鈉、鹽酸、氫氧化鈉，均為分析純。

青菜、娃娃菜、生菜、菠菜，均購于當(dāng)?shù)爻小?/p>

1.2 儀器

梅特勒天平；pH計；Agilent氣相色譜儀；漩渦震蕩儀；離心機；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器；超純水儀；超聲儀；氮吹儀；移液槍。

1.3 樣品前處理

均勻制樣，稱取5 g（精確至0.01 g）葉菜類樣品于50 mL的離心管中，加入0.1 mol/L的鹽酸溶液30 mL，漩渦震振蕩提取2 min后水浴超聲1 h，取出后以7 000 r/min離心3min，將上清液倒入50 mL離心管中，以便完成后面試驗步驟。

將上述上清液的pH用鹽酸溶液（0.1 mol/L）和氫氧化鈉溶液（0.1 mol/L）調(diào)節(jié)至8.5～9.0，然后向樣液中加入2 mL的硫化鈉溶液（0.1 mol/L），放置過夜，使得殺蟲雙轉(zhuǎn)化為沙蠶毒素。

用20 mL的三氯甲烷與無水乙醇（95∶5）來回萃取衍生后的溶液3次，萃取時間每次應(yīng)不少于3 min，然后7 000 r/min離心3 min，靜置分層，合并下層三氯甲烷層經(jīng)無水硫酸鈉濾于圓底燒瓶中，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中45℃旋轉(zhuǎn)濃縮至10 mL，經(jīng)吸附劑（PAS/C18/GCB）凈化后離心取上清液，氮氣吹干。用甲醇定容至1 mL，待測定。

1.4 氣相色譜條件

色譜柱：Aglient，HP-5，30 m×0.32 mm×0.25 μm；

進樣量：1.0 μL，恒壓不分流進樣；

柱溫程序：60℃，以40℃/min升到170℃，以10℃/min升到270℃，保持1 min。

在此條件下，沙蠶毒素的保留時間如圖1所示，以保留時間定性，峰面積外標(biāo)法定量。

圖1 1.0 μg/mL沙蠶毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖

1.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精確稱取沙蠶毒素草酸鹽0.016 0 g，以甲醇溶解并稀釋定容至100 mL，每毫升溶液中含沙蠶毒素100 μg。將上述標(biāo)準(zhǔn)溶液，用甲醇配制成0.5 μg/mL、 1.0 μg/mL、 2.0 μg/mL、 3.0 μg/mL、4.0 μg/mL、5.0 μg/mL 濃度系列的沙蠶毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液進行測定，以沙蠶毒素質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖2所示。

圖2 沙蠶毒素標(biāo)準(zhǔn)曲線

1.6 回收試驗

按照上述方法，取青菜、娃娃菜、生菜、菠菜樣品進行回收試驗，分別設(shè)0.238 mg/kg、0.476 mg/kg、2.380 mg/kg 3個添加水平，每個添加水平做6個平行，結(jié)果見下頁表1。由表1可知，在0.238 mg/kg～2.380 mg/kg添加水平范圍內(nèi)，殺蟲雙的平均回收率為83%～110%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差 RSD 為 1.65%～4.17%（n=6）。

2 結(jié)果與分析

2.1 提取劑和萃取劑的選擇

在其他前處理條件相同的情況下，分別選擇濃度為0.1 mol/L、0.5 mol/L、1.0 mol/L、2.0 mol/L的鹽酸溶液進行提取，并比較其對回收率的影響，結(jié)果顯示鹽酸濃度的變化對其回收率幾乎無影響，為節(jié)約試劑，選擇0.1 mol/L的鹽酸溶液為提取劑。殺蟲雙易溶于水，可溶于甲醇、乙醇、二甲基亞砜、三氯甲烷等，在丙酮、乙醚、乙酸乙酯里溶解度低。萃取時，分別比較了三氯甲烷、石油醚、三氯甲烷-無水乙醇（90∶10）的萃取效果。結(jié)果顯示三氯甲烷∶無水乙醇（90∶10）的萃取效果明顯高于石油醚和三氯甲烷，故選三氯甲烷∶無水乙醇為萃取劑，又進一步研究了不同比例的三氯甲烷與無水乙醇（95∶5、90∶10、85∶15、80∶20、75∶25）作為萃取劑的萃取效果，結(jié)果如圖3所示。綜合考慮，最終選用三氯甲烷與無水乙醇（95∶5）做萃取劑。

表1 添加、回收率與重現(xiàn)性實驗結(jié)果表

圖3 不同萃取劑對回收率的影響

2.2 衍生條件的選擇

分別比較了溶液pH值、硫化鈉溶液的濃度以及衍生化反應(yīng)時間對回收率的影響，結(jié)果顯示，溶液pH為8.5～9.0，硫化鈉溶液濃度為0.1 mol/L，衍生時間為10 h時，衍生化反應(yīng)較完全，回收率較高。

2.3 凈化條件的選擇

分別用20 mL的三氯甲烷與無水乙醇（95∶5）來回萃取衍生后的溶液3次，每次萃取時間不少于3 min，7 000 r/min離心3 min，靜置分層，合并下層三氯甲烷層經(jīng)無水硫酸鈉濾于圓底燒瓶，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中45℃旋轉(zhuǎn)濃縮至10 mL，然后進行凈化。由于蔬菜中色素含量較高，基質(zhì)較為復(fù)雜，查閱參考文獻發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)在常用的凈化方法主要為吸附劑（PAS/C18/GCB）凈化和SPE柱凈化。比較后發(fā)現(xiàn)兩者區(qū)別不大，本著過程簡單化的原則選擇吸附劑（PAS/C18/GCB）凈化。

3 結(jié)論

本文結(jié)合葉菜類蔬菜的特性和殺蟲雙的理化性質(zhì)，展開了氣相色譜法測定葉菜類蔬菜上的殺蟲雙殘留的分析方法研究。對青菜、娃娃菜、生菜、菠菜等葉菜類蔬菜上殺蟲雙農(nóng)藥殘留的提取、萃取、衍生、凈化過程中的各種影響因素進行優(yōu)化，選擇出最優(yōu)的檢測條件，提高檢測效率。該方法前處理快速、簡單，定量方法準(zhǔn)確，成本相對較低，能夠滿足對葉菜類蔬菜上殺蟲雙農(nóng)藥殘留的快速檢測。

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