高效液相色譜法同時測定食品10種合成著色劑

□ 羅長琴 重慶市萬州食品藥品檢驗所

1 材料選擇與方法

1.1 儀器選擇與試劑

本次實驗中選擇的儀器是高效譜相色譜儀。合成著色劑的標液為日落黃、亮藍、檸檬黃、莧菜紅以及胭脂紅，為0.5 mg/mL。80%的誘惑紅為SIGMA-ALDRICH。甲醛是液相色譜淋洗液，60 mL的甲醛與40 mL的甲酸進行混合，蒸餾水與20%的檸檬溶液進行調節(jié)，將pH值調為6。其他選擇的試劑是分析純。

1.2 溶液配制方法

進行不同濃度的標準物質儲備液的配制工作，喹啉黃為0.97 mg/mL，亮藍為0.25 mg/mL，日落黃、檸檬黃、靛藍、胭脂紅、胭脂紅與莧菜紅為0.5 mL，新紅為0.75 mg/mL，誘惑紅為0.8 mg/mL，選取2 mL的儲備液放置到50 mL的量瓶之中，加水混合均勻以后將其配制成標準溶液。基于此繪制相應的峰面積與標準曲線。

1.3 樣品處理方法

在樣品處理方法上，首先配制樣品的溶液，根據聚酰胺吸附法進行色素的提取工作，樣品濃縮之后加水進行溶解定容，在包括赤蘚紅的樣品中運用50%的甲醇進行溶解定容，之后進行HPLC分析。

1.4 液相色譜分析條件

本次實驗中的色譜柱為Agilent-ZORBAXSB-C 5μm，4.6 mm×250 mm，有機相為甲醇：乙腈（3∶1），進行梯度洗脫工作，通過多通道檢測，最終達到的波長：亮藍為625 nm，靛藍為290 nm，新紅、赤蘚紅與莧菜紅為529 nm，檸檬黃與喹啉黃為428 nm，胭脂紅與誘惑紅為507 nm，日落黃為483 nm。

2 結果

2.1 最低檢測限

選取5 g的空白樣品加上標準溶液，加水之后定容到25 mL，之后進行色素的提取，運用HPLC法進行測定，最終的最低檢出限分別為喹啉黃是0.1 mg/kg，亮藍是0.03 mg/kg，新紅是0.9 mg/kg，日落黃、檸檬黃、胭脂紅、靛藍與莧菜紅是0.06 mg/kg，赤蘚紅是0.08 mg/kg，誘惑紅是0.10 mg/kg。

2.2 精密度實驗

選取碳酸飲料樣品加上一定量的混合標準溶液將其制成模擬樣品，通過8次測定，得出相應的標準偏差，可以得到赤蘚紅的標準偏差為5.7%，檸檬黃為2.2%，喹啉黃為3.5%，新紅為2.2%，亮藍為1.8%，靛藍為3.9%，誘惑紅為1.9%，日落黃為1.3%，莧菜紅為1.6%，胭脂紅為1.4%。

3 討論

3.1 流動相

本次實驗中采用了梯度洗脫的方式分離十種合成著色劑，流動相的選擇中使用甲醛+0.02 mol/L乙酸銨的情況下，能夠很好地分離前七種著色劑，但是在后三種著色劑中難以實現(xiàn)有效地分離。如果將流動相設置為甲醛：乙晴（3∶1）為+0.02 mol/L乙酸銨的情況下能夠充分地分離全部的10種著色劑[1]。

3.2 波長的測定

如果運用254 nm方法測定不同種類的著色劑，難以達到比較高的靈敏性與特異性，同時食品中具有的雜質成分也影響了著色劑的測定。為此可以首先測定最佳梯度，有效優(yōu)化波長情況。在不同染色劑的波長中可以運用二級管陣列檢測器多通道進行有效檢測，這能夠提升亮藍等各種著色劑的特異性與靈敏性，并且減少梯度洗脫過程中基線漂移現(xiàn)象的發(fā)生。

3.3 測定喹啉黃

喹啉黃一般是在配制酒中進行使用，最多使用量應當控制在0.1 g/L，在巧克力等食品中禁止使用。目前，在對其的檢測中沒有固定的方法，因此應當加強對喹啉黃檢測的研究。喹啉黃分子比較難以溶于水，在食品添加劑中使用的是喹啉黃磺酸鈉鹽，能夠實現(xiàn)不同磺酸鹽的有效混合。在本色譜條件下具有兩個色譜峰，根據HPLC-MS，具有2個色譜峰與質譜圖比較相似，在352 m/z條件下能夠達到最高的離子流量強。在定量指標中可以設置為2個峰的面積，同樣能夠展現(xiàn)比較良好的線性關系[2]。

3.4 測定赤蘚紅

在色素洗脫完成之后進行濃縮與水定容，運用0.45 μm濾膜進行過濾，運用HPLC進行測定。在進行精密度與回收率實驗過程中，在水定容之后的樣品溶液中存在紅色沉淀現(xiàn)象。通過分離沉淀步驟，能夠使用甲醛進行溶解，最終檢測出赤蘚紅，它是一種四碘熒光素鈉鹽，比較容易溶于水，溶解性比較容易受到溶液pH值的影響。在樣品中放入一定量的赤蘚紅，可以使用50%的甲醛進行定容。在濾膜過濾過程中能夠吸附色素，在過濾過程中色素容易發(fā)生改變，因此應當選擇吸附作用比較小的濾膜。

4 結語

本文在對食品中10種合成著色劑的檢驗中采用了多波長與梯度脫洗的方式，具有比較高的靈敏度與精確度，實驗中受雜質峰的干擾比較小，能夠比較充分地分離樣品峰，從而有效分析食品中的合成著色劑。

[1]高云.高效液相色譜法測定食品中10種合成著色劑的含量[J].食品安全導刊, 2016(15):95-96.

[2]李 婷 ,王 強 ,陳 然 ,等 .固 相萃取-高效液相色譜法同時測定糖果中9種人工合成著色劑[J].廣東化工,2016(14):225-226.