環(huán)介導恒溫擴增技術(shù)快速檢測禽流感病毒

商曉桂，韓志玲，閆聰，楊波，范秀麗，郝鵬，張貴剛，陳九連，劉國英

（金宇保靈生物藥品有限公司，呼和浩特 010030）

0 引言

進入21世紀，我國醫(yī)療水平得到快速的發(fā)展，特別是在一些傳染速度較快的流感病毒中，我國醫(yī)療技術(shù)發(fā)展更是得到相關(guān)部門的高度重視。禽流感病毒是一種非常常見的病毒，并且對于身體健康的影響非常嚴重，許多人對于禽流感病毒的檢測非常重視。通過環(huán)介導恒溫擴增技術(shù)快速檢測禽流感病毒做出相關(guān)的分析，提高我國禽流感病毒的控制和檢測準確度。

1 禽流感病毒簡介

禽流感病毒是一種非常常見的病毒，它是由A型流感病毒引起的一種禽類感染病毒，這種病毒不僅會在家禽內(nèi)部進行傳染，也可以感染人類。我國家畜家禽防疫條例將這種禽流感設立為動物疾病，對于禽流感的控制有非常重要的公共衛(wèi)生意義，這種疾病也被列為肉類食品安全的風險因素，在世界范圍內(nèi)受到廣泛關(guān)注。高致病性禽流感病毒的致病力非常強，并且如果感染禽流感，死亡率極高，人一旦感染禽流感，死亡率達到60%以上，家禽感染禽流感死亡率達到100%。

1997年，我國在香港首次發(fā)現(xiàn)禽流感病例，并且禽流感病毒可以直接感染人。2003年底禽流感病毒已在16個國家造成人類死亡，它不僅給家禽養(yǎng)殖業(yè)造成很大的經(jīng)濟損失，也嚴重影響人類的身體健康，禽流感病毒利用咽部以上的呼吸道以及消化道的感染途徑，通過動物特別是病死的家禽對人類進行傳染。低致病性禽流感病毒，雖然沒有高致病性禽流感病毒死亡率高，但是它的分布范圍比高致病性的禽流感病毒范圍廣泛，并且這種禽流感病毒對人的危害十分持久，目前低致病性的禽流感病毒難以控制，這種禽流感病毒大多在每年11月至次年3、4月進行傳播，并且傳播速度十分迅速，如果大型養(yǎng)雞場受到禽流感病毒的感染，則很難徹底清除掉。

禽流感病毒也在很大程度上影響我國食品的安全，因為禽流感病毒可以通過食品對人類進行傳染，而食品安全中一個非常重要的影響因素是在家禽進行生產(chǎn)和飼養(yǎng)中，很有可能通過家禽體內(nèi)的病毒傳播給人類，進而引起人類患禽流感，甚至導致人類死亡。自2012年，越南已有14個省爆發(fā)禽流感病，有6.5萬只雞、鴨出現(xiàn)死亡，同時有4人感染禽流感病毒，其中3人病情十分嚴重。2012年，我國感染禽流感病毒人數(shù)已超過50萬人，其中有1 300多人死亡，禽流感對人體健康的危害理應受到重視。

2 環(huán)介導恒溫擴增技術(shù)對禽流感病毒的檢測

2.1 檢測優(yōu)勢

對于中國地區(qū)的發(fā)展，禽流感有非常廣泛的流行性以及重要的公共衛(wèi)生意義，因此，需要一個較為有效的方法對禽流感病毒進行檢測，而環(huán)介導恒溫擴增技術(shù)在進行檢測時方便、快捷。傳統(tǒng)的檢測方法進行禽流感病毒的檢測需要針對不同的病毒進行分別測試，如血凝性試驗、血凝抑制試驗等。熒光RT-PCR在進行禽流感的檢測中，相對于傳統(tǒng)的檢測方法更加快捷、迅速，但是需要較為專業(yè)的儀器作為輔助，這使檢測成本極大地提高，并且許多實驗室由于沒有較為專業(yè)的儀器，難以進行專業(yè)的檢測，屬于一種難以推廣的方法[1]。

環(huán)介導恒溫擴增技術(shù)仍然是一種十分理想的檢測方法，這項技術(shù)在進行檢測時，主要依據(jù)新型的恒溫核酸擴增技術(shù)，通過靶基因的6個區(qū)域設計出4種不同的特征引物，利用這些引物中的DNA聚合酶，在等溫的條件下進行工作，使瓊脂糖凝膠出現(xiàn)階梯狀的條帶，另外，因為特殊的熒光材料可以與反應體系進行結(jié)合，使陽性的結(jié)果產(chǎn)生出人眼可以分辨出的熒光綠色，這種方法也能滿足工作的需要，使工作更加方便、快捷。

此外，通過實時的渾濁度檢測，可以判定出擴張的結(jié)果，如果渾濁度大于等于0.1，結(jié)果表現(xiàn)陽性。這種方法相對于其他方法靈敏度更高，并且具有特異性強、快速和便捷的特點。在進行工作時不需要開蓋就可以一步完成，在很大程度上避免了氣溶膠對其產(chǎn)生污染。采用較為先進的綠色熒光方法也可以使工作人員在辨別時，不需要通過其他特殊的儀器裝備，辨別出是否存在禽流感病毒，在現(xiàn)場檢測時也可以實現(xiàn)快速檢測，在禽流感病毒的發(fā)展中，環(huán)介導恒溫擴增技術(shù)發(fā)揮不可忽視的作用，為我國醫(yī)學科技奠定堅實的基礎(chǔ)[2]。

2.2 工作展望

禽流感對我國人民以及家畜的發(fā)展有很多不利的影響，因此，在未來的發(fā)展中，需要對環(huán)介導恒溫擴增技術(shù)進行不斷的革新。在具體試驗時，可以發(fā)現(xiàn)環(huán)介導恒溫擴增技術(shù)在進行檢測時假陽性率十分高，因此需要進一步對其作用機理進行研究，降低假陽性的出現(xiàn)，使環(huán)介導恒溫擴增技術(shù)在進行檢測時更加準確，不出現(xiàn)其他的誤差影響禽流感病毒的檢測，進而使整個檢測結(jié)果更加準確，而且不需要其他機器進行輔助，檢測的過程更加快捷[3]。

環(huán)介導恒溫擴增技術(shù)在進行檢測時，它的結(jié)果有2種，一種是擴增，另一種是不擴增。這種簡單的判定方法會同時檢測多種核酸，這對樣本的復雜性進行了限制，因此為檢測出更多重的禽流感病毒，需要對環(huán)介導恒溫擴增技術(shù)進行更多實用性的研究。對于禽流感病毒，在進行傳染的過程中，可能出現(xiàn)很多變異情況，這對于我國的環(huán)介導恒溫擴增技術(shù)又提出了更高的要求，因此，我國環(huán)介導恒溫擴增技術(shù)需要得到更好的發(fā)展，才能滿足我國禽流感病毒的檢測需要，使檢測結(jié)果更加準確[4]。

3 結(jié)束語

禽流感病毒對人體的危害十分嚴重，并且在很大程度上抑制了我國家禽業(yè)的發(fā)展，因此在未來的發(fā)展中，需要根據(jù)禽流感病毒的不斷變化，研制出更好的檢測方法，也應該對環(huán)介導恒溫擴增技術(shù)進行推廣，使其能更好地進行禽流感病毒的檢測。另外，需要提升禽流感病毒的檢測技術(shù)，使檢測技術(shù)更加快捷，進而更好地滿足我國醫(yī)學科技發(fā)展的需要。