急性腦梗死患者血清中可溶性白細胞分化抗原40配體和低氧誘導因子-1α的表達

陸 雙 陸 陽 羅 影 李 巖

(錦州醫科大學附屬第一醫院急診高壓氧病區，遼寧 錦州 121000)

急性腦梗死病變發展時神經細胞出現液化性壞死，進展快〔1〕。90%存活患者遺留不同程度的神經功能癥狀〔2〕。近年學者關注血清中相關因子的表達，發現相關蛋白水平表達升高，這些因子或者參與病變的進展或參與神經細胞的保護〔3〕。可溶性白細胞分化抗原40配體(sCD40L)屬于腫瘤壞死因子受體超家族成員，是體液免疫的一條重要細胞信號轉導通路〔4〕。sCD40L 可以誘導人類血管內皮細胞表達黏附分子，并刺激釋放趨化因子，這些分子均可以參與斑塊的形成，并能誘導內皮細胞和平滑肌細胞表達相關炎性因子，對斑塊的脂紋向斑塊轉化起重要作用〔5〕。低氧誘導因子(HIF)-1α是缺氧條件下的一種轉錄因子，由組織中分子氧的水平所誘導，激活后產生的效應是調節缺氧反應性基因表達的分子通路〔6〕。目前認為HIF-1α表達的下游基因有多種，其功能包括促進血管新生、調節紅細胞生成、調節氨基酸的代謝、促進腫瘤細胞的遷移等〔7〕。本文分析急性腦梗死患者血清中sCD40L和HIF-1α的表達及其臨床意義和相關性。

1 資料與方法

1.1臨床資料 2014年5月至2016年6月錦州醫科大學附屬第一醫院確診的急性腦梗死患者75例，納入均符合第四屆全國腦血管病學術會議標準確定的診斷標準，并經CT、磁共振成像(MRI)檢查證實。男40例，女35例，年齡51～79歲，平均65.3歲。發病在72 h以內，均為首次發病，既往無遺留的神經功能缺損癥狀。排除標準：①腦出血；②嚴重內臟器官疾病；③癲癇；④過敏體質。同期體檢證實無明顯器質性疾病且無神經功能障礙的正常成人血清標本18例為對照組，其中男9例，女9例，年齡40～64歲，平均58.7歲。兩組常規資料差異無統計學意義，具有可比性。

1.2酶聯免疫吸附法檢測血清中sCD40L和HIF-1α的表達 患者于入院后以抗凝管抽取肘空腹靜脈血3 ml，對照組成人常規抽取肘空腹靜脈血，均應用3 000 r/min離心15 min，分離血清，并置于-20℃冰箱中凍存，待檢。按照說明書應用酶聯免疫吸附法檢測sCD40L和HIF-1α的表達，做好質控工作。操作均由同一技師完成，減少人為誤差。

1.3腦梗死灶體積的分組 腦梗死灶體積根據患者發病2 d內頭顱MRI結果計算：梗死體積=a×b×c×層厚×π/6(a為梗死灶的最大長徑，b為與長徑相垂直的直徑，c為MRI掃描的陽性層數)。分為小梗死組≤4.0 cm3，中梗死組4.1～10.0 cm3，大梗死組>10.0 cm3。

1.4統計學方法 應用SPSS17.0統計軟件進行t檢驗、方差分析和相關性檢驗。

2 結 果

2.1兩組血清中sCD40L和HIF-1α表達比較 觀察組sCD40L和HIF-1α表達明顯高于對照組(P<0.01)，見表1。

表1 兩組血清中sCD40L和HIF-1α表達比較

2.2觀察組不同臨床特征患者血清中sCD40L和HIF-1α的表達比較 觀察組中不同梗死灶體積和不同預后分組患者血清中sCD40L和HIF-1α表達差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 觀察組不同臨床特征患者血清中sCD40L和HIF-1α的表達比較

2.3觀察組sCD40L和HIF-1α表達相關性 sCD40L和HIF-1α表達呈正相關(r=0.41，P=0.042 1)。

3 討 論

腦梗死與動脈粥樣硬化有直接關聯，動脈粥樣硬化是一種慢性炎癥性疾病，其涉及病變發展的各個階段〔8〕。血清中相關蛋白表達失調對病變的形成有一定作用〔9〕。sCD40L是CD40的天然配體，相對分子量為39 000 D，是一種跨膜糖蛋白，由261個氧基酸組成，分為3個區，即胞質區、跨膜區和胞外區。研究顯示sCD40L有多種表達形式，在細胞膜表達即可以形成同源三聚體，也可以形成異源三聚體〔10〕。sCD40L與效應細胞上的CD40分子結合后，使膜上的CD40分子交聯，改變了CD40胞外的部分結構，這時可以調節細胞間黏附分子、血管細胞黏附分子和P-選擇素的表達，誘導單核細胞及上皮細胞的合成，同時分泌更多的炎癥因子和促凝物質〔11,12〕。HIF-1α是一種轉錄因子，在缺氧誘導的基因表達調節中起重要作用〔13〕。在常氧狀態下，該因子不能發揮其生物學效應，在低氧的環境中，HIF-1α和細胞質中穩定表達的HIF-1α的亞單位結合，形成有活性的HIF-1α，激活后的HIF-1α可以調節多種下游基因轉錄，如對血管內皮生長因子的調節，對血小板源性生長因子的調控等，這些調控可以促進機體紅細胞的生成及血管構架的形成，調節氨基酸和糖能量代謝，參與神經細胞代謝和凋亡〔14,15〕。

本研究結果提示sCD40L和HIF-1α二者高表達在病變的形成和進展中有重要作用。sCD40L表達升高后與巨噬細胞表面的CD40結合，能激發炎性相關因子中IL-6和IL-8的釋放，而CD40L與內皮細胞表面的CD40結合，可以激活核因子的表達，增加E-選擇素、血管內皮細胞黏附分子(VCAM)-1和細胞間黏附分子(ICAM)-1的表達。在CD40L的作用下，平滑肌細胞和成纖維細胞也可以活化、增殖和遷移，促進動脈粥樣硬化的形成。因此sCD40L是通過調節促炎因子的表達，影響斑塊的形成、發展和穩定。而HIF-1α的表達升高，是缺血的一個反應性的變化，這可能是神經細胞保護作用的結果。本文結果提示sCD40L和HIF-1α二者高表達在一定程度上提示病變進程，即sCD40L和HIF-1α高表達預示著梗死灶的增大及不良的預后，病變處于進展狀態〔16,17〕。本文結果提示sCD40L和HIF-1α二者可能在一定程度上具有協同作用，可能與炎性反應因子的共同調控有關，也可能與腦梗死后的修復中血管內皮生長因子的增生有關，具體機制有待更多基礎實驗來證實。

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