多發性骨髓瘤患者淋巴細胞亞群變化對免疫功能的影響研究

賈海英+黃睿+王玲玲+黃國虹+楊麗瑋+余亮+王昌敏

摘 要：目的 分析多發性骨髓瘤（MM）患者外周血T淋巴細胞、B淋巴細胞和自然殺傷（NK）細胞的變化。方法 收集69例MM患者及52例健康體檢人員的抗凝血，用流式細胞儀檢測外周血淋巴細胞總數（Lym）、CD3+ T淋巴細胞、CD19+ B淋巴細胞及CD16+56+ NK細胞數量。結果 與對照組比較，MM組Lym、CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、CD19+等6個項目差異均有統計學意義（P<0.05），CD16+56+差異無統計學意義（P>0.05）。結論 MM患者在疾病進程中與T淋巴細胞亞群及B淋巴細胞、Lym密切相關，對評價MM患者的免疫狀況、疾病進展和療效等方面具有重要作用。

關鍵詞：多發性骨髓瘤；淋巴細胞亞群；流式細胞術

中圖分類號：R733.3 文獻標識碼：A DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2018.01.057

文章編號：1006-1959（2018）01-0147-02

The Effect of Lymphocyte Subgroup Changes on Immune Function in Patients with Multiple Myeloma

JIA Hai-ying1，HUANG Rui1，WANG Ling-ling1，HUANG Guo-hong1，YANG Li-wei1，YU Liang2，WANG Chang-min1

（Clinical Laboratory 1， Pediatrics 2， People's Hospital of Xinjiang Uygur Autonomous Region，Urumqi830001，Xinjiang，China）

Abstract：Objective To analyze the multiple myeloma（MM）in peripheral blood of patients with T lymphocytes，B lymphocytes and natural killer （NK） cell changes.Methods Anticoagulated blood were collected from 69 MM patients and 52 cases of healthy people，with the total number of flow cytometry in peripheral blood lymphocytes（Lym），CD3+T lymphocytes，CD19+B lymphocytes and CD16+56+NK cells.Results Compared with the control group，MM group，Lym，CD3+，CD4+，CD8+，CD4+/CD8+，CD19+and other 6 projects，the differences were statistically significant（P<0.05），there was no significant difference between CD16+56+（P>0.05）.Conclusion The MM patients in disease progression and T lymphocyte subsets and B lymphocytes， closely related to Lym to evaluate the immune status of patients with MM，and has an important role in disease progression and therapeutic effect.

Key words：Multiple myeloma；Lymphocyte subgroup；Flow cytometry

多發性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）系腫瘤性漿細胞在骨髓中多灶性惡性增生所致的一種血液系統疾病，其特點主要為血清或尿中出現單克隆免疫球蛋白或其成分（M蛋白）、可累及全身的溶骨性損害、骨痛、貧血、高鈣血癥等，發病率位居血液系統惡性腫瘤的第二位[1]。目前MM發病原因及機制尚不清楚，有研究表明MM患者存在細胞免疫功能紊亂[2]。本文用流式細胞術檢測新疆地區69例MM患者及52例健康體檢人員的淋巴細胞總數（Lym）、T淋巴細胞（CD3+）、B淋巴細胞（CD19+）和NK細胞（CD16+56+）指標，探討其變化對MM患者機體免疫功能的影響，為進一步深入研究MM發病機制、判斷預后及評價療效提供有價值的參考指標。

1資料與方法

1.1一般資料 選取2016年1月～2017年7月在本院就診的MM患者69例，其中男39例，女30例，年齡44～85歲，平均年齡（61.75±9.60）歲。所有程序經醫院倫理委員會批準。健康對照組為在本院體檢中心進行健康體檢人員52例，其中男20例，女32例，年齡17～83歲，平均年齡（44.81±15.70）歲。MM診斷符合張之南主編的第3版《血液病診斷及療效標準》[3]，排除其他急慢性感染、腫瘤及自身免疫性疾病。

1.2主要儀器和試劑 BriCyte E6流式細胞儀（深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司生產）及配套熒光標記單克隆抗體試劑CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PerCP/CD4-APC、CD3-FITC/CD16+56-PE/CD45-PerCP/CD19-APC、流式細胞儀用溶血劑，質控微球為美國Spherotech公司生產的Sphero Supra Rainbow Fluorescent Particles。

1.3方法

1.3.1標本處理 抽取空腹外周靜脈血 2 ml，用 EDTA 抗凝。具體步驟：取試管2支，編號，加入全血 50 μl（反向加樣），分別加入不同的四標單克隆抗體 20 μl，充分混勻，室溫下避光孵育15 min；然后加入 1×免洗溶血素 450 μl，充分混勻，室溫下避光孵育15 min，待上機檢測。endprint

1.3.2檢測 開機后啟動MRFlow軟件，運行自動化設置和質控，質控在控后進入細胞獲取界面，獲取細胞得出結果。

1.4統計學方法 采取EXECL2003軟件進行數據收集。各組測量值以（x±s）表示，以SPSS13.0統計軟件進行統計分析，組間比較采用兩樣本均數比較的t檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

MM組與對照組比較，7個項目Lym、CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、CD19+、CD16+56+均低于對照組，其中Lym、CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、CD19+計6個項目差異有統計學意義（P<0.05），CD16+56+差異無統計學意義，見表1。

3討論

MM是一種起源于前B 細胞的骨髓漿細胞異常增生的惡性腫瘤。而淋巴細胞是構成機體免疫系統的主要細胞群體，占外周血白細胞總數的20%～45%。根據其細胞表面分化群（cluster of differentiation，CD）分子表達情況可將其分為CD3+ T淋巴細胞、CD19+ B淋巴細胞、CD16+56+ NK淋巴細胞等。其中CD3+ T淋巴細胞又可分為CD3+CD4+ T即CD4+輔助/誘導T細胞和CD3+CD8+ T即CD8+抑制/殺傷T細胞（簡稱Th細胞和Ts細胞）。這些淋巴細胞在免疫應答過程中相互協作、相互制約、共同完成對機體異物的識別、應答、和清除，從而維持機體內環境穩定[4]。

Shen等[5]研究發現，MM患者不但有體液免疫功能缺陷，其細胞免疫功能也有異常，尤其是T淋巴細胞的表型和功能異常。本研究發現，Lym、CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、CD19+ MM組均低于對照組，且差異有統計學意義（P<0.05），與黃亞麗等[6]的研究一致。CD16+56+ MM組雖然低于對照組，但差異無統計學意義（P>0.05）。可見本組患者T淋巴細胞和B淋巴細胞均有異常。CD4+ Th細胞表達受到抑制致使數量顯著減少，而CD8+ Ts細胞降低不明顯，導致CD4+/CD8+比值下降，機體細胞免疫功能受到影響，腫瘤得以逃避免疫監視，抗腫瘤能力降低。

B淋巴細胞是體內唯一能產生抗體（免疫球蛋白）的細胞，其主要作用是產生抗體，提呈抗原以及分泌細胞因子參與免疫調節，發揮體液免疫功能。本研究結果提示，MM患者B細胞比正常人顯著降低，可能的原因為MM常伴有異常單克隆免疫球蛋白（M蛋白）增多，反饋抑制正常多克隆B細胞分化發育，使MM患者外周血多克隆B細胞減少，導致體液免疫功能缺陷。NK細胞又稱自然殺傷細胞，無須預先致敏可直接殺傷靶細胞，具有抗感染、抗腫瘤、免疫調節等功能。本研究提示MM患者NK細胞比正常人略降低，且差異無統計學意義（P>0.05），可能與本組患者所處疾病時期有關，說明本組患者機體抗腫瘤能力已經被削弱，提示患者可能預后不良。

總之，運用流式細胞術檢測MM患者外周血淋巴細胞亞群變化可及時了解患者機體免疫狀態，通過監測T細胞來觀察細胞免疫功能、通過監測B細胞可觀察體液免疫功能，而NK細胞可反映機體抗腫瘤能力，從而及時掌握患者病情變化，為患者制定適合有效的診治方案及判斷預后提供可靠的依據。

參考文獻：

[1]郭秀臣，全麗娜，李紅，等.多發性骨髓瘤患者骨髓中Treg細胞與預后相關性研究[J].實用腫瘤學雜志，2014，28（1）：54-58.

[2]趙霞，許慶，丁慧芳，等.DC-CIK聯合化療對多發性骨髓瘤患者細胞免疫功能的影響[J].中國免疫學雜志，2015，31（4）：490-496.

[3]張之南，沈悌.血液病診斷及療效標準[M].第3版.北京：科學出版社，2007：232-233.

[4]龔非力.醫學免疫學[M].北京：人民衛生出版社，2008.

[5]Shen CJ，Yuan ZH，Liu YX，et al.Increased numbers of T helper 17 cells and the correlation with clinicopathological characteristics in multiple myeloma[J].J Int Med Res，2012，40（2）：556-564.

[6]黃亞麗，楊麗萍，廖建軍，等.T細胞亞群與NK細胞在難治性多發性骨髓瘤患者表達水平的研究[J].黑龍江醫藥，2015，28（3）：485-488.

收稿日期：2017-8-28；修回日期：2017-9-6

編輯/楊倩endprint