基礎醫學

Mfn2在環孢素A誘導HeLa細胞生長停滯中的作用

朱敏，張雯，鮑旭霞，等

摘要：目的：探討組蛋白去乙酰化酶（histone deacetylase，HDAC）抑制劑——環孢素A（trichostatin A，TSA）對人宮頸癌 HeLa細胞中線粒體融合蛋白2（mitofusin 2，Mfn2）表達水平及其下游通路的影響。方法：用不同濃度（0.2、0.4和0.8 μmol/L）的TSA處理HeLa細胞，采用細胞計數試劑盒8（cell counting kit-8，CCK-8）法測定HeLa細胞活力；采用5-溴-2'-脫氧尿嘧啶核苷（5-bromo-2'-deoxyuridine，BrdU）摻入法檢測HeLa細胞增殖情況；采用流式細胞術檢測HeLa細胞凋亡及細胞周期的改變；將特異性定位于線粒體的紅色熒光蛋白（red fluorescent protein，RFP）轉染HeLa細胞，24 h后通過激光共聚焦顯微鏡觀察細胞線粒體形態的變化；采用Western blot檢測HeLa細胞中Ras、Raf、磷酸化 Raf（phosphorylated Raf，p-Raf）、細胞外信號調節激酶（extracellular signal-regulated kinase，ERK）、磷酸化ERK（phosphorylated ERK，p-ERK）、蛋白激酶 B（protein kinase B，PKB/Akt）、磷酸化 Akt（phosphorylated Akt，p-Akt）和Mfn2的蛋白水平；采用real-time PCR檢測Mfn2 mRNA的表達水平；采用免疫共沉淀法檢測Mfn2是否與Ras有相互作用。在HeLa細胞中過表達Mfn2后，再次觀察上述指標的改變。結果：TSA對HeLa細胞的活力有顯著的抑制作用，并促進細胞凋亡，使處于G2/M期的細胞比例明顯升高，且該作用呈劑量和時間依賴性。HeLa細胞經TSA處理后，線粒體形態明顯變長，Mfn2的mRNA和蛋白表達水平均顯著增高，Mfn2與Ras的結合水平升高，Raf和ERK蛋白的磷酸化水平降低。在 HeLa細胞中過表達 Mfn2，可導致線粒體長度明顯增加，細胞活力亦受到明顯抑制，同時細胞阻滯于G2/M期，Raf和ERK的磷酸化水平降低，Ras-Raf-ERK通路受到抑制，但細胞凋亡水平的變化不明顯。結論：Mfn2參與了HDAC抑制劑TSA誘導的HeLa細胞生長阻滯，其效應可能是通過抑制 Ras-Raf-ERK通路實現的。

來源出版物：中國病理生理雜志, 2016, 32(1): 95-100

入選年份：2016