新生兒外周血有核紅細胞檢測與精準醫療的研究

韋桂蘭 綜述,蔣文欽 審校

(廣西壯族自治區桂林市人民醫院檢驗科　541002)

新生兒外周血有核紅細胞(NRBC)檢測是臨床檢驗項目，NRBC在新生兒中的臨床意義還不清楚，對新生兒外周血NRBC檢出率最高的是出生后的第1天，然后其數量隨著日齡增加而減少。目前，多種血液分析儀可對NRBC進行報警提示，具有篩查功能，很多醫院還沒有對NRBC進行常規檢測和常規報告，復檢NRBC僅限于校正白細胞使用。結合新生兒的生理病理特點，參照血液分析儀異常報警信息，筆者所在科室建立了適合本院的新生兒外周血NRBC復檢規則，經過評估和驗證，證明它是適合于新生兒NRBC的復檢規則，通過儀器法與手工顯微鏡檢查聯合檢測，實現精準檢驗。胎兒NRBC被學者們認為是無創性產前診斷的最佳細胞來源，對新生兒有核紅細胞檢測與相關疾病的研究也引起了越來越多的臨床醫生關注[1-2]。

1　新生兒外周血NRBC檢測方法

1.1鏡檢法(以鏡檢法為金標準)在SP-1000i自動或手動模式推片染色，用油鏡在血膜體尾交界處分類400個白細胞時所見到的有核紅細胞，同時計數所見到的NRBC數[3-4]。

1.2血液分析儀法Sysmex XN-1000全自動分析儀檢測NRBC XN-1000有兩個通道即WBC/BASO和NRBC通道(也叫WNR通道)，為了進行白細胞精準檢測增加了對NRBC的修正功能。在WNR通道中可對白細胞進行計數和分類，也可對NRBC和嗜堿性粒細胞進行計數。Lysercell WNR試劑中的表面活性劑可使紅細胞溶血的同時也能透過白細胞的細胞膜。 根據白細胞外形和內部結構的特征不同，利用散射光可捕捉和辨別其形態的差異，從而把嗜堿性粒細胞與其他白細胞區分開來。Fluorocell WNR試劑可同時對白細胞及NRBC的核酸、細胞器進行熒光染色，白細胞染色部位比NRBC多，同時白細胞熒光強度也比NRBC強。可根據熒光量的差異，將NRBC其他白細胞進行區別計數，記錄得到NRBC的絕對數(×109/L)和百分率(NRBC%)數據，也可避免NRBC對白細胞的干擾。

2　全血細胞分析儀檢測外周血NRBC與手工顯微鏡檢查聯合檢測能為臨床提供精準檢驗

多種全血細胞分析儀對有核紅細胞進行應用評價研究顯示，System XE-2100能準確地自動計數外周血中NRBC，也可在NRBC增高時準確計數白細胞數量,還有助于一些血液病及非血液病患者的篩查與診斷[5]。 XE-2100血細胞分析儀檢測外周血，對NRBC有良好的過篩功能，但還不能完全代替手工顯微鏡檢查，仍需嚴格按照血細胞復檢規則對標本進行復檢[6]。儀器計數新生兒外周血NRBC的重復性明顯好于顯微鏡計數法，System XE-2100對新生兒外周血NRBC計數快速、準確，能很好地滿足臨床應用[7]。XE-5000全自動血液細胞分析儀可替代傳統的顯微鏡分類計數方法應用于臨床[8]。洪駿等[9]的研究結果顯示：System XN-2000全自動血液分析儀可以準確地檢測外周血NRBC，并可自動校正WBC分類計數結果，有效降低推片復檢率，縮短了標本周轉時間。使用XN-3000進行外周血NRBC計數，準確性高，可替代顯微鏡法，有一定的臨床應用價值[10]。XN-1000檢測NRBC比流式細胞術有更高的診斷特異性(95.7%)，能快速、準確、有效地自動計數外周血NRBC[3]。 XN-9000能快速、準確、有效地自動計數外周血NRBC。當鏡檢結果與儀器檢測結果差異較大時,需重新校正WBC計數[11]。雅培CELL-DYN Ruby全自動血細胞分析儀檢測NRBC時結果的準確性較差,當有NRBC的報警提示時,一定要推血涂片鏡檢計數,并用公式計算出白細胞總數[12]。精準檢驗是支撐精準醫療的基礎，臨床實驗室建設是檢驗精準的保障。目前臨床實驗室的全血細胞分析儀有多種多樣，參差不齊，隨著檢驗技術的不斷提高和檢驗儀器的不斷更新，臨床實驗室把新技術、新方法和新設備及時地應用于常規檢驗工作，服務于精準醫療，通過大數據的建立、整合，應用到醫療實踐中去，實現精準醫療。目前本科室已使用XN-1000常規檢測新生兒外周血NRBC，直接測得NRBC數據，結合人工鏡檢結果，報告NRBC#和NRBC%，通過實踐證明，在保證質量控制的前提下，此法對新生兒NRBC聯合檢測比傳統方法更快捷更準確，對新生兒NRBC精準檢驗是可以做到的。

3　精準醫療在有核紅細胞檢測中的應用

WALKNOWSKA等在1969年首次報道從孕婦外周血中提取胎兒細胞進行產前診斷，隨后的研究表明，胎兒NRBC是最好的產前診斷細胞來源，而具有完整的核物質胎兒NRBC，攜帶了完整的胎兒基因[1]。目前高通量基因測序已用于產前篩查與診斷；劉麗平等[1]研究顯示，胎兒有異常的孕婦其外周血中也有胎兒NRBC增多的現象。王志宏等[13]的研究提示母血中胎兒NRBC數量增加預示妊娠并發癥程度加重并威脅胎兒生命,應積極采取干預措施,必要時終止妊娠。但由于孕婦外周血胎兒細胞含量很少，分離技術復雜，價格貴等原因，此技術尚不能在臨床推廣使用。眾多研究表明,許多急性和慢性刺激可以導致循環血液中NRBC數量增加,新生兒外周血NRBC數與新生兒窒息嚴重程度有關，新生兒外周血NRBC計數對新生兒窒息的早期診斷和窒息程度判斷及預后具有重要意義[14]。譚寧等[15]的研究顯示與NRBC計數與圍生期窒息新生兒早期腦損傷程度存在相關性,對評估新生兒腦損傷預后有一定價值。李灝等[16]的研究顯示與NRBC產生和釋放增加有關的各種病理過程,并強調急慢性缺氧、免疫調節等對NRBC的影響。賈中偉等[17]等檢測外周血NRBC可能成為新生兒窒息診斷的依據之一。健康成人中無NRBC，成人外周血中一旦出現NRBC則為病理現象，準確計數外周血中的NRBC具有重要的臨床意義。新生兒外周血的NRBC在出生后很快減少,隨著新生兒外周血NRBC檢測作為一項常規項目開展，精準檢驗新生兒外周血NRBC變成了可行。目前作為前沿檢驗技術的高通量測序、質譜等檢測還很多的問題需要解決，在分子診斷學技術、質譜技術等領域，醫學檢驗迫切需要采用自建檢測方法開展一些新的檢驗項目，在臨床檢驗中基于準確性的標準化檢測是目前急需的[18-19]。探討新生兒外周血NRBC精準檢測方法能為臨床提供更準確的數據，以利于臨床的跟蹤治療與科學研究。

4　問題與展望

利用血液分析儀直接檢測NRBC數量和百分數，有望成為常規的檢測方法，尤其與手工鏡檢聯合檢測可提供更準確的結果。目前，很多醫院還沒有對外周血NRBC進行常規檢測和常規報告，對NRBC的檢測和復檢規則的應用主要是用于校正白細胞使用。各實驗室很少做本實驗室的正常參考值，對于新生兒血液中NRBC數量的正常參考范圍尚有待大量臨床研究來驗證[16]。已經被證實了的是孕婦胎兒NRBC是最好的產前診斷細胞來源。近年來，因為我國婚檢率下降和“二孩政策”放開后出現大量高齡產婦，出生缺陷率呈上升趨勢。而新生兒NRBC是否能成為早期診斷新生兒疾病的靶細胞，尚需要大量臨床研究資料來證實。臨床實驗室是實現精準檢驗的載體，把一些新技術、新方法和新設備及時地應用于常規檢驗工作，做到檢驗精準，才能為精準醫療提供更加可靠的依據，才能服務于精準醫療[20]。