兩種方法檢測兒童肺炎支原體感染結果的對比分析

鄭琦 李悅 王大利 譚月弘 譚瀟漪 王宏宇

[摘要]目的 比較不同年齡階段兒童肺炎支原體IgM和DNA檢驗結果，探討兩種檢測方法對兒童肺炎支原體感染診斷的意義。方法 選取2015年3月～2017年3月在我院呼吸內科住院的514例支氣管肺炎患兒，同時采用血清學方法和PCR法檢測患兒的肺炎支原體感染情況，根據不同年齡段進行對比分析。結果 514例患兒MP-DNA的陽性率為27.6%，MP-IgM的陽性率為29.4%，差異無統計學意義（P>0.05）。嬰幼兒時期MP-IgM的陽性檢出率明顯高于MP-DNA，差異有統計學意義（χ2=8.12，P<0.01）。兒童肺炎支原體感染IgM和DNA陽性總符合率為27.9%，其中7～18歲符合率最高為38.9%。結論 MP-IgM和MP-DNA兩種檢測方法的總陽性率結果并無差別，而不同年齡段的陽性率分布有差異。對于<3歲的兒童宜采用血清學法和PCR法聯合檢測，以提高診斷率。

[關鍵詞]肺炎支原體；IgM抗體；DNA；年齡；兒童

[中圖分類號] R563.1 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721（2018）12（c）-0140-03

[Abstract] Objective To compare the results of Mycoplasma pneumonia IgM antibody and DNA test from different age children， and to explore its application value in diagnosis of Mycoplasma pneumoniae infection. Methods A total of 514 cases of bronchial pneumonia children hospitalized in the department of respiration internal medicine from March 2015 to March 2017 were included， serological method and PCR were used to detect children with Mycoplasma pneumoniae infection. Meanwhile datas were analyzed according to different age groups. Results The positive rate of MP-DNA with 514 patients was 27.6%， the positive rate of MP-IgM was 29.4% and the differences were no statistically significant （P>0.05）. The positive detection rate of MP-IgM was significantly higher than that in the MP-DNA in fancy， and the difference was statistically significant （χ2=8.12， P<0.01）. The positive consistency rate of MP-IgM and MP-DNA was 27.9%， with 7-18 year-olds the highest up to 38.9%. Conclusion The positive rate of MP-IgM and MP- DNA are no significant difference， but the distributions of different age are varied. For<3 year-olds children， combine detection method of MP-IgM and MP-DNA can improve the diagnostic rates.

[Key words] Mycoplasma pneumonia； IgM antibody； DNA； Age； Children

肺炎支原體（Mycoplasma pneumoniae，MP）是小兒呼吸道感染的常見病原體之一，引發的呼吸道感染臨床表現多種多樣，且多不典型，易被誤診而延誤治療。目前檢測MP抗體的血清學法和核酸的PCR法是診斷MP感染最常用的實驗室方法，由于方法學的差異，同一患兒這兩種指標并不總是完全一致[1]，這就給臨床診斷帶來困擾。本研究通過收集同一患兒MP-IgM和MP-DNA的測定結果，對比分析兩種方法陽性檢出率的分布特征及在不同年齡段其陽性結果的一致性，協助臨床選用適當的檢測方法及時、準確地診斷兒童MP感染。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2015年3月～2017年3月在我院呼吸內科住院的514例支氣管肺炎患兒，其中男268例，女246例；年齡為4個月～18歲，平均（7.5±2.6）歲。所有患兒入院后即采集鼻咽拭子標本，48 h內冷鏈運送至實驗室進行PCR法檢測，同時留取2 ml血清進行MP-IgM抗體檢測。

1.2儀器與試劑

MP抗體檢測試劑盒購自日本富士瑞必歐株式會社；MP核酸定量檢測試劑由湖南圣湘生物科技有限公司提供，同時使用瑞士Roche Cobas z 480實時熒光定量PCR儀進行檢測。

1.3血清學方法檢測MP-IgM

賽樂迪亞R-麥可Ⅱ檢測試劑盒采用被動凝集法，通過MP細胞膜成分（Mac株）致敏的人工明膠粒子與血清中的MP抗體發生凝集反應測定抗體，檢測按照說明書進行，結果以抗體滴度≥1∶40判斷為陽性。

1.4實時熒光定量PCR法檢測MP-DNA

MP-DNA按照說明書無菌提取，PCR擴增反應按照標準操作程序在Roche Cobas z 480儀器上進行，根據擴增反應的標準曲線確定閾值循環數（Ct）值，Ct值>40為陰性；Ct值≤38為陽性；Ct值為38～40需進行復檢，復檢后Ct值仍為38～40報告為陰性。每次試驗均設陽、陰性對照。

1.5統計學方法

采用SPSS 17.0統計學軟件對數據進行分析，計數資料以百分率表示，兩種檢測方法結果一致性比較、不同年齡組間檢測陽性率比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1 MP-IgM和MP-DNA陽性檢出率的比較

血清學方法和PCR法的MP陽性率分別為29.4%（151/514）、27.6%（142/514），差異無統計學意義（χ2=0.39，P>0.05）。不同年齡段兩種方法的陽性檢出情況比較，結果顯示嬰幼兒時期的MP-IgM陽性檢出率明顯高于MP-DNA，差異有統計學意義（χ2=8.12，P<0.01）；而學齡前與學齡期MP-IgM和MP-DNA的陽性檢出率比較，差異無統計學意義（P>0.05）（表1）。

2.2不同年齡MP-IgM和MP-DNA檢測陽性率一致性的比較

514例呼吸道感染患兒MP-IgM和MP-DNA初查結果中，陽性結果為229例，兩指標陽性結果的總符合率為27.9%，7～18歲符合率最高為38.9%，差異有統計學意義（χ2=30.54，P<0.01）。在兩者不一致的結果中，IgM陽性/DNA陰性的比率比較，差異無統計學意義（P>0.05）。但在<3歲組中，IgM陽性/DNA陰性的比率（59.3%）明顯高于IgM陰性/DNA陽性的比率（22.0%），差異有統計學意義（χ2=11.71，P<0.01）；在學齡期組中，IgM陽性/DNA陰性的比率（19.4%）則明顯低于IgM陰性/DNA陽性的比率（41.7%），差異有統計學意義（χ2=5.63，P<0.01）（表2）。

3討論

MP是一種介于病毒和細菌之間的無細胞壁型微生物，其所引起的肺炎支原體肺炎（Mycoplasma pneumoniae pneumonia，MPP）占所有社區獲得性肺炎的比例高達40%[2-3]，而其體積極小，極易通過飛沫傳播在兒童中引起暴發流行。由于大部分MP感染患兒的臨床表現不典型，缺乏特異影像學改變[4]，因此很難將其與病毒或細菌引起的感染相區別，而對MP感染的治療不同于其他病原體，因此早期確診，對MP感染患兒的治療及預后極為重要。

目前實驗室診斷MP的方法主要有培養法、血清學法和PCR法，其中支原體培養仍是診斷的金標準，但其培養時間長、操作復雜、陽性率低，在臨床上并不適于常規檢查以及快速檢測[5]。我院針對早期MP感染主要使用檢測抗體的血清學方法和檢測抗原的PCR法，血清學采用的日本富士MP檢測試劑盒技術成熟，成本較低，陽性率較高，但其特異性低，易出現假陽性結果[6]；PCR法靈敏度基本優于所有傳統的MP檢測方法，臨床逐漸將其視為MP檢測的“新金標準”[7]，但如實驗室質控不嚴，易出現污染導致PCR假陽性[8]。

本研究通過收集同一患兒MP-IgM和MP-DNA的測定結果，總檢測陽性率分別為29.4%和27.6%，差異無統計學意義，這與齊振勇等[9]的研究結果一致。從檢驗結果的陽性率分布特點看，MP-IgM和MP-DNA陽性率在不同年齡段有所差異，MP-IgM陽性率在4～6歲和7～18歲水平相對較高，<3歲陽性檢出率較低，而MP-DNA陽性率在7～18歲最高，4～6歲其次，<3歲最低。雖然目前認為由于嬰幼兒和學齡前兒童抵抗力弱，是感染MP的高發年齡[10]，但檢出結果提示由于嬰幼兒自身免疫免疫應答水平低，MP-IgM的檢出率并不高，這與趙巖等[11]的結論是一致的，可能是在MP感染初期不產生MP-IgM或者效價較低不易檢出[10]；而3歲以下兒童MP-IgM陽性率高于MP-DNA，差異有統計學意義，考慮可能與本研究樣本類型的采集質量有關，年齡較小的患者在采集鼻咽拭子時多伴哭鬧不配合，標本的病毒采集量直接影響MP-DNA的結果，同時就診前抗生素的應用也可使MP-DNA檢測呈陰性結果，此時即可出現MP-IgM陽性率高于MP-DNA，所以在臨床對3歲以下兒童診斷MP感染選擇檢測MP-DNA時一方面要根據個體用藥等情況選擇合適的樣本類型，并保證樣本質量度。分析不同年齡兩者結果陽性率的一致性，顯示陽性結果共229例，兩指標陽性結果總符合率為27.9%，以7～18歲符合率最高；在兩者不一致的結果中，IgM陽性/DNA陰性主要集中在嬰幼兒時期，DNA陽性/IgM陰性主要發生在7～18歲。結果不一致往往提示兩種方法存在假陰性跟假陽性結果，嬰幼兒時期出現高IgM陽性/DNA陰性比例的原因前面已經提到，而7～18歲的兒童DNA陽性/IgM陰性比例增高主要由于MP-DNA的陽性檢出率相對較高，該年齡段兒童對疾病有一定的抵抗力，猜測可能與MP的攜帶有關[12]，目前對MP在呼吸道的攜帶狀況尚沒有一個確切的域值以區分其在呼吸道的攜帶與感染[13]，因此MP-DNA陽性結果的指示意義不大。

綜上所述，通過對比分析血清學法和PCR法的陽性檢出結果，指導臨床針對不同年齡選用適當的檢測方法，同時聯合應用兩種方法用于早期檢測[14-15]，有利于疾病的診斷，能夠規避漏檢及假陽性結果，提高檢測的準確性。

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