兩套檢測系統糖化血紅蛋白檢測結果的一致性分析

羅映杰+林鳳+劉艷婷+肖光軍

摘 要：目的 探討兩套檢測系統糖化血紅蛋白（HbA1c）檢測結果的一致性。方法 按照EP9-A2文件的要求，以PRIMUS Ultra2 HbA1c分析儀為參比系統，PRIMUS PDQ-Plus HbA1c分析儀為待評系統，使用新鮮抗凝全血對兩套檢測系統的結果進行比對分析，并評估其在不同醫學決定水平（XC）處的相對偏倚（SE%）。結果 兩套檢測系統HbA1c檢測結果的回歸方程為Y=0.9927X+0.1208，相關系數r2=0.9944，不同XC處的SE%均小于1/2TEa，能被臨床所接受。結論 PRIMUS PDQ-Plus與PRIMUS Ultra2 HbA1c分析儀檢測結果具有良好的一致性，可使用相同的參考范圍，能滿足臨床對糖尿病患者的診斷、治療和監測需求。

關鍵詞：糖化血紅蛋白分析儀；比對分析；偏倚評估；一致性

中圖分類號：R446.1 文獻標識碼：A DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2018.01.026

文章編號：1006-1959（2018）01-0074-03

Consistency Analysis of the Results of Glycosylated Hemoglobin Detection in Two Detection Systems

LUO Ying-jie1，LIN Feng2，LIU Yan-ting1，XIAO Guang-jun1

（1.Department of Laboratory，Suining Central Hospital，Suining 629000，Sichuan，China；

2.Major in Medical Laboratory Technology，Ya'an Vocational and Technical College，Ya'an 625000，Sichuan，China）

Abstract：Objective To investigate the two detection system of glycosylated hemoglobin（HbA1c）the consistency of test results.Methods According to the requirements of the EP9-A2 documents，the PRIMUS Ultra2 HbA1c analyzer as the reference system，the PRIMUS PDQ-Plus HbA1c analyzer for evaluation system，the use of fresh anticoagulant blood were compared and analyzed the results of two detection system，and evaluate the medical decision level in different relative bias（XC）at（SE%）.Results Two the regression equation of HbA1c detection system was Y=0.9927X+0.1208， correlation coefficient r2=0.9944，and SE% at different XC were less than 1/2TEa，which could be accepted by clinical practice.Conclusion The results of PRIMUS PDQ-Plus and PRIMUS Ultra2 HbA1c analyzer have good consistency and can be used in the same reference range.It can meet the needs of clinical diagnosis，treatment and monitoring of diabetic patients.

Key words：Glycosylated hemoglobin analyzer；Comparison analysis；Bias assessment；Consistency

糖化血紅蛋白（HbA1c）是紅細胞內的血紅蛋白（Hb）與糖類（主要是葡萄糖）經非酶促反應結合而形成的化合物，可以反映患者測定前120 d的平均血糖水平，與血糖等傳統的糖尿病診斷指標比較，其具有個體內生物學變異小（<2%）、不易受血糖波動的影響、無需空腹或特定時間取血、分析前不穩定性小等特點[1-2]，因此HbA1c被作為評估長期血糖控制狀況的金標準和是否需要調整治療方案的重要依據[3]，2010年美國糖尿病協會（ADA）并將HbA1c≥6.5%作為糖尿病診斷標準之一，WHO 也于2011年建議在條件具備的國家和地區采用這一切點診斷糖尿病[4]。目前糖化血紅蛋白檢測儀器生產廠家多，其測定原理各不相同，檢測標本時所測組分不同，其受干擾因素影響程度不同，導致不同檢測系統間檢測結果的一致性較差；另一方面，HbA1c在臨床實驗室檢測中存在儀器操作使用不規范、缺乏有效量值溯源體系、校準品和質控品管理和使用不規范、對方法的干擾因素認識不足等問題[5]，進一步加大了檢測系統間檢測結果的差異。我科室現有兩套檢測系統進行HbA1c檢測，僅PRIMUS Ultra 2 HbA1c檢測系統參加了衛生部室間質評活動，而PRIMUS PDQ-Plus檢測系統僅進行了室內質量控制，按照中國合格評定國家認可委員會（CNAS）-CL02《醫學實驗室質量和能力認可準則》[6]的要求，實驗室需定期進行比對，以觀察系統間檢測結果的一致性。本文參考美國臨床和實驗室標準化協會的EP9-A2文件[7]使用患者新鮮血液標本對我科室兩套糖化血紅蛋白檢測系統進行了方法比對及偏倚評估，并對其在不同醫學決定水平處（Xc）的相對偏倚（SE%）進行了臨床可接受性評價，以確保實驗室檢測結果的可靠性和一致性。endprint

1材料與方法

1.1儀器與試劑 PRIMUS Ultra 2 HbA1c分析儀及配套試劑：清洗液（批號：5788）；緩沖液2A（批號：6005）；緩沖液B（批號：5878）；稀釋緩沖液（批號：5889）、層析柱（批號：0282-5907）及其配套校準品； PRIMUS PDQ-Plus HbA1c分析儀及配套試劑：清洗液（批號：6008）、洗脫緩沖液1（批號：6714）、洗脫緩沖液2（批號：6657）、稀釋液（批號：6690）、層析柱（批號：0282-5907）及其配套校準品。高、低雙水平凍干粉質控品由美國伯樂生產，批號分別為33921和33922。

1.2標本來源 每天使用EDTA-K2抗凝真空采血管采集8例住院患者的新鮮血液2 ml，剔除貧血、溶血、黃疸、脂血等異常標本，連續8 d，共64例標本，其中男38例、女26例；標本中HbA1c的濃度范圍分布在4%～12%，均在兩套檢測系統的線性范圍內，且至少50%標本的測定結果處于實驗室的參考區間之外[7]。

1.3 實驗方法

1.3.1儀器校準和質控 試驗前，按照儀器使用說明書及儀器標準操作規程分別使用配套校準品對兩套檢測系統進行校準。校準成功后，在每天標本檢測前、后均須進行兩水平的質控分析。檢測前質控均在控后方可進行標本檢測；檢測后質控均在控則說明檢測結果可靠，數據可采用[8]。

1.3.2標本測定 以連續5 a衛生部HbA1c室間質評結果均優秀的PRIMUS Ultra-2 HbA1c分析儀為參比系統（X），PRIMUS PDQ-Plus HbA1c分析儀為待評系統（Y），將每天采集的8例新鮮抗凝全血標本隨機編號（1～8）后，在兩套檢測系統上分別進行雙份測定，第一次測定為順序（1～8），第二次測定標本為反向順序（8～1）[7]。

1.3.3 離群值檢驗 根據EP9-A2文件進行方法內及方法間的離群值檢驗[7]。

1.3.4 檢測結果的線性回歸及相關性分析 以PRIMUS Ultra-2 HbA1c分析儀雙份測定的均值為X軸，分別以PRIMUS PDQ-Plus HbA1c分析儀雙份測定的均值和兩檢測系統每份標本雙份測定的均值差為Y軸，繪制散點圖和偏倚圖，從而得到線性回歸方程（Y=bX+a）及其相關系數（r）。若r2≥0.95，表示X值取值范圍合適，則可用線性回歸來估計斜率和截距；若r2≤0.95，則必須分析更多的標本以擴大數據濃度分布范圍，然后再重新分析全部數據[2，7]。

1.3.5 臨床可接受性判斷 根據線性回歸方程計算不同Xc[2]的SE%， SE%=（Yc-Xc）×100/ Xc={（b-1） × Xc+a}×100/ Xc，然后以國家衛生計生委臨床檢驗中心室間質量評價標準（2017版）中HbA1c正確度驗證規定的總允許誤差（TEa）的1/2為臨床可接受水平，即SE%≤1/2TEa屬臨床可接受水平，表示兩檢測系統檢測結果具有一致性，檢測報告可使用相同的參考范圍。HbA1c正確度驗證的TEa為6%。

1.4 統計學處理 所有數據均采用Excel 2003軟件進行處理，并進行兩套檢測系統間的線性回歸相關性及偏倚分析 。

2結果

2.1離群值檢驗 經方法內離群值檢驗及方法間離群值檢驗，所有標本的檢測結果均未發現離群值。

2.2兩套檢測系統檢測結果的線性回歸方程及偏倚圖 以PRIMUS-Ultra 2全自動糖化血紅蛋白分析儀為參比系統（X），PRIMUS-PDQ Plus 糖化血紅蛋白分析儀為待評系統（Y），對同一標本分別在兩套檢測系統上兩次檢測結果的均值進行線性回歸分析，見圖1。其相關系數r2為0.9944； PRIMUS-PDQ Plus儀各標本HbA1c檢測結果均值的偏倚，見圖2。

2.3臨床可接受性判斷 PRIMUS PDQ-Plus HbA1c分析儀檢測結果在不同醫學決定水平處的相對偏倚（SE%），見表1。

3討論

雖然我國HbA1c檢測標準化工作起步較晚，通過各方努力已取得明顯的成績，如上海市臨檢中心、衛生部臨檢中心及北京市臨檢中心均先后建立了國際臨床化學與檢驗醫學聯合會[9]（IFCC）HbA1c檢測的一級參考方法；衛生部臨檢中心成功研制出國家一級標準物質[9]，并開展了正確度驗證計劃及室間質量評價活動；多家醫學實驗室通過了NGSP一級實驗室認證，其規范化操作流程和高質量檢測能力得到了國際權威組織的認可。但因我國地域遼闊，地理環境和各級實驗室的條件差異較大、HbA1c檢測試劑種類多、實驗室操作不規范等，導致室間質評相同儀器組內及不同儀器間的變異系數（CV%）仍然較大，無法達到HbA1c檢測結果的互認，故在2型糖尿病防治指南（2013年版）[4]中建議：“暫不推薦在我國將作為糖尿病切點，但對于標準化檢測方法，并有嚴格質量控制，正常參考值在4.0%～6.0%的醫院，HbA1c≥6.5%可作為診斷糖尿病的參考”。因此，提高HbA1c檢測結果的準確性和可比性以滿足臨床需求已成為關注的焦點，各級實驗室必須對其檢測系統進行一致性評價。

本實驗中兩套檢測系統均是由美國PRIMUS公司生產，采用親和高效液相層析法進行HbA1c檢測，通過糖基化的Hb均可與硼酸鹽結合成可逆性復合物的原理將糖基化血紅蛋白分離，檢測結果是標本中總糖化血紅蛋白的含量，再通過公式換算得到的HbA1c的量，其配套校準品可溯源至美國糖化血紅蛋白標準化計劃（NGSP）的糖尿病控制及并發癥試驗（DCCT）。使用配套校準品分別對檢測系統校準后，按照EP9-A2文件的要求，以Ultra2 HbA1c分析儀為參比系統，PDQ-Plus HbA1c分析儀為待評系統，使用新鮮抗凝全血對兩檢測系統的結果進行比對分析，研究結果顯示，其線性回歸方程為Y=0.9927X+0.1208，相關系數r2=0.9944；從圖2可知PDQ-Plus HbA1c分析儀檢測結果的偏倚隨Ultra2 HbA1c分析儀均值呈隨機分布，但均≤0.3%，但是有傾斜的趨勢；在4.8%、6.5%、7.0%、11.1%、16%5個XC處的SE%均小于國家衛生計生委臨床檢驗中心室間質量評價標準（2017版）中HbA1c正確度驗證所規定TEa的1/2，從而說明兩檢測系統的檢測結果具有一致性，能被臨床所接受，檢測報告可使用相同的參考范圍。endprint

綜上所述，PRIMUS PDQ-Plus與PRIMUS Ultra2 HbA1c分析儀檢測結果具有一致性，檢測報告可使用相同的參考范圍，PRIMUS PDQ-Plus HbA1c分析儀檢測結果準確可靠，能滿足臨床對糖尿病患者的診斷及療效評估。同時，實驗室應建立科學、完善的質量管理體系，按照《糖化血紅蛋白實驗室檢測指南》[1]、《糖化血紅蛋白檢測（WS/T461-2015）》[8]等文件進行標準化的操作，加強相關人員的培訓和與臨床的溝通，定期對醫院內不同檢測系統進行方法比對和一致性分析，積極參加室間質評活動及正確度驗證計劃以保證結果的準確性和可靠性。

參考文獻：

[1]衛生部臨床檢驗中心，北京市醫療器械研究所，北京大學人民醫院.糖化血紅蛋白實驗室檢測指南[J].中國糖尿病雜志，2013，21（8）：673-678.

[2]張禮強，李光榮，常歐，等.PRIMUS-PDQ Plus床旁檢測儀與BIO-RAD D10糖化血紅蛋白分析儀的一致性評估[J].檢驗醫學與臨床，2015，12（14）：2072-2073.

[3]中華醫學會糖尿病學分會.中國血糖監測臨床應用指南[J].中華糖尿病雜志，2015，7（10）：603-613.

[4]中華醫學會糖尿病學分會.中國2型糖尿病防治指南（2013年版）[J].中華糖尿病雜志，2014，6（7）：447-498.

[5]潘柏申.糖化血紅蛋白檢測標準化[J].國際內分泌代謝雜志，2015，35（3）：215-216.

[6]中國合格評審國家認可委員會.醫學實驗室質量和能力認可準則（ISO15189：2012，IDT）[S].2013.

[7]National Committee for Clinical Labomtory Standards.EP9-A2 method comparison and bais estimation using patient samples[S].Wayne，PA.USA：NCCLS，2002.

[8]中國人民共和國國家衛生和計劃生育委員會.糖化血紅蛋白檢測（WS/T461-2015）[S].2015.

[9]居漪.再談糖化血紅蛋白[J].檢驗醫學，2015，30（6）：547-553.

收稿日期：2017-5-7；修回日期：2017-6-8

編輯/李樺endprint