高效液相色譜法在食品色素檢測中的應用

□ 田 毅 重慶市黔江食品藥品檢驗所

1 實驗準備研究

需用到的儀器與試劑有：帶有自動化進樣器、可見紫外檢測器的高效液相色譜儀Agilent 1260（編號：0294）；甲醇（色譜級）溶液、氨水和屈臣氏超純水。

乙酸銨溶液：將1.54 g乙酸銨與水相溶制備成乙酸銨溶液，后轉移至1 000 mL容量瓶中，用水定容至刻度。將其調節為pH值為4.0的酸性環境，并用0.45 μm濾膜展開過濾。由于在食品添加劑檢測中新紅與檸檬綠不容易分離，所以本文則選擇胭脂紅、日落黃、檸檬黃、新紅等4種合成色素，同時準備好標準品濃度為0.5 mg/mL的胭脂紅、0.5 mg/mL的日落黃、0.5 mg/mL的檸檬黃以及純度為92%的新紅，處理之前應用固相萃取柱，先用3 mL甲醇、3 mL水活化平衡，之后便選擇上樣。

色譜基本要求如下。①色譜柱：C18柱，5 μm，4.6 mm×250 mm。②流速為每分鐘1.0 mL。③固定色譜柱溫度為30 ℃。④進樣量為10 μL。⑤波長：胭脂紅、日落黃、檸檬黃、新紅均為254 nm。⑥流動相：濃度為0.02 mol/L的乙酸銨-甲醇。選擇罐頭、香腸等食品5 g作為樣品，并且經過勻漿、離心、過濾與凈化的處理過程。⑦氨基固相萃取柱準備：選用3 mL甲醇與水平衡活化、上樣5 mL，利用3 mL水溶液和甲醇沖洗，用2%氨水、0.5 mL甲醇洗脫4次，之后用氮氣吹干以及用1 mL水溶解。

2 實驗結果分析與優化條件

2.1 優化設計色譜條件

優化前的色譜條件主要基于流動相為0.02 mol/L的乙酸銨-甲醇條件，在梯度洗脫分離后去檢測開始時20%～30%的甲醇梯度變化洗脫，然而這種分離法并不能分離出新紅與檸檬黃兩種色素。鑒于此，為有效分離出新紅與檸檬黃，則應采用流動相為0.02 mol/L的乙酸銨-甲醇，經過六步梯度洗脫之后，采用0.02 mol/L的乙酸銨-甲醇的流動相開始測試，比例調整為90∶10，保持時間10 min；之后調整比例65∶35并保持5 min；調整比例為2∶98保持7 min；調整比例為80∶20保持3 min；最后調整比例至初始狀態的90∶10且保持3 min。在如此精細的分離環境中，便能夠將新紅與檸檬黃有效分離。

2.2 優化色素的提取和凈化條件

在對色素進行提取的過程中通常會采取利用水溶液進行反復洗脫的方法，直至制備樣品的顏色逐漸淡化至無色。但是在實際的實驗操作中，部分食品樣品僅用水溶液對色素進行沖洗無法呈現出明顯效果，例如冷飲、蜜餞、醬菜等含有復雜基質的食品[1]。因此，必須對色素提取條件進行優化，可選擇色素提取效果更為明顯的丙酮與水的混合液，并且操作更為簡單。色素凈化一般會采用純聚酰胺吸附雜物，不過實驗表明利用自制的聚酰胺小柱去吸附色素，不僅可吸附雜物，還能節約聚酰胺粉與洗脫劑的用量，較利用純聚酰胺而言有著更高回收率，在食品色素檢測中成本更低，與食品安全檢測的綠色理念相符。

2.3 選用適宜的固相萃取柱

為了有效分離目標化合物和基體干擾物，本實驗通過選用固相萃取柱，利用固體吸附劑將樣品中的目標化合物吸附出，從而促使目標化合物與基體干擾物有所分離，在洗脫液的沖洗之下，實現分離與富集的目的。然而，當前市場上的固相萃取柱難以完全滿足分離物的要求，所以在選用固相萃取柱時，需要綜合考慮其能否滿足凈化程度、回收率、重現性等要求，選用適宜的固相萃取柱。

2.4 測定回收率與精密度

回收率的測定方法一般會采用吸附法和直接稀釋法，在對液體類樣品進行檢測時更多應用直接稀釋法，不僅操作簡便且有著不錯的回收效果；在針對固體類、漿體類的樣品進行檢測時更多應用吸附法，主要分為吸附、解析、濃縮與溶解4大步驟展開，但是吸附操作復雜且無法確保回收率的精準性。通過大量實驗表明，可將其中濃縮與溶解步驟省去，簡化過后的吸附過程所得實驗結果相差不大。實驗過程中的實驗基質可選擇不含色素的碳酸飲料或是面包，同時添加色素混合標準溶液相互融合，結合前處理條件的使用條件對樣品種類展開回收實驗，測定回收率及精密度，再與國家標準相比對，得出最終的實驗結論。

3 結論

在多次試驗檢測之后能夠發現，由于原來基礎的檢測方法試驗中往往會存在新紅與檸檬綠難以分離的狀況，所以在此基礎上建立了用于檢測食品色素的高效液相色譜法。該技術方法能夠有效分離上述多種色素，主要通過丙酮與水的混合液（體積配比90∶10），在自制聚酰胺小柱凈化下，高效液相色譜法的應用處理更為便捷且試劑用量更少、檢測精準度更高。不難看出，高效液相色譜法在檢測食品色素過程中能夠有效節省成本，提高工作效率，簡化色素凈化過程以及提升分離精度與回收率，在對大量食品中色素的檢測中有著顯著的應用價值。