HPLC法測定雙氯芬酸鈉鹽酸利多卡因注射液的有關物質

李春盈　張玉英（廣州市藥品檢驗所　廣州　510160）

HPLC法測定雙氯芬酸鈉鹽酸利多卡因注射液的有關物質

李春盈張玉英（廣州市藥品檢驗所廣州510160）

目的：建立HPLC法測定復方制劑雙氯芬酸鈉鹽酸利多卡因注射液中的有關物質。方法：采用反相高效液相色譜法，以自身對照法計算雙氯芬酸鈉鹽酸利多卡因注射液有關物質的量。用C18（250mm×4.6mm，5μm）色譜柱，以甲醇-4%冰醋酸溶液（65∶35）為流動相，流速1.0mL/min，于波長為245nm處檢測。結果：雙氯芬酸鈉與利多卡因雜質完全分離，有關物質的線性回歸方程為A=22.139×C+ 2.3422，相關系數為r=0.9995（n=5）；方法的最低檢出限為0.0089%。結論：實驗證明該法簡便快捷，能準確地測定樣品的有關物質。

反相高效液相色譜法 雙氯芬酸鈉鹽酸利多卡因注射液 有關物質

雙氯芬酸鈉鹽酸利多卡因注射液是一種具有抗炎和止痛作用的復方制劑。雙氯芬酸鈉的主要作用機制為抑制環氧化酶活性，臨床研究結果證明，該組分是有效、安全的非甾體類抗炎藥。利多卡因屬于局部麻醉藥，具有快速止痛作用。雙氯芬酸鈉與利多卡因的復方制劑，不僅能提高雙氯芬酸鈉在溶液中的溶解性和穩定性，充分達到治療效果，還可有效地減少注射點疼痛，減少注射部位組織損傷，增強鎮痛效果。文獻［1］報道肌注本品致過敏性休克等不良事件，本品為復方制劑，雙氯芬酸鈉在酸、堿、氧化、光照、高溫條件下穩定性較差，鹽酸利多卡因相對穩定。筆者承擔了中國食品藥品檢定研究院委托的該品種標準轉正工作，現借標準轉正之機，對有關物質檢查方法及限度進一步提高。雙氯芬酸鈉鹽酸利多卡因注射液有進口藥品注冊標準JX20050125及國內2家企業試行標準，現版《美國藥典》［2］和《英國藥典》［3］均無收載本品復方制劑。筆者采用高效液相色譜法，能準確、快捷地測定復方中的有關物質，該方法專屬性強、靈敏度高、準確度好，現匯報如下：

1　儀器和試藥

1.1儀器：電子天平（德國賽多利斯CPA225D）、高效液相色譜儀（美國安捷倫1200型）。

1.2藥品與試劑：雙氯芬酸鈉鹽酸利多卡因注射液［某制藥廠提供，批號：11042315201，規格：2mL：雙氯芬酸鈉75mg與鹽酸利多卡因（以利多卡因計）20mg］，有關物質Ⅰ、有關物質Ⅱ和有關物質III（均由諾華制藥有限公司北京分公司提供）冰醋酸、磷酸、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉（均為分析純，均由廣州化學試劑廠提供）、甲醇和乙腈（均為色譜純，均由MERCK提供）。

2　方法與結果

2.1色譜條件：色譜柱為C1（8250mm×4.6mm，5μm）；流動相為甲醇-4%冰醋酸溶液（65∶35）；流速為1.0mL/min；進樣量為20μL；檢測波長為245nm。

2.2系統適用性試驗：取雙氯芬酸鈉對照品適量，用水制成每1mL中約含1mg的溶液，取該溶液暴露于紫外光燈（254nm）下照射15min，溶液作為系統適用性試驗溶液。

2.3色譜行為：在上述“2.1”項下色譜條件，記錄色譜圖，在與雙氯芬酸鈉相對保留時間約0.8h處出現一雜質峰，雜質峰和雙氯芬酸鈉峰的分離度應不小于6.0，理論板數按雙氯芬酸鈉峰計算應不低于5000，見圖1。

2.4方法專屬性：取雙氯芬酸鈉原料，用適量甲醇溶解后用水稀釋成每1mL中約含37.5mg的溶液，作為貯備液。取貯備液1mL，加入0.1mol/L鹽酸溶液1mL，在水浴中加熱30min，放冷，用0.1mol/L氫氧化鈉溶液調節至中性，用甲醇稀釋至50mL，即得酸破壞性溶液；以0.1mol/L氫氧化鈉溶液進行堿破壞性試驗，并采用0.1mol/L鹽酸溶液調節至中性；以3%的雙氧水1mL進行氧化破壞，以水浴加熱30min進行高溫破壞，以254nm和366nm紫外燈下分別照射30min進行光照破壞試驗。結果見圖2，破壞產生的雜質不干擾測定，空白輔料亦無干擾。同法取鹽酸利多卡因原料進行破壞，因利多卡因較穩定，在上述破壞條件下基本不產生干擾雜質，限于篇幅未附圖譜。在本色譜條件下鹽酸利多卡因無保留，其已知雜質2，6-二甲基苯胺保留時間為4.3min，不干擾測定。

2.5標準曲線的制備：精密稱取雙氯芬酸鈉對照品10mg，置10mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，作為標準貯備液。分別精密吸取貯備液適量，加甲醇稀釋成每1mL含0.25～12.75μg的溶液，按“2.1”項下色譜條件測定峰面積，以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標作圖，計算線性回歸方程為A=22.139×C+2.3422，相關系數為：r=0.9995（n=5）。

2.6最低檢出限：取“2.5”項下標準貯備液，采用逐步稀釋法制備不同濃度的樣品，照“2.1”項下的色譜條件進樣檢查，當色譜圖主成分的峰高約為基線噪音3倍時，計算得雙氯芬酸鈉檢出限為0.0089%。

2.7供試品的測定：量取本品適量，用甲醇稀釋制成每1mL中含雙氯芬酸鈉1.5mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取適量，用甲醇定量稀釋制成每1mL中含雙氯芬酸鈉7.5μg的溶液，作為對照溶液。量取對照溶液20μL，注入液相色譜儀，調節檢測靈敏度，使雙氯芬酸鈉峰高約為滿量程的20%；再精密量取供試品溶液和對照溶液各20μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主峰保留時間的2倍。1批樣品檢驗結果為單個最大為0.2%，雜質總量為0.3%，供試品溶液色譜圖見圖3。

3　討論

3.1有關物質的歸屬：本品為復方制劑，雙氯芬酸鈉在酸、堿、氧化、光照、高溫條件下穩定性較差，而鹽酸利多卡因相對穩定。故在有關物質檢查中，將未知雜質均歸屬于雙氯芬酸鈉有關物質。已知雜質2，6-二甲基苯胺具有復方組分鹽酸利多卡因的母體結構，因其為利多卡因的合成原料在本品的質量標準中按外標法作定量檢查，以HPLC法同時測定已知雜質2，6-二甲基苯胺及鹽酸利多卡因的含量，另文發表。

3.2色譜條件的選擇：采用《英國藥典》的流動相及C8色譜柱測定，理論板數較低，峰形欠佳，參照《中國藥典》［4］2010年版二部雙氯芬酸鈉有關物質的方法，基線噪音較大，冰醋酸濃度越低，雙氯芬酸鈉色譜峰（主峰）與雜質峰分離越差［5］。收集到的雙氯芬酸鈉已知雜質有雜質Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，分別對應于《英國藥典》的雜質A、C、B，由于已知雜質仍較難購得，擬采用光照破壞產生雜質的方法考察系統適用性。采用三個品牌的色譜柱考察系統適用性，結果及已知雜質的分離情況見表1，擬定分離度應大于6.0，光照產生的雜質可能為雜質II，但須確認。

表1　有關物質檢查系統適用性及已知雜質分離情況

3.3雜質限度的確定：《英國藥典》收載的原料方法中，用HPLC主成分自身對照法檢查單個雜質不得過0.2%，雜質總和不得過0.5%；《美國藥典》雙氯芬酸鈉原料規定雜質A以HPLC外標法計算不得過0.2%，其他單個雜質以主成分自身對照法計算不得過0.2%，雜質總和不得過0.5%。進口藥品注冊標準采用TLC主成分自身對照法，對照溶液主斑點上方的雜質限度為1.0%，下方的雜質限度為0.5%，雜質總和不得過1.0%。《中國藥典》2010年版雙氯芬酸鈉原料規定單個雜質不得過0.2%，雜質之和不得過0.5%，腸溶片中單個雜質不得過1.0%，雜質之和不得過1.5%。本品為注射劑，擬定單個雜質不得過0.5%，雜質總量不得過1.0%。

［1］胡利群，方琴，蘇洲.肌注雙氯芬酸鈉鹽酸利多卡因注射液致過敏性休克1例 ［J］.中國醫院用藥評價與分析，2015，15（12）：1709-1710.

［2］《美國藥典》［S］.USP39-NF34 ed..Rockville：U.S.Pharmacopeial Convention，2015.

［3］《英國藥典》［S］.British Pharmacopoeia.2015，VolⅠ British Pharmacopoeia Commission，2015.

［4］中華人民共和國藥典［S］.2010年版，二部，北京：中國醫藥科技出版社，2010.

［5］李瑋玲.雙氯芬酸二乙胺凝膠劑的含量測定 ［J］.北方藥學，2014，11（8）：1-2.

Determination of Diclofenac sodium and Lidocaine Hydrochloride Injection related substances by HPLC

Li Chunying Zhang Yuying（Guangzhou Institute for Drug Control，Guangzhou，Guangdong，China 510160）

0bjective：To establish a HPLC method for the determination of Diclofenac sodium and Lidocaine Hydrochloride Injection related substances.Methods：The sample was analyzed on a C18（250mm×4.6mm，5μm）column with mobile phase consisting of methonal-4%Acetic Acid（65∶35）.The flow rate was 1.0mL/min and the detection wavelength was 245nm.Results：The peaks of Diclofenac，Lidocaine and its impurities were completely separated.The regression equation for related substances was A=22.139×C+2.3422，r= 0.9995（n=5）.The detection limit was 0.0089%.Conclusions：This method is convenient，quick and reproducible for the quantitative determination of Diclofenac sodium and Lidocaine Hydrochloride Injection in the related substances.

HPLC Diclofenac sodium and Lidocaine Hydrochloride Injection Related substances

R927.2

A

1672-8351（2016）09-0001-02