外周血T淋巴細胞亞群變化特點及血清因子表達水平的研究*

吳翠萍，趙 利

(山東省濰坊市益都中心醫院 262500)

發熱伴血小板減少綜合征(SFTS)俗稱“蜱蟲病”，是由感染布尼亞病毒(SFTSV)引起的新發傳染病，屬自然疫源性疾病[1]。蜱為其主要傳播媒介，但也有相關報道證實了人際間的傳播，可能通過接觸SFTS患者的血液而感染，裸露皮膚直接接觸患者血液具有較高的危險性。SFTS患者的臨床特征以發熱、消化道癥狀、意識障礙、出血傾向、淺層淋巴結腫大伴外周血白細胞、血小板減少為主要特征，危重者可因休克、呼吸衰竭、彌散性血管內凝血及多器官衰竭而病死[2]。由于其傳播媒介的獨特，人群普遍易感，在丘陵、山林、森林等地區生活和生產的居民和勞動者，以及遠赴該地區從事戶外活動的人群具有較高的感染風險。流行病學資料顯示，目前SFTS患者97%為農民，中老年居多，男性多于女性，我國已在河南、江蘇、湖北、山東、安徽、遼寧等地區發現了SFTS，由于對其發病的機制尚不明確，有報道稱與機體免疫損傷、免疫功能紊亂有關。 SFTS病死率約為10%[3-4]。現探討SFTS患者外周血T淋巴細胞亞群變化特點及外周血清因子表達水平，為臨床治療及研究提供相關依據。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2013年5月1日至2016年12月1日該院確診并治療的SFTS患者138例，作為SFTS組，男84例，女54例，平均年齡(59.04±9.36)歲。另選取同期120例該院門診健康體檢者作為健康對照組，平均年齡(55.09±6.23)歲。

1.2納入標準 依據流行病學史、實驗室檢測、臨床表現進行確診[5]：流行季節在丘陵、山林、森林等地工作、生活或旅行；發現前2周內有被蜱蟲叮咬史或近2周內接觸SFTS患者；病例標本分離出SFTSV；SFTSV標本核酸檢測呈陽性；SFTSV免疫球蛋白M(IgM)抗體呈陽性；SFTSV IgM抗體陽轉或恢復期滴度較急性期4倍以上增高者。

1.3方法

1.3.1T淋巴細胞檢測 采集2組研究對象空腹外周靜脈血5 mL,離心后取血清，-70 ℃冰箱保存，利用流式細胞術檢測外周血T淋巴細胞CD4+T細胞和CD8+T細胞，具體步驟如下[6]。(1)單細胞懸液制備：將(1×105)～(1×107)細胞置入1.5 mL離心管中3 000 r/min離心5 min，棄上清液；加入FACS緩沖液100 μL懸浮細胞。 (2)封閉表面Fc受體：在步驟(1)中加入Fc受體抗體0.5 μL(0.5 mg/mL)，水浴3 min。 (3)細胞與熒光抗體結合：在步驟(2)中加入熒光抗體1 μL(0.5 mg/mL)，水浴30 min。(4)洗細胞去除游離的熒光抗體：在步驟(3)中加入FACS緩沖液350 μL，輕輕混勻，3 000 r/min離心5 min，棄上清液，重復步驟(4)2次。 (5)上樣前處理：取100 μL儀器緩沖液加入步驟(4)獲得的細胞沉淀中，輕輕混勻懸浮細胞，將細胞懸液移入FACS專用管中，準備進行儀器檢測和分析。

1.3.2外周血清因子表達水平檢測 同時抽取患者空腹靜脈血3 mL，運用酶聯免疫吸附方法檢測2組研究對象外周血清白細胞介素-2(IL-2)、腫瘤壞死因子-β(TNF-β)、干擾素-γ(IFN-γ) 的表達水平。首先將血液經至少0.5 h凝集，然后取血清。將酶復合物用稀釋液稀釋后，加血清及陰性、陽性對照，經1 h孵育，然后洗板，加底物，0.5 h避光反應后加終止液即完成反應部分，然后讀數并判斷結果的陰性或陽性[7]。

2 結 果

2.12組研究對象外周血T淋巴細胞亞群結果比較 SFTS組患者外周血CD4+T淋巴細胞數量明顯減少，為(22.69±5.02)%，健康對照組CD4+T淋巴細胞數量比SFTS患者多，為(56.11±4.14)%，差異有統計學意義(P<0.05)；SFTS組CD8+T淋巴細胞數量明顯增多，為(39.03±4.09)%，健康對照組CD8+T淋巴細胞數量比SFTS患者少，為(24.51±4.82)%,差異有統計學意義(P<0.05)。SFTS組CD4+T/CD8+T感染SFTSV后明顯降低。見表1和圖1。

表1 2組研究對象外周血T淋巴細胞亞群結果比較

圖1 2組研究對象T淋巴細胞亞群均數結果比較

組別IL-2TNF-βIFN-γSFTS組55.81±7.5272.91±6.0321.01±8.20健康對照組117.02±5.31112.84±4.91103.15±3.74t20.8114.8023.09P0.0020.0070.001

2.22組研究對象外周血清因子結果比較 SFTS組IL-2因子表達水平為(55.81±7.52)μg/L,健康對照組為(117.02±5.31)μg/L；SFTS組TNF-β因子表達水平為(72.91±6.03)μg/L，健康對照組為(112.84±4.91)μg/L；SFTS組IFN-γ因子表達水平為(21.01±8.20)μg/L，健康對照組為(103.15±3.74)μg/L；SFTS組患者感染SFTSV后IL-2、TNF-β、IFN-γ因子均明顯下降，2組差異均有統計學意義(P<0.05)。見表2和圖2。

圖2 2組研究對象外周血清因子表達水平均數結果比較

3 討 論

SFTS是近年來出現的一種傳染病，其發病機制缺乏系統研究，且該病臨床癥狀與某些病毒性疾病相似，易發生誤診，影響患者臨床治療[8-10]。自2010年在河南地區1例SFTS患者分離出SFTSV后，臨床診斷和實驗檢測才將SFTS和其他病毒性疾病進行區分。該病近年來發病率上升，目前尚無有效的疫苗和治療藥物，病死率高，已嚴重威脅生命健康，引起較多醫學專家的關注[11-13]。老年群體對疾病及病毒的抵抗力較弱，感染SFTSV后自身免疫系統是否因病毒受到限制，損傷何種抗病毒細胞，將為SFTS的臨床治療提供思路。

T淋巴細胞是機體免疫系統內功能最重要的一大細胞群，正常機體內各個T淋巴細胞亞群相互使用，維持機體正常的免疫功能[14]。本研究結果表明，SFTS組患者外周血CD4+T淋巴細胞數量明顯減少，約占健康者的50%，Th1為CD4+T細胞的一種重要細胞,主要分泌外周血清IL-2、TNF-β、IFN-γ因子，這些因子可促進機體免疫系統應答，病毒侵襲時第一時間進行防御和消滅。感染SFTSV后，CD4+T淋巴細胞數量減少，分泌外周血清IL-2、TNF-β、IFN-γ因子的能力減弱。本研究結果顯示，SFTS組患者外周血清IL-2、TNF-β、IFN-γ因子表達水平與健康對照組比較，明顯下降，差異有統計學意義(P<0.05);SFTS組T淋巴細胞亞群CD8+T淋巴細胞與健康對照組比較，顯著上升(P<0.05)，因為在病毒侵襲時，機體因病毒刺激產生干擾素，干擾素是先天免疫系統的一部分，在干擾素的作用下，CD8+T淋巴細胞活性增強，說明CD8+T淋巴細胞具有抗病毒作用[15]。但CD4+T淋巴下降和CD8+T淋巴升高造成比例失衡，抑制免疫系統的正常工作。本研究結果表明，SFTS組CD4+T淋巴和CD8+T淋巴的比例為0.62±0.21，而健康對照組為2.15±0.72，差異有統計學意義(P<0.05)，說明了感染SFTSV后T淋巴細胞亞群出現變化和比例失衡。

綜上所述，感染SFTSV后T淋巴細胞CD4+T明顯降低，CD8+T淋巴細胞明顯升高，2種T淋巴細胞比例失衡；外周血清IL-2、TNF-β、IFN-γ因子的表達水平降低。

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