不同產地葛根中葛根素含量的測定

張 莉， 何春萍， 劉良科*， 聶 歆，李 月， 張崇華

葛根為豆科植物野葛 [Pueraria lobata（Willd.）Ohwi]或粉藤（Pueraria thomsanii Benth.）的干燥根.野葛在我國分布較廣，遼寧、河北、河南、江蘇、福建、湖南等地均有分布.葛根中以葛根素為代表的異黃酮類成分，是葛根的主要有效成分[1].葛根為項背強痛之要藥，現代藥理已發現葛根的多種藥理活性，其中包括解熱、降血糖、降血脂等[2].現代研究表明，葛根素對治療心律失常、心肌梗死、心絞痛、冠心病、高血壓等心腦血管疾病有很好的療效[3，4].遲霽菲等[5]對不同產地葛根中的葛根素含量進行了研究，發現葛根素的含量隨葛根產地不同而存在較大差異.張尊聽等[6]的研究發現，葛根采集的季節不同，葛根素的含量也存在明顯的不同.陳元生等[7]對36份藥葛種質資源進行了葛根素含量測定，36份樣品的葛根素含量為0.01%-3.64%.可見，采收時間和產地等因素都影響葛根素含量.葛根是藥食兩用植物，葛根素含量是評價葛根藥材質量的重要指標.因此，高葛根素含量葛根品種的選育具有重要的實踐意義.

本研究采用高效液相色譜法，對不同產地葛根的葛根素含量進行測定，為葛根優良品種的選育和產業開發提供實驗依據.

1 材料與方法

1.1 試驗材料

通過對中國各地葛根資源的調查了解，于2007年開始采用野外收集和引種方式，在全國范圍內收集葛根種質資源50份，種植于懷化學院生物園.根據幾年的栽培觀察結果，從中挑選產量較高的15份種質用于本試驗研究.這15份種質中，10號、13號和14號等3份種質是野葛 [P.lobata（Wild）Ohwi]，其它12份種質是粉葛（Pereira thomsonii Benth）.以上15份種質于2016年4月10日集中種植于湖南省會同縣連山鄉火神坡村葛根栽培基地，常規栽培管理，2016年12月下旬挖取葛根.15份葛根種質的來源地見表1.

1.2 儀器與試劑

主要儀器有LC-15C型島津高效液相色譜儀（日本島津），UV—2450紫外可見分光光度計（日本島津）等.葛根素（批號：161102）對照品購置中國食品藥品檢定研究院.甲醇為色譜純；水為二次蒸餾水；其他試劑均為分析純.

1.3 研究方法

1.3.1 對照品溶液的制備

精密稱取葛根素對照品5.0 mg，用30%乙醇溶解定容至50 mL容量瓶，保存于4℃，作為對照品的儲備溶液，備用.

1.3.2 供試品溶液的制備[1]

測定前，各樣品均在50℃烘箱中烘干置恒重，粉碎，過60目篩.準確稱取樣品粉末2.0 g，置于50 mL燒杯中，加入30%乙醇20 mL，密封，室溫下浸泡1 h，超聲30 min（溫度 45 ℃，功率 100 W，頻率 40 kHz），過濾，將濾液用30%乙醇定容于50 mL容量瓶中，搖勻，即得樣品溶液.

1.3.3 色譜條件[1]

色譜柱：Diamonsil C18柱（250×4.6 mm，5μm）；流動相：甲醇 - 水（30：70）；流速：1.0 mL/mim；檢測波長：250 nm；柱溫：25℃；進樣量：20μL.

2 結果與分析

2.1 方法學考察

2.1.1 最佳吸收波長的選擇

準確量取標準溶液1 mL于10 mL容量瓶中，用30%乙醇溶液稀釋至刻度，搖勻，在200-400 nm波長范圍內掃描，250 nm處都有很明顯的吸收峰，故選擇最佳檢測波長為250 nm.

2.1.2 線性關系考察

分別準確量取葛根素對照品儲備液 0.1、2、5、8、10 mL，置于10 mL容量瓶中，用30%乙醇定容至刻度線，制得系列濃度的葛根素對照品溶液.按“1.3.3”項下的色譜條件進行測定.以峰面積為縱坐標（Y），葛根素的含量為橫坐標（X），進行線性回歸，得葛根素的回歸方程為：Y=76612X-100145，葛根素含量在1～100μg/mL濃度范圍內與峰面積呈良好的線性關系.葛根素標準品色譜圖如圖1.

2.1.3 精密度試驗

精密量取同一溶度的對照品溶液，按“1.3.3”項下的色譜條件進行連續進樣測定6次，結果顯示葛根素的峰面積RSD為0.10%，表明儀器精密度良好.

2.1.4 穩定性試驗

精密量取同一供試品溶液在 0、2、4、6、18、24 h 進樣測定，結果顯示葛根素的峰面積RSD為0.86%，表明供試品溶液在24 h內穩定性良好.

2.1.5 重現性試驗

圖1 葛根素標準品色譜圖

精密稱取3份同一樣品，按“1.3.2”項下的方法進行制備和“1.3.3”項下的色譜條件進行測定，結果測定葛根素峰面積RSD為0.29%，表明方法的重現性良好.

2.1.6 加樣回收試驗

準確稱取同一樣品3份，精密加入葛根素對照品適量，按按“1.3.2”項下的方法進行制備和“1.3.3”項下的色譜條件進行測定，結果葛根素的平均加樣回收率為100.23%，RSD為2.1%.

2.2 樣品含量測定

取不同產地的葛根樣品，按“1.3.2”項下的方法進行制備和“1.3.3”項下的色譜條件測定葛根素含量，葛根樣品色譜圖如圖2，結果見表1.

從表1看出，野葛的葛根素含量高于粉葛的葛根素含量；粉葛的產地不同，其葛根素含量也存在較大差異：12個樣品的葛根素含量為0.12%-1.83%，來源于火山的粉葛的葛根素含量最低，為0.12%，來源于懷化的粉葛的葛根素含量最高，為1.83%，是火山粉葛葛根素含量的15.25倍.

圖2 葛根樣品色譜圖

表1 不同產地葛根樣品中葛根素含量測定結果

3 結論與討論

文獻報道了多種提取葛根素的方法，如索氏提取、加熱回流提取等[8-10]，這些方法回流時間長，且溫度較高，而超聲法從葛根中提取葛根素具有省時、節能、提取率和產品純度高等優點.本實驗室對超聲法從葛根中提取葛根素的工藝進行了優化，以30%乙醇浸泡1 h，料液比1：20的提取效果最佳.

不同種類和產地葛根的葛根素含量差異較大，其中野葛的葛根素含量高于粉葛的葛根素含量，同時不同產地粉葛的葛根素含量也存在較大差異.作為藥用的葛根，其葛根素含量必須達到藥典要求：野葛的葛根素含量不低于2.4%，粉葛的葛根素含量不低于0.3%[1].因此，在實際應用中應加強對葛根的質量控制，入藥時要選用固定產地的葛根，最好在采購前進行相關指標測定，或只采購經測定已達標的葛根.若要做保健品開發，也應選用葛根素含量較高的葛根，這樣才能起到更好的保健作用.

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（2010年版一部）[S].北京：中國醫藥科技出版社，2010：272，312-313.

[2]彭成.中藥藥理學[M].北京：中國中醫藥出版社，2012：99-102.

[3]何惟勝.葛根及其提取物治療心腦血管疾病藥理和臨床研究進展[J].時珍國醫國藥，2001，12（5）：470－471.

[4]范禮理.葛根黃酮對犬冠脈心臟血液動力學和心肌代謝的作用[J].中華醫學雜志，1995（11）：724.

[5]遲霽菲，張國剛.高效液相色譜法測定不同產地葛根中葛根素的含量[J].中南藥學，2006（4）：307-309.

[6]張尊聽，楊伯倫，劉謙光，等.太白山野葛根中異黃酮和葛根素含量隨季節的變化 [J].天然產物研究與開發，2001（6）：33-35.

[7]陳元生，周滿生，李明.藥用葛優良種質資源篩選研究[J].北方園藝，2010（21）：202－206.

[8]龐明亮，虞彗赟，蔣兵，等.天葛片中葛根素的含量測定[J].新疆中醫藥，2016，34（2）：44-46.

[9]李定芬，秦利芬，楊玉琴，等.貴州不同產地葛根中總黃酮和葛根素的含量測定[J].微量元素與健康研究，2016，33（2）：42-43.

[10]竇德明，代維正，陳振峰，等.秦嶺不同產地葛根中葛根異黃酮含量的研究[J].中草藥，2002，33（7）：663－664.