糞便毛蚴孵化法診斷家畜血吸蟲病

文│彭又新 熊家亮（湖北省荊州市動物疫病預防控制中心）

湖北省自20世紀60年代開始開展了糞便毛蚴孵化法診斷家畜血吸蟲病的研究。最初試驗的方法為瓦缽試管倒插孵化法，幾經改進之后用特制的塑料杯取代瓦缽，于20世紀70年代末將塑料糞杯設計定型并批量生產，使試管倒插孵化法在全省范圍內得到推廣應用。目前，該方法仍用于家畜血吸蟲病的確診。

但隨著時代的發展變化，以前制定的操作規程中的某些內容需要進行適當的修改。同時，隨著老一代的動物血防工作者陸續離開工作崗位，現在能夠熟練掌握該方法的人越來越少。為此，筆者根據多年的實際運用經驗，對糞便毛蚴孵化法診斷家畜血吸蟲病進行了一次全面深入的總結，現將經驗介紹給大家，希望對大家的工作能夠有所裨益。

一、糞便毛蚴孵化法的種類

1.尼龍網兜淘洗孵化法（三角燒瓶）。該方法是最早應用于家畜血吸蟲病診斷的方法。采用兩層尼龍網兜進行淘洗，上層網兜孔大，主要起過濾糞渣的作用；下層網兜孔小，主要起兜住蟲卵的作用；洗好后將下層網兜中的內容物到入三角燒瓶中進行孵化。由于該方法操作繁瑣，耗時長，在家畜的診斷上早已棄用，但衛生部門目前仍在應用。

2.頂管法（試管）。用一特制的糞杯盛裝糞液，上面再倒插一裝滿清水的試管。我國大部分血吸蟲病流行區均采用該方法用于家畜血吸蟲病的診斷，根據盛糞液容器的不同又分為幾種，湖北省又將此方法稱為試管倒插孵化法。

3.直孵法（平底長頸燒瓶）。糞液直接裝入平底長頸燒瓶中，頸的中部放入適量的脫脂棉，再加入清水進行孵化。全國有少數地方采用該方法用于家畜的查病。直孵法的檢出率與試管倒插法相比略優相當，可作為試管倒插法的補充，其缺點是在搬運過程中易破損。

二、糞便毛蚴孵化法的原理

血吸蟲蟲卵具有與一般寄生蟲蟲卵不一樣的特征，呈橢圓形、淡黃色、卵殼較薄，無卵蓋，側方有一小逗點狀或小鉤狀的棘突，其最主要的特點就是成熟蟲卵卵內含有毛蚴。家畜體內寄生的其他吸蟲的蟲卵內均沒有毛蚴。成熟、未成熟及死亡變性卵，都可在糞便中發現。但在正常情況下，即未經抗血吸蟲藥治療或未腹用服瀉劑的情況下，糞便內的卵，大多數是含毛蚴的成熟蟲卵，而未成熟或變性卵只占少數。蟲卵隨同家畜糞便排出體外并在自然環境中遇到水后，在適當條件下就會孵出毛蚴。

影響毛蚴孵化的因素。溫度：以水溫20～30℃最為適宜。當氣溫低于10℃或高于37℃時，大多數蟲卵的孵化被抑制。pH：以7.5～7.8最為適宜，當pH在3以下和10以上時，孵化完全受到抑制。光線：光能加速蟲卵的孵化，黑暗則抑制孵化。滲透壓：毛蚴在清水中孵化率100%，在1.2%以上的鹽水中，蟲卵的孵化完全被抑制。

三、畜糞的采集和送檢

1.采集量。畜糞的采集量與每頭家畜檢查所用糞杯數密切相關。如果進行一糞三檢，大家畜（牛、馬屬）的采糞量應為200克，豬100克，羊、犬50～60克。

查病時糞樣的送檢次數及每個糞樣檢測份數（幾糞幾檢），達標考核必須采用一糞三檢；而一般的查病和疫情監測建議采用一糞兩檢。據試驗統計，血吸蟲病畜一糞一檢的檢出率約為60%，一糞兩檢的檢出率約為70%，一糞三檢的檢出率約為72%。

2.采集方法。

（1）拾糞。即采取家畜自然排出的糞便，用一次性筷子或樹枝將其采集。為了避免污染，采糞時所用采糞器具不能連續使用，要求一具采一頭畜糞，糞樣要新鮮。

（2）掏糞。即用手伸進直腸采糞，最好是戴上橡皮手套進行，每采一頭更換一副手套，如徒手采集，每采完一頭后，必須將手洗凈后再采另一頭，以防交叉污染。

3.包裝送檢。采得糞樣可用潔凈容器（如一次性飯盒）盛裝并再用一干凈的塑料袋包裝，或者使用兩層干凈的塑料袋包裝，詳細填寫《動物血吸蟲病糞樣送檢登記卡》放入對應的塑料袋中送檢。糞樣送檢登記卡須填寫的內容有:鄉（鎮）名，村名，組別，畜主姓名，畜別，性別，年齡，特征，家畜編號，送檢時間等。采到糞樣后應立即上送，冬季防止冰凍，夏季防止日曬。

四、用水的準備

將自來水放入潔凈無蓋的容器中靜置12小時以上即可作為洗糞和孵化用水。一般于前一天下午或晚上將自來水放入無蓋的桶、盆或缸中，第二天上午即可作為洗糞和孵化水使用。

河水、井水、池塘水用做洗糞和孵化用水必須進行殺滅水蟲和澄清水質的處理。其方法是將水加溫至60℃以上，冷卻后澄清再用。

孵化時水溫須達到15℃以上，否則應升溫。當水溫高于28℃時，洗糞用水中可按1%的比重加入無碘食鹽以抑制洗糞過程中毛蚴過早逸出。

由于現今自來水已經普遍使用，所以一般不用河水、井水和池塘水作為孵化和洗糞用水。有些地方的自來水并不是按標準生產的，使用前須檢查水中是否有水蟲。

五、試管倒插孵化法的操作過程

1.工具的準備。特制的塑料杯及杯蓋，與杯蓋孔相適應的玻璃試管以及管口上套用的橡皮筋圈，竹筷、40～60孔/銅篩、無碘食鹽，其他還有剪刀、膠布、5～10倍放大鏡、水溫計、pH試紙、毛巾、肥皂、糞桶、臉盆、水桶、水瓢、大水桶或水缸、大盆、試管刷、鬧鐘、臺燈、一次性手套、一次性飯盒、塑料袋、糞檢登記表等。

2.編號。對所用的塑料糞杯逐一進行編號，每個糞杯都有一個惟一的號碼。將醫用膠布剪一小段貼在糞杯的外壁上，將號碼寫在膠布上。

3.登記。將糞檢登記卡上的內容詳細記入糞檢登記表，記錄對應的糞杯號，同時將一定量的糞樣放入對應的糞杯中（或糞杯中的銅篩中）。每個糞杯中家畜的糞量為：牛、馬屬動物糞便50～100克，豬、羊、犬糞便各30～40克。

4.洗糞。將塑料杯內加上2/3容量的洗糞用水，用筷子充分攪拌淘洗，而后取出糞篩糞渣，將杯內加滿洗糞用水，靜置25～30分鐘。由于羊糞為顆粒狀、較硬，糞杯中加洗糞水之前需將其弄碎。

由于用銅篩淘洗耗時較長，且銅篩會濾掉一部分蟲卵，為了縮短操作時間，提高檢出率，在實際工作中進行牛糞檢測時一般不使用銅篩，而是直接將糞樣放入糞杯中進行淘洗。

5.換水。靜置到時后倒去糞杯中1/2的糞水，再加滿洗糞用水，靜置15～20分鐘，此為第一次換水。到時后再倒去糞杯中2/3的糞水，再加滿洗糞用水，靜置15分鐘為第二次換水。

通過長期的實踐證明，減少一次洗糞換水并不影響毛蚴的孵化及觀察效果，在實際操作中特別是溫度較高時可減少一次換水，以縮短洗糞時間及減少工作量。

6.上孵化水。倒去杯中上2/3的糞水，加滿孵化用水，靜置30分鐘。

7.蓋杯蓋及孵化。取與杯蓋孔相適應的玻璃試管，裝滿洗糞用水倒插于杯蓋孔上一并蓋在杯上進行孵化。為防止試管下滑，應在試管上纏上適量的橡筋。

關于糞杯中的糞水上翻到試管中的問題。當試管中的水溫低于糞杯中的水溫時，就會出現糞液上翻現象。已加孵化水的糞杯不能放到陽光下直曬，已上試管的糞杯既不能放到陽光下直曬，也不能用電扇吹。糞液上翻的解決辦法：先找出引起糞水上翻的原因予以解決，同時將試管中的水換成溫度略高的孵化水。

六、直孵法的操作過程

1.器械的準備。平底長頸燒瓶、燒杯（500毫升）、脫脂棉為本方法專用工具，以取代糞杯，所需其他器械與頂管法相同。

2.操作。將平底長頸燒瓶進行編號，每個長頸燒瓶配一個對應的燒杯。將糞檢登記卡上的內容詳細記入糞檢登記表，同時記錄對應的燒瓶號。

取家畜糞便于燒杯中，加入自來水充分攪拌，然后將燒杯內加滿水，靜置25～30分鐘。

將燒杯中的糞液倒去一半，剩余的糞液倒入對應的燒瓶中，未倒干凈的糞渣用孵化水沖洗灌入燒瓶中，將燒瓶頸內壁上的糞渣用孵化水沖洗干凈并繼續向燒瓶中加入孵化水使液面距離瓶口8厘米左右，然后將適量脫脂棉放入頸口中與液面輕輕接觸（要求脫脂棉厚薄均勻，厚度約2厘米左右），在脫脂棉上方輕輕注入孵化水至瓶口，一個小時后進行毛蚴觀察。

也可將燒杯內加上2/3容量的洗糞用水，燒杯中放入一40目(孔)/銅篩，取牛、馬屬動物糞便50～100克，豬、羊、犬糞便各30～40克置銅篩內，充分攪拌淘洗，而后取出糞篩糞渣，將燒杯內糞水倒入對應的燒瓶中，其他操作與前面相同。

七、毛蚴的觀察及結果判定

通常情況下，牛、羊糞樣于第1、3、5小時各觀察一次，豬糞樣孵化后5、8小時各觀察一次，每個樣品每次觀察應在2分鐘以上。實際操作中，由于時間所限，每個糞杯最多觀察兩次。

毛蚴的出現時間與水溫關系密切。水溫較高時，毛蚴出現的時間早，同時毛蚴存活的時間也較短，所以夏季觀察毛蚴的時間要相應地提前并抓緊時間進行觀察。

發現血吸蟲毛蚴即判定為陽性。在一個試管中有1～5個毛蚴判為+，6～10個為++，11～20個為+++，21個以上為++++。在同一糞樣的幾個試管中，只要在一個試管中發現一個毛蚴，則該家畜為陽性。

毛蚴往往在距水面4厘米的范圍內活動，灰白色、折光強、梭形，多呈與水面平直或斜向的直線運動。觀察毛蚴應在光線充足的地方進行，為了便于觀察，可襯以黑色背景。

觀察時，毛蚴必須與水蟲嚴加區別。可疑時，應用吸管吸取置于載玻片上鏡檢簽別。

在光線較暗的環境中及夜晚進行毛蚴孵化操作時，必須補充燈光并達到所需的亮度。

為了便于毛蚴的觀察，可在插好試管的糞杯前放置一臺燈以增加亮度。