ABCG2在卵巢黏液性腫瘤中的表達及意義

張乾，王海歐，張虎祥，鄭飛云

（溫州醫科大學附屬第一醫院，浙江 溫州 325015，1.婦產科；2.病理科）

卵巢黏液性癌是常見的卵巢惡性腫瘤之一，預后差，容易復發，特別是晚期卵巢黏液性癌對一線化療藥物敏感性較差且易耐藥，病死率高[1]。有研究表明，腫瘤組織中存在一小群特殊細胞即腫瘤干細胞（cancer stem cells，CSCs），具有自我分裂、更新和多向分化潛能，可能是腫瘤發生、發展、侵襲、轉移及發生耐藥的重要原因[2-3]。ABCG2（ATP-binding cassettesubfamily Gmember 2）是目前已知的常見CSCs表面標志物之一[4]，參與多種腫瘤細胞的抗耐藥性，但ABCG2在卵巢黏液性腫瘤中的相關情況鮮見報道。本研究檢測卵巢黏液性腫瘤中ABCG2的表達情況，探討其是否參與卵巢黏液性腫修復抗原20 min，3% H2O2阻斷內源性過氧化酶，血清封閉后滴加抗ABCG2抗體（1∶50）4 ℃過夜，加二抗后37 ℃溫箱孵育30 min，具體步驟按PV-9000兩步法免疫組織化學檢測試劑盒說明書進行，以PBS代替一抗做陰性對照，已知陽性結果做陽性對照，最后在顯微鏡下觀察顯色情況。

1.4 結果判斷 由2位高年資病理醫師用雙盲法評估免疫組織化學染色體標本。ABCG2均為跨膜蛋白，定位于細胞膜及細胞漿，判斷標準為細胞膜、細胞漿出現棕黃色顆粒。400倍鏡下隨機觀察5個視野，每個視野計數100個細胞中的陽性細胞數。陽性細胞＜25%為陰性，26%～50%為+，51%～75%為++，＞75%為+++。

1.5 統計學處理方法 運用SPSS20.0統計軟件進行統計學分析。各組間比較采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 ABCG2在各組中的陽性表達 各組腫瘤的細胞膜及細胞漿呈棕黃色顆粒表示ABCG2陽性表達，見圖1。ABCG2在MOC、M-BOT、MOA的陽性表達率分別為18.2%、47.4%、80.0%，各組間兩兩比較，差異均有統計學意義（P＜0.05），見表1。瘤的發生發展及可能的臨床應用價值。

1 資料和方法

1.1 標本及臨床資料 選取2011年1月-2015年12月在溫州醫科大學附屬第一醫院及溫州醫科大學附屬第二醫院住院手術的卵巢黏液性腫瘤患者術后石蠟標本66例，所有病例均排除合并其他系統惡性腫瘤及惡性腫瘤病史，患者年齡19～68歲，術前均未經化療及其他治療。所有標本均經2位高年資病理科醫師閱片確定。根據WHO分類標準，其中卵巢黏液性囊腺瘤（mucinous ovarian cystad-enoma，MOC）22例，年齡23～49歲；卵巢交界性黏液性腫瘤（mucinous borderline ovarian tumor，M-BOT）19例，年齡19～48歲；卵巢黏液性囊腺癌（mucinous ovarian adenocarcinoma，MOA）25例，年齡23～68歲，年齡≥50歲16例，＜50歲9例，中低分化14例，高分化11例，I～II期16例，III～IV期9例。

1.2 試劑 鼠抗人ABCG2（BXP-21）單克隆抗體購自英國Abcam公司；PV-9000兩步法免疫組織化學檢測試劑盒、DAB顯色試劑盒、PBS、10 mmol/L枸櫞酸鹽緩沖液（pH 6.0）、防脫載玻片均購自北京中杉金橋生物技術公司。

1.3 方法 將所有石蠟標本連續切片，厚4 μm，脫蠟水化，置于10 mmol/L枸櫞酸鹽緩沖液中，微波

圖1 ABCG2在腫瘤組織中的表達（PV-9000兩步法，×400）

表1 ABCG2在各組腫瘤組織中的表達情況

2.2 ABCG2表達與MOA臨床病理特征的關系 在MOA中，ABCG2的陽性表達水平在不同的病理分級、臨床分期之間差異有統計學意義（P＜0.05），在不同年齡之間差異無統計學意義（P＞0.05），見表2。

3 討論

研究表明，卵巢黏液性腫瘤從良性到交界性再到惡性是一個連續變化的過程。多數MOA術后需要輔助化療，但較多研究表明MOA對一線化療藥鉑類等耐藥。PISANO等[5]回顧性分析MOA對化療藥物的敏感性，結果顯示MOA容易對一線化療藥物鉑類耐藥。SHIMADA等[6]在回顧性研究中發現，MOA的預后顯著差于漿液性癌，3年生存率分別為27.8%和61.5%，二者對化療藥物的敏感性分別為12.5%及67.7%，MOA對鉑類的反應性明顯低于漿液性癌。因此，探討耐藥性MOA產生耐藥的機制是未來研究的熱點。卵巢癌耐藥細胞的過度增殖能力與CSCs相似，有學者提出CSCs的存在是卵巢癌復發及對化療藥物耐藥的原因之一[7]。有研究表明，化療藥物能夠殺死絕大多數的腫瘤細胞，但是卻不能殺死占極少數的CSCs，殘留的CSCs通過自我更新及多向分化潛能，在卵巢癌的復發及耐藥中起關鍵作用[8-9]。

ABCG2是ABC轉運體超家族成員之一，主要定位于細胞膜上，是耐藥相關的半轉運蛋白，依靠ATP提供能量，將化療藥物泵出體外，使腫瘤耐藥[10]。近年來ABCG2作為腫瘤干細胞表面標志物受到廣泛關注。文獻報道，在前列腺癌[11]、胰腺癌[12]等腫瘤中能分離培養出ABCG2表達陽性的CSCs。近年來研究表明腫瘤中ABCG2的表達與臨床預后相關，HANG等[13]研究發現，ABCG2可作為食管鱗狀細胞癌預測預后的獨立指標；LEE等[14]研究發現ABCG2高表達在胰腺癌中可作為早復發和預后差的獨立預測指標。本研究結果顯示，MOA組中ABCG2表達陽性率顯著高于M-BOT及MOC組，M-BOT組中ABCG2表達陽性率顯著高于MOC組，提示ABCG2在卵巢黏液性腫瘤良性、交界性及惡性轉化中可能起著一定作用，隨著MOA組織分化程度降低，ABCG2陽性表達率也隨之增高，其蛋白檢測可能用于卵巢黏液性腫瘤惡性程度的判斷。根據FIGO分期，III～IV期中ABCG2陽性表達率比I～II期高，提示ABCG2可能參與MOA疾病的進展。此外，研究針對ABCG2的靶向治療可能抑制腫瘤發展、減少腫瘤化療耐受和提高患者生存率。SHEN等[15]研究發現，miR-142-3p通過下調CD133、Lgr5及ABCG2在結腸癌的表達從而抑制結腸癌的生長；聯合應用ABCG2的抑制劑和化療藥物，可能提高腫瘤對化療藥物的敏感性。因此，針對ABCG2陽性細胞的靶點治療有望成為卵巢癌治療的新方向。

表2 ABCG2的表達與MOA臨床病理特征的關系