凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體-1及其受體在急性冠脈綜合征早期診斷中的應用

陳紅偉 李彥明 李彥章

(新鄉市中心醫院心內科，河南 新鄉 453000)

凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體(LOX)-1是目前動脈粥樣硬化疾病研究最熱門的蛋白，Pirillo等〔1,2〕研究發現，LOX-1可以被某些蛋白水解酶及炎性因子裂解為可溶性LOX-1并釋放入血，可作為早期診斷急性心肌梗死(AMI)的一個指標。Inoue等〔3,4〕研究發現，在反映低密度脂蛋白(LDL)致動脈粥樣硬化的作用方面，包含載脂蛋白(Apo)B的LOX-1配體(LAB)指標更優，而且LAB在反映LDL致動脈粥樣硬化作用方面的效果優于氧化LDL(ox-LDL)、LDL或氧化脂類。Misaka等〔5〕將血清中LAB和可溶性LOX(sLOX)-1兩個指標結合，建立指標LOX-1 Index，在急性冠脈綜合征(ACS)患者早期診斷中比sLOX-1更具有優勢〔6〕。本文探討冠狀循環和體循環LOX-1 Index在ACS病人早期診斷中的作用。

1 材料與方法

1.1研究對象 2013年1～12月因典型胸痛來河南大學淮河醫院心內科住院治療的患者。根據美國心臟病協會/歐洲心臟病協會(ACC/ESC)的診斷標準〔7〕和排除標準〔①入院前進行過心肺復蘇的ACS病人；②入院前3個月內有明顯的炎性疾病(感染性疾病、風濕性疾病、發熱、自身免疫性疾病、肌病及肌炎進展期等)、腦血管疾病或其他嚴重的心臟病；③入院前3個月內服用過抗生素及炎癥抑制藥；④合并腫瘤、肝腎及其他器官功能不全；⑤入院前3個月有外科手術史，AMI病人經靜脈溶栓及急診介入治療術后病情危重者〕，最終納入ACS 50例及臨床確診為穩定型心絞痛(EAP)50例。ACS組平均年齡為(61.92±7.63)歲；EAP組平均年齡為(62.20±6.16)歲，ACS和EAP組男性構成比分別為66%和58%且ACS和EAP組高血壓(84% vs 90%)、糖尿病(48% vs 52%)、血脂異常(66% vs 74%)、肥胖(28% vs 40%)和吸煙率(62% vs 54%)差異無統計學意義(P>0.05)。本研究得到了河南大學淮河醫院倫理委員會的批準，研究對象均知情同意。

1.2資料收集 病人入院后，詳細記錄冠心病家族史、身高、體重、吸煙史、高血壓史、糖尿病史及血脂異常等資料信息。同時根據病情，ACS患者行急診冠狀動脈造影(CAG)，EAP患者行擇期CAG后行經皮冠狀動脈介入(PCI)。

1.3標本采集 所有患者行PCI前即刻采集外周靜脈血5 ml(體循環)，然后根據冠狀血管病變部位在PCI前采集冠狀動脈病變處血液5 ml(冠狀循環)，上述采集到的血液立即處理，放于-80℃冰箱內保存待測。檢測指標包括sLOX-1、LAB等。參照Misaka等〔5〕建立的LOX-1 Index計算方法(LOX-1 Index=LAB × sLOX-1)。

1.4主要儀器及試劑 醫用低速離心機(上海盧湘儀離心機儀器有限公司TDZ5-WS)、電熱恒溫培養箱〔常州潤華電器有限公司(DHP-9012)〕、全自動酶標讀數儀(美國Bio-RAD255)、全自動生化分析儀(日本日立7600)、全自動酶聯免疫分析儀〔貝克曼庫爾特公司(UniCel DxI 800)〕、384孔檢測微孔板(上海百賽生物技術有限公司)、sLOX-1試劑盒(美國R&D公司)、磷酸沖洗液(PBS)、牛血清蛋白(BSA)、HEPES緩沖液、乙二胺四乙酸(EDTA)、四甲基聯苯胺(TMB)均購自上海百賽生物技術有限公司。

1.5指標測定 采用抗體酶聯免疫夾心法檢測sLOX-1濃度，根據購買試劑盒說明書規范操作，用全自動酶標讀數儀在450 nm波長下測定OD值，用6個標準孔測量值繪制標準曲線，通過標準計算樣品中sLOX-1濃度。根據購買的試劑盒說明進行規范操作，用全自動酶標讀數儀在450 nm波長下測定OD值，用6個標準孔測量值繪制標準曲線，通過標準計算樣品中LAB濃度。以上實驗均重復3次，分別取平均值。

1.6統計學分析 應用SPSS16.0統計軟件進行t檢驗、非參數秩和檢驗和受試者工作特征(ROC)曲線分析及Spearman分析。

2 結 果

2.1體循環和冠狀循環血液sLOX-1、LAB及LOX-1 Index水平 ACS和EAP組冠狀循環sLOX-1、LAB和LOX-1 Index水平均顯著高于體循環；ACS組冠狀循環sLOX-1、LAB和LOX-1 Index水平均分別高于EAP組，同時ACS組體循環sLOX-1、LAB和LOX-1 Index水平也均分別高于EAP組(P<0.05)。見表1。

表1 兩組體循環和冠狀循環sLOX-1、LAB及LOX-1 Index比較

與體循環比較：1)P<0.05；與ACS組比較：2)P<0.05

2.2體循環和冠狀循環血液LOX-1 Index水平相關性 ACS患者冠狀循環和體循環血液LOX-1 Index呈正相關(Rs=0.98，P<0.05)；EAP患者冠狀循環和體循環血液LOX-1 Index呈正相關(Rs=0.96，P<0.05)。

2.3ROC曲線分析LOX-1 Index在ACS早期診斷中的應用 以患者冠狀循環或體循環LOX-1 Index 值為目標變量，以患者是否確診為ACS(1=ACS,0=EAP)為診斷變量，冠狀循環和體循環LOX-1 Index值在ACS早期診斷中均具有良好的效果，ROC曲線下面積(AUC)分別為0.87(95%CI:0.81～0.94)和0.79(95%CI:0.71～0.88)，根據ROC曲線圖最左上角點為最佳截斷點原則，可以將冠狀循環LOX-1 Index值≥347，體循環LOX-1 Index值≥305作為ACS早期診斷的截斷點。

3 討 論

LOX-1是在牛的主動脈內皮細胞內發現的〔8〕。LOX-1與ox-LDL特異性結合，促使血液循環的單核細胞轉至內皮下，促進平滑肌細胞和巨噬細胞吞噬脂質，生成泡沫細胞〔9〕。LOX-1可誘導血管平滑肌細胞凋亡，并通過二磷酸腺苷抑制劑抑制其誘導的血小板聚集〔10，11〕，參與動脈粥樣硬化從早期到后期的全過程。Murase等〔12〕發現，LOX-1可以被某些蛋白水解酶及炎性因子裂解為sLOX-1并釋放入血，可作為早期診斷AMI的一個指標。

Inoue等〔3〕于2007年建立了血清LAB含量的測量標準，為研究人員從配體角度分析LDL致動脈粥樣硬化的生物學活性提供了方法。

目前，臨床上用于心肌梗死的輔助診斷的心臟標志物包括肌紅蛋白(Myo)、肌鈣蛋白(cTn)I、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、超敏C反應蛋白(hs-CRP)、sLOX-1等，單一的心臟標志物用于臨床檢測已經不能滿足心內科醫生的要求，將多種生物標志物聯合檢測能夠更好地服務于臨床。研究表明〔13〕，聯合檢測CK-MB、Myo、cTnI、hs-CRP對ACS診斷的靈敏度為100.0%，特異度為92.7%，顯著高于4種指標的單獨診斷效率。本研究提示ACS患者冠狀動脈血管病變過程中，LOX-1 Index比sLOX-1和LAB更具優勢〔3，14〕，是一個ACS早期診斷的更全面綜合指標。本研究提示冠狀循環和體循環血液LOX-1 Index值在ACS早期診斷中均有良好的效果，這與Kobayashi等〔3,6〕研究結果一致。

本研究為患者做PCI時采集冠狀動脈病變部位的血液來代表冠狀循環，改進了Misaka等〔5〕采集冠狀靜脈竇血液來反映冠狀循環的方法，減少了患者的痛苦，提高了依從性。雖然該方法采集的血液在反映冠狀循環的代表性不如冠狀靜脈竇血液，但本研究的結論與日本學者的結果一致，并找出了該方法采集血液中LOX-1 Index在ACS早期診斷的臨界值，所以通過采集冠狀動脈病變部位的血液來代表冠狀循環仍具有良好的可靠性。但本研究具有一些局限性，首先由于本課題設計屬于探索性研究，樣本量相對較少；其次是研究對象納入時間跨度較長，患者就診時間和表現差異較大，存在選擇性偏倚。

1Pirillo A,Catapano AL.Soluble lectin-like oxidized low density lipoprotein receptor-1 as a biochemical marker for atherosclerosis related diseases〔J〕.Dis Markers,2013;35(5):413-8.

2郭瑞霞,張 曉,朱記法,等.急性冠脈綜合征患者血清可溶性血凝素氧化低密度脂蛋白受體-1和膽紅素表達水平的臨床意義〔J〕.中國老年學雜志,2014;34(7):1929-30.

3Inoue N,Okamura T,Kokubo Y,etal.LOX index,a novel predictive biochemical marker for coronary heart disease and stroke〔J〕.Clin Chem,2010;56(4):550-8.

4Okamura T,Sekikawa A,Sawamura T,etal.Series:clinical study from Japan and its reflections;LOX-1 ligrands containing apolipoprotein B and carotid intima media thickness in middle aged community dwelling us Caucasian and Japanese men〔J〕.Nihon Naika Gakkai Zasshi,2014;103(1):173-80.

5Misaka T,Suzuki S,Sakamoto N,etal.Significance of soluble lectin like oxidized LDL receptor-1 level in systemic and coronary circulation in acute coronary syndrome〔J〕.Biomed Res Int,2014;2014(649185):1-7.

6Kobayashi N,Takano M,Hata N,etal.Soluable lectin-like oxidized LDL receptor-1(sLOX-1)as a valuable diagnostic marker for rupture of thin-cap fibroatheroma:verification by optical coherence tomography〔J〕.Int J Cardiol,2013;168(4):3217-23.

7Zhang YC,Tang Y,Chen Y,etal.Oxidized low density lipoprotein and C-reactive protein have combined utility for better predicting prognosis after acute coronary syndrome〔J〕.Cell Biochem Biophys,2014;68(2):379-85.

8Sawamura T,Kume N,Aoyama T,etal.An endothelial receptor for oxidized low-density lipoprotein〔J〕.Nature,1997;386(6620):73-7.

9Thakkar S,Wang X,Khaidakov M,etal.Structure based design targeted at LOX-1,a receptor for oxidized low density lipoprotein〔J〕.Sci Rep,2015;5:16740.

10Stancel N,Chen CC,Ke LY,etal.Interplay between CRP,atherogenic LDL,and LOX-1 and its potential role in the pathogenesis of atherosclerosis〔J〕.Clin Chem,2016;62(2):320-7.

11Chu CS,Wang YC,Lu LS,etal.Eletronegative low density lipoprotein increases C-reactive protein expression in vascular endothelial cells through the LOX-1 receptor〔J〕.PLoS One,2013;8(8):e70533.

12Murase T,kume N.Identification of soluble forms of lectin-like oxidized LDL receptor-1〔J〕.Arterioscler Thromb Vasc Biol,2000;20(3):715-20.

13Sabatine MS,Morrow DA,Gibson CM,etal.Multimarker approach to risk stratification in non-ST elevation acute coronary syndromes:simultaneous assessment of troponin I,C-reactive protein,and B-type natriuretic peptide〔J〕.Circulation,2002;105(15):1760-3.

14Sawamura T,Wakabayashi I,Okamura T.LOX-1 in atherosclerotic disease〔J〕.Clin Chim Acta,2015;440:157-63.