GLP在全組分分析中的應用

兆 奇，趙欣昕

(沈陽化工研究院有限公司，遼寧 沈陽 110021)

農藥是實行登記管理的，在向各個國家的政府提供登記資料時，對于原藥還需要提供原藥全組分分析報告。目前大多數國家需要提供的是五批次原藥的全組分分析報告。雖然各個國家對登記資料的要求不盡相同，但是目前美國、日本、歐盟眾多國家都需要提供全組分分析的GLP報告。我國自2017年2月《農藥管理規范》的實施，以及《農藥登記試驗單位管理規范》的實施，也明確了我國原藥登記中需要提供全組分分析報告也要符合GLP要求。本文將就全組分分析的要求、GLP全分析項目的關鍵點以及GLP項目中的角色關系進行介紹。

1 全組分分析的要求

1.1 設備要求 對于全組分分析來說，因為登記要求中，需要提供紫外、紅外、核磁、氣質、液質的定性譜圖，所以對應的這些儀器也是必不可少的。對于定量而言，通常采用的手段為液相色譜法、氣相色譜法、化學分析法等，所以最基本的要求試驗機構應該擁有液相色譜儀、氣相色譜儀等分析儀器；對于有些原藥，可能還會用到離子色譜儀。以上這些是最基本的儀器要求，由于全組分分析中需要對相關雜質和0.1%以上的雜質進行定性定量分析，所以儀器本身的精密度、檢出限也要滿足以上的試驗要求。

除此之外，GLP要求用于試驗的儀器應按照SOP的要求定期進行檢查、清洗、保養和校準，校準應盡量溯源到國家或國際測量標準。由于全分析試驗中涉及到的儀器一般均配備工作站計算機系統，所以在啟用前，應該對整套的儀器設備進行驗證，包括各個組件、模快、工作站系統。

1.2 人員要求 在進行原藥的定性定量分析時，除了需要以上設備外，最主要的還是需要有能力的項目負責人(SD)。項目負責人的要求分為兩個方面：首先是技術能力要求，如：扎實的有機化學基礎、豐富的化學分析經驗、對原藥雜質的結構要有精準的判斷等；應熟悉國際上對相關雜質的登記要求、熟悉各個國家對全分析報告的要求、以及各國的法律規范。其次GLP中還要求SD要對試驗全過程和最終報告負責。包括批準試驗計劃；確保試驗全過程的完整性和真實性；確保試驗按照試驗計劃和SOP實施；確保完整記載試驗產生的全部原始數據；與QA人員、委托方、試驗人員保持暢通的溝通；在最終報告中簽署遵循GLP程度的聲明等。

1.3 質量體系要求 要完成一個全分析項目，還需要一套質量體系作為其支撐。這個質量體系要有程序控制，才能保證結果的可靠性；試驗階段程序化運作才能保證試驗結果可溯源，可重復。質量體系有很多種，目前國際上大多數國家，如美國、日本、歐洲國家等OECD成員國通常對農藥登記認可的質量體系為GLP體系。這些國家也相繼出臺了整套的GLP法律法規規范，我國自2017年《農藥管理條例》實施以來，農業農村部也相繼出臺了《農藥登記試驗管理辦法》、《農藥登記試驗質量管理規范》、《農藥登記試驗單位評審規則》等新規，這也表明我國的農藥登記正式進入了GLP法規時代。

2 GLP全組分分析項目的關鍵點

2.1 全組分分析的試驗流程 全組分分析的試驗流程簡單來說主要有三步。

2.1.1 要有一份經項目負責人批準的試驗計劃書 在計劃書中主要的技術內容就是除了要確定原藥中有效成分的分析方法以外，還必須確定>0.1%的雜質以及登記要求的相關雜質的結構，并且獲得這些雜質參照物。計劃書中還要闡述這些雜質檢測的分析方法。

2.1.2 接下來就是按照試驗計劃書進行正式試驗 試驗過程首先是針對有效成分和雜質進行定性分析，比照參照物，通過紫外、紅外、核磁、質譜等方法來證明有效成分和雜質的結構；其次就是對這些確認的組分進行定量分析。在定量分析之前，還要將選定的分析方法進行驗證，通過特異性、精密度、回收率、線性范圍來驗證此方法可靠；對于雜質，分析方法驗證通常還要求進行檢出限(LOD)和定量限(LOQ)試驗。最后才能采用驗證過的方法，對這些組分進行定量分析。

2.1.3 以上試驗結束后，就是根據原始數據撰寫最終報告 該報告要總結所有的試驗數據、描述試驗過程、給出試驗結論。形成報告初稿后，要經過質量保證部門的審核、委托方的審核，最后經項目負責人批準。

2.2 GLP的要點 所謂GLP項目，無非就是需要滿足GLP準則的基本要求。而GLP項目的基本要點如下：

2.2.1 資源 是指需要有固定的組織機構、足夠的人員、滿足試驗條件的設施和設備；

2.2.2 規則 是指要有書面的規程來指導試驗全流程，健全的文件來支撐項目，合理的試驗計劃書指導試驗；

2.2.3 表征 是指被試物和整個試驗體系，全組分分析涉及的就是物理-化學體系；

2.2.4 記錄 是指所有的原始數據、形成的最終報告和所有數據和樣品檔案；

2.2.5 質量保證 QA要貫穿于整個項目，從試驗計劃審查、試驗階段審查到最終報告和原始記錄審查。

2.3 GLP全分析項目的關鍵點 綜合以上全組分分析和GLP的要點，可以匯總出GLP全分析項目的關鍵點如下：

2.3.1 儀器設備及計算機化系統的驗證 對于GLP項目中用到的儀器設備，目前使用的大多數都具有計算機化系統，而對于這類儀器設備最主要的就是驗證活動。除了需要對儀器本身進行4Q確認之外，還要對其使用的計算機化系統以及相關的設施進行驗證。而驗證活動必須從設定驗證計劃開始，按照驗證計劃實施驗證活動之后，形成驗證報告來評估整個系統的可靠性。

2.3.2 全組分分析項目的試驗計劃 一份成功的試驗計劃書，要有科學性、通過QA和委托方審核、便于試驗人員使用、符合GLP準則要求、信息完整、具有唯一性、受控分發。而全組分分析的試驗計劃成敗在于預實驗。預實驗可以分為兩步：一是基本預實驗，是指項目負責人對主成分和雜質進行剖析，初步確定雜質的可能結構。結合生產工藝路線，確定雜質來源，對雜質結構進行進一步判斷。二是深入預實驗，這時需要獲得雜質參照物，與被試物進行比對，判斷其是否為同一物質。待預實驗完成之后，就可以進行試驗設計，確定可靠的分析方法，當然這包括主成分和雜質的分析方法都需要確定下來。這些都完成之后就可以起草試驗計劃書了。

2.3.3 原始數據 原始數據是所有結論的依據，其包括試驗現象、溶液配制過程、原始稱樣量、試驗過程記錄、譜圖、選用的色譜方法、儀器的序列表、Excel計算、工作站中的電子數據、儀器使用記錄、儀器維護記錄等在試驗過程中產生的所有數據。在GLP中要求試驗需要按照試驗計劃和SOP進行；產生的數據均要直接、迅速、準確、字跡清楚地記錄下來。這些記錄均需要有簽名并標注日期。變更任何原始數據，不得涂改掩蓋先前的記錄。應說明數據變更的理由，并有變更人員的簽字和日期。另外，在全組分分析中的數據處理通常會使用到Excel表格，如果提前將這些Excel模板進行驗證，就可以大大提高工作效率，并且保證數據可靠。

2.3.4 分析方法 通常進行全組分分析時采用的多是非通用方法，所以就要求對該方法進行驗證。對于主成分通常需要進行特異性或專屬性、線性范圍、精密度和回收率的方法驗證；對于雜質還需要給出定量限和檢出限的驗證過程。

2.3.5 最終報告 從試驗計劃開始描述要做的，試驗過程就是通過原始數據反映如何按照試驗計劃進行的，而最終報告則是將已經做過的試驗全部報告出來。最終報告的格式要符合登記國家的要求，涵蓋試驗計劃書中要求的所有內容，被試物信息、委托方信息、實驗室的基本信息，報告所有試驗過程，給出試驗結果，資料的保存期限和保存地點。還有不可缺少的就是項目負責人對整個項目的GLP符合性聲明以及QA聲明。

2.3.6 歸檔 這里需要歸檔的資料包括：被試物(參照物)記錄、委托方信息記錄、原始記錄、所有譜圖、儀器使用記錄、試驗計劃書及其分發記錄、計算過程、產生的電子數據等以及試驗計劃書中明確需要歸檔的資料。檔案不僅僅是指紙質資料，還包括樣品檔案和電子檔案。所有這些的保存期限、放置地點都需要在最終報告中明示。

3 GLP項目中的角色關系

委托方：GLP項目是由委托方發起的，所以在GLP準則中也明確了委托方的責任，要求委托方也要遵守準則的要求。目前我們國內的好多委托方還沒有建立起GLP概念，在委托項目時不了解自己的義務，在跟試驗單位合作時就缺乏GLP意識，不知道應該關注哪些環節，應該提供什么樣的被試物，自己在試驗計劃審核時傾注的注意力不夠，批準的很隨意，在項目進行時沒有跟試驗單位進行有效的溝通，只在拿到報告時才開始提各種各樣的要求。這樣可能會導致整個項目的不順利。所以，作為委托方是有義務了解GLP準則的，試驗單位也要在與委托方的溝通合作中不斷灌輸GLP觀念給委托方，這樣大家的合作才會愉快而長久。

對于試驗單位而言，委托方是外部關系，而內部中，在GLP項目中擔當主要角色的有三個：機構負責人(TFM)、項目負責人(SD)和質量保證人員(QA)。這三方的關系應該是個堅固的“鐵三角”。機構負責人的作用應該是提供資源，包括軟件和硬件；任命SD；以及支持QA。項目負責人是整個GLP項目的責任人，應該具有全組分分析中的科學家身份，也具有項目的管理者身份。他應該是整個項目的靈魂人物，要關注和掌控整個項目。同時要與委托方、試驗人員和QA進行廣泛的溝通。QA的作用則主要是進行項目審查，從試驗計劃、試驗的關鍵階段到最終報告和原始記錄的審查。除此之外，QA還要按照計劃對整個機構進行設施核查。質量保證部就是外部審查部門設立在機構內部的審查部門，時刻關注整個機構，每個GLP項目的動向。因此，QA應該是非常熟悉GLP準則的，同時在大多數機構，QA還會承擔起GLP準則的培訓工作。

綜上所述，GLP良好運行的標志如下：GLP體系文件健全完整；設備精良，驗證充分；人員配制合理，培訓到位；各崗位職責明確；團隊溝通順暢有效。具備了以上幾個關鍵點，就會制造出一個又一個完美的GLP全組分分析項目。