高效液相色譜法測定藥品含量時對照品的合理使用研究

孫娜

摘 要： 目的 探討使用HPLC法檢測藥品含量時，如何科學、合理的使用對照品。方法 使用《中國藥典2015年版》高效液相色譜法分析藥品含量的方法，采用2種對照品使用方法對6種藥品進行檢測。方法1使用3份對照品檢測3份藥品的含量；方法2使用1份對照品檢測3份藥品的含量，比較兩種方法對藥品檢測結果的影響。結果 方法1和方法2檢測藥品含量的RSD%均小于5%，符合HPLC法檢測的要求，但方法2可以節省2份對照品。結論 采用高效液相色譜法檢測藥品含量，采用方法2檢測結果可靠，節省對照品，可在藥品含量檢測中推廣使用。

關鍵詞： 高效液相色譜法；含量測定；對照品

高效液相色譜法（high performance liquid chromatography，HPLC）是使用高壓輸液泵將不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑或緩沖液作為流動相泵入裝有固定相的色譜柱，經過進樣閥注入待測樣品，由流動相帶入柱內，各成分被分離后，依此進入檢測器進行檢測，實現對樣品的分析。在醫學、化學、農業等多學科、多領域取得了廣泛的應用[1]。HPLC由于檢測快速、準確、靈敏度高，已被中國藥典收錄，成為藥品含量檢測的標準方法，但該方法檢測需要國家標準品作為參比對照，故經濟成本較高[2]。本著在不影響檢測結果的同時能最大限度的節約對照品的原則，本研究擬采用一支對照品檢測三份藥品與三支對照品檢測三份藥品的方法進行比較，對兩組檢測結果進行比較，探討本檢測方法是否試用藥品含量的檢測。

1 材料與方法

1.1 材料

（1）枸櫞酸西地那非片（批準文號：H20143255c，廣州白云山醫藥集團有限公司白云山制藥總廠），枸櫞酸西地那非對照品（CAS編號：171599-83-0，規格100mg/支，國家標準品網）。

（2）注射用環磷腺苷（批準文號：H20063307，遼寧格林生物藥業集團有限公司），環磷腺苷對照品（CAS編號：60-92-4，規格50mg/支，國家標準品網）。

（3）銀杏內酯注射液（批準文號：Z20110035，成都百裕科技制藥有限公司），銀杏內酯C對照品（CAS編號：15291-76-6，規格20mg/支，國家標準品網）

（4）鹽酸賴氨酸（批準文號：H22023689，吉林敖東洮南藥業股份有限公司），鹽酸賴氨酸對照品（CAS編號：10098-89-2，規格100mg/支，國家標準品網）

（5）阿昔洛韋片（批準文號：H53020156，云南昊邦制藥有限公司），阿昔洛韋對照品（CAS編號：59277-89-3，規格100mg/支，國家標準品網）

（6）鹽酸多巴酚丁胺（批準文號：H46020128，海南普利制藥股份有限公司），鹽酸多巴酚丁胺（CAS編號：49745-95-1，規格500mg/支）

1.2 方法

1.2.1 對照品使用規定

中國藥典（2015版）關于在高效液相色譜法中，對含量測定的要求為，精密稱（量）取對照品和供試品，配制成溶液，分別精密量取一定量，注入儀器，記錄色譜圖，測量對照品溶液和供試品溶液中待測成分的峰面積（或峰高）按下式計算含量，CX=CRAX/AR。

1.2.2 含量的測定方法

采用高效液相色譜法測量供試品含量，測量6種藥品。稱量使用梅特勒電子天平AL204（梅特勒公司），高效液相色譜儀1260（美國安捷倫公司），試劑為分析純和色譜純。

方法1采用1支對照品測量一份供試品，共計測量三次，使用三支對照品。

方法2采用1支對照品測量三份供試品，共計測量三次，使用一支對照品。

2 結果

采用外標法，兩種方法的檢測結果見表1。兩種方法檢測的RSD%均小于5%，符合檢測標準。

3 討論

中國藥典規定了在使用高效液相色譜法測定藥品含量時的方法和計算公式以及基本操作要求，但是沒有明確規定測量的次數是多少。國家權威機構和相關文獻的操作規定也沒有明確答案[3]。在方法1中是稱取了三份對照品和三份樣品進行檢測，優點是對對照品進行了平行檢測，但是分析的樣品只有三份，就不能更多的反應被分析樣品的狀況。方法2雖然只取了一份對照品，但相當多的藥檢所和藥廠使用的對照品都是中國食品藥品鑒定研究院權威產品，對照品在生產時肯定是精心操作的，出品時肯定是有質量保證的，其中各種參數肯定是真實可信的，所以才稱之為標準品（或對照品），供應全國有關部門對照使用。因此只要按照對照品使用說明書和相關儀器的操作規定認真操作，就可以防止系統誤差。

在本研究中兩種不同方法的檢測數據基本一致，其數據真實可靠，也證明了本文的一支對照品檢測三個樣品的方法是可行的，也是可信的，實驗結果支持本文結論。使用高效液相色譜法進行含量測定時，對照品的兩種不同用法的實驗數據基本一致，在同樣科學合理的原則下，一支對照品檢測三個樣品的方法反應了更多的供試品數據，而且經濟適用，在大多數情況下可以代替3支對照品檢測3這樣品的方法，本文最終目的是科學合理的特別是經濟的使用對照品，提高食品藥品的監管水平。

參考文獻

[1] Chem A. Practical HPLC Method Development[J]. Carbohydrate Polymers， 2012， 16（3）：338-338.

[2] Xie J P， Wang H D， Sun W J. Preparation of epimedoside A and epimedin C reference substance from Epimedium wushanense by HPLC[J]. Chinese Traditional & Herbal Drugs， 2012， 43（1）：94-96.

[3] Sun L， Jin H Y， Tian R T， et al. A simple method for HPLC retention time prediction： linear calibration using two reference substances[J]. Chinese Medicine， 2017， 12（1）：16-17.