增塑劑鄰苯二甲酸二異癸酯致小鼠肺組織氧化損傷作用

張也，李崇堯，劉蕾，楊湘梅，向先蘭，宋鵬，武陽，晏彪，馬萍

湖北科技學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院 環(huán)境-免疫與神經(jīng)系統(tǒng)疾病實(shí)驗(yàn)室，咸寧 437100

鄰苯二甲酸酯(phthalic acid esters, PAEs)，又稱為酚酞酯，是一大類脂溶性化合物，一般為無色透明的油狀粘稠液體，難溶于水，不易揮發(fā)，凝固點(diǎn)低，易溶于甲醇、乙醇、乙醚等有機(jī)溶劑，并且有毒性，其用途主要是增塑劑[1-2]。鄰苯二甲酸二異癸酯(diisodecyl phthalate, DIDP)與鄰苯二甲酸二乙基己酯(di-(2-ethylhexyl) phthalate, DEHP)、鄰苯二甲酸二丁酯(dibutyl phthalate, DBP)都屬于鄰苯二甲酸酯[2]，但因前者碳鏈較長(zhǎng)，相對(duì)分子質(zhì)量較大，沸點(diǎn)高，毒性較小，由其添加應(yīng)用的增塑劑，更適合于做增塑劑，常被通俗地稱為環(huán)保型增塑劑[3-4]。

流行病學(xué)研究指出，長(zhǎng)期接觸含DIDP的聚氯乙烯(polyvinyl chloride, PVC)玩具、吸食室內(nèi)灰塵和空氣的兒童，仍有較高的健康風(fēng)險(xiǎn)[5]，而且在人體尿液中已檢測(cè)出了DIDP的一些代謝物[6]。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究表明，DIDP雖然對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物具有低毒性，但仍可引起肝臟腫大，促進(jìn)過氧化物酶體的增生[7]。肺是人體的呼吸器官，也是人體重要的造血器官，一方面人體可經(jīng)肺吸入室內(nèi)灰塵和空氣而直接接觸DIDP，另一方面，通過接觸玩具而攝入的DIDP極有可能經(jīng)肝臟代謝后作用于肺臟[4]。目前，國(guó)內(nèi)有關(guān)DIDP對(duì)小鼠肺組織的影響研究并不多見。

已有研究報(bào)道，DIDP的同系物鄰苯二甲酸二異壬酯(diisononyl phthalate, DINP)可以造成小鼠肺細(xì)胞氧化損傷[8]，維生素E(vitamin E, VitE)在小鼠肺組織氧化損傷中具有拮抗作用[9]。因此本研究以無特定病原體(specefic pathogen free, SPF)級(jí)雄性BALB/c小鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，以不同劑量DIDP作為暴露物，VitE為拮抗劑，通過檢測(cè)肺組織勻漿測(cè)定活性氧(ROS)、還原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、8-羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)的含量，并同時(shí)觀察肺組織的病理變化與熒光染色結(jié)果，探討DIDP致小鼠肺組織氧化損傷及VitE的拮抗作用，以期為全面評(píng)估DIDP的毒性效應(yīng)及分子機(jī)制提供參考。

1 材料與方法(Materials and methods)

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 主要儀器與試劑

Power wave XS酶標(biāo)儀(美國(guó)Bio-Tek儀器有限公司)，F(xiàn)Lx 800熒光酶標(biāo)儀(美國(guó)Bio-Tek儀器有限公司)，Olympus BX-53熒光正置顯微鏡(日本Olympus公司)，5415R低溫冷凍離心機(jī)(德國(guó)Eppendorf公司)，RM2245切片機(jī)(德國(guó)LEICA公司)，HH-42三用電熱恒溫水箱(長(zhǎng)源實(shí)驗(yàn)儀器廠，北京)；DCFH-DA熒光染料(>99.9%，Sigma公司)，Hoechst 33258熒光染料(>99.9%，Sigma公司)，蛋白酶 K(Sigma公司)，小鼠GSH試劑盒、8-OHdG鳥苷ELISA檢測(cè)試劑盒(濟(jì)南朋遠(yuǎn)生物技術(shù)有限公司)，硫代巴比妥酸(TBA，分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)，鄰苯二甲酸二異癸酯(DIDP，≥99%，Sigma公司)。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

選用湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供的雄性BALB/c小鼠70只，飼養(yǎng)1周后實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)過程中，小鼠飼養(yǎng)于籠內(nèi)，保持溫度在20～25 ℃內(nèi)，籠內(nèi)相對(duì)濕度為50%～70%，以商業(yè)鼠糧飼養(yǎng)小鼠，及時(shí)補(bǔ)充飲用水，并避免其接觸其他干擾致病源，小鼠可自由進(jìn)食進(jìn)水。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法1.2.1 動(dòng)物分組和染毒

70只BALB/c小鼠隨機(jī)分為7組，包括1個(gè)陰性對(duì)照組、4個(gè)DIDP染毒組(0.15、1.5、15、150 mg·kg-1)、1個(gè)拮抗劑VitE組，1個(gè)150 mg·kg-1DIDP+100 mg·kg-1VitE處理組。每組10只。每組均經(jīng)口灌胃給予，灌胃量為10 mL·kg-1，每天一次，連續(xù)染毒14 d，分別于實(shí)驗(yàn)前稱小鼠體重并記錄。

1.2.2 肺組織切片的制備和觀察

染毒結(jié)束后用頸椎脫臼法處死小鼠，立即取肺組織，肺組織用4%的多聚甲醛固定，常規(guī)脫水，石蠟切片，蘇木精-伊紅染色法(hematoxylin-eosin staining, HE)染色，普通光學(xué)顯微鏡下觀察肺組織的病理組織學(xué)變化。

1.2.3 肺組織熒光染色

稱取Hoechst 33258試劑1 mg，用20 mL蒸餾水溶解后，過濾，4 ℃避光保存。使用時(shí)，用10倍的蒸餾水稀釋成染色液，工作濃度為5 mg·L-1。常規(guī)包埋切片后，脫蠟，透明；磷酸緩沖鹽溶液(phosphate buffer saline, PBS)或0.9%生理鹽水洗2遍，每次3 min，吸盡液體，手動(dòng)晃動(dòng)數(shù)次；加入0.5 mL Hoechst 33258染色液，染色5 min；用PBS或0.9%生理鹽水洗2遍，每次3 min；將切片置于載玻片上，滴一滴抗淬滅封片液，蓋上一潔凈的蓋玻片，盡量避免產(chǎn)生氣泡，然后用Olympus BX-53熒光顯微鏡觀察。

1.2.4 肺組織勻漿和懸液的制備

將肺組織在冰冷的PBS(pH7.5)中漂洗，濾紙拭干，給肺組織加PBS制成10%勻漿液，低溫離心后取上清，用于ROS、GSH、MDA和8-OHdG的檢測(cè)。

1.2.5 ROS含量的測(cè)定

取上清液4μL，加入396μL PBS作100倍稀釋。取100μL稀釋液于酶標(biāo)板中排列，并加入100μL熒光染料2,7-二氯熒光黃雙乙酸鹽(DCFH-DA)染色，避光反應(yīng)5 min，用熒光酶標(biāo)儀檢測(cè)。

1.2.6 蛋白質(zhì)含量和GSH含量的測(cè)定

蛋白質(zhì)含量按照Folin酚法測(cè)定，GSH含量的測(cè)定嚴(yán)格按照試劑盒操作說明進(jìn)行。GSH含量(μmol·g prot-1)=[(測(cè)定OD值-空白OD值)/(標(biāo)準(zhǔn)OD值-空白OD值)]×標(biāo)準(zhǔn)管濃度×樣本稀釋倍數(shù)÷待測(cè)勻漿蛋白濃度(g prot·L-1)。

1.2.7 MDA含量的測(cè)定

取500μL上清液于試管中，并加入2 mL 0.6% 2-硫代巴比妥酸(2-thiobarbituric acid, TBA)，沸水浴15 min。取上清1 mL于EP管中，10 000 r·min-1離心5 min。取上清100μL于酶標(biāo)板中排列，用全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀檢測(cè)，分別在450、532、600 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光值(以加PBS的為參照)，按照公式計(jì)算MDA濃度(μmol·L-1)=6.45(A532-A600)-0.56A450，式中A為吸光度。

1.2.8 8-OHdG含量的測(cè)定

8-OHdG含量的測(cè)定嚴(yán)格按照試劑盒操作說明進(jìn)行。以0、3、6、12、24、48 ng·mL-1等標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，450 nm處OD值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線來確定樣品中8-OHdG的含量。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用x±s表示，采用SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，多組間均數(shù)比較使用單因素方差分析(ANOVA)，然后使用LSD-t檢驗(yàn)比較2組間均數(shù)的差異性，P<0.05，表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果(Results)

2.1 小鼠肺組織形態(tài)的光鏡觀察結(jié)果

結(jié)果如圖1所示：空白對(duì)照組肺組織結(jié)構(gòu)正常，肺泡腔結(jié)構(gòu)完整，肺泡壁清晰可見,肺泡間隔未見明顯毛細(xì)血管擴(kuò)張；0.15 mg·kg-1DIDP組肺組織結(jié)構(gòu)輪廓清晰，肺泡腔基本完整，干凈透亮。肺泡壁稍增寬，肺泡間隔細(xì)胞輕度增生，肺間隔毛細(xì)血管可見不連續(xù)輕度擴(kuò)張；1.5 mg·kg-1DIDP組肺組織結(jié)構(gòu)輪廓可以區(qū)分，肺泡腔結(jié)構(gòu)基本存在，但受壓扭曲肺泡壁明顯增寬，肺泡間隔細(xì)胞大量增生，肺間隔毛細(xì)血管若隱若現(xiàn)不呈連續(xù)狀分布，提示有的血管受壓受損，有的血管尚可見；15 mg·kg-1DIDP組肺組織結(jié)構(gòu)改變，肺泡腔結(jié)構(gòu)基本存在，但明顯變小，腔大小不等，少量紅細(xì)胞漏出，肺泡壁明顯增寬增厚，肺泡隔細(xì)胞大量增生明顯，肺組織內(nèi)血管擴(kuò)張充血，肺泡壁未見毛細(xì)血管，見少量紅細(xì)胞，提示血管受壓破損；150 mg·kg-1DIDP組肺組織結(jié)構(gòu)難以辨認(rèn)，肺泡腔大小不一，腔內(nèi)可見散落不均的紅細(xì)胞，肺泡壁彌漫性增寬，肺泡隔細(xì)胞大量增生，肺組織內(nèi)血管擴(kuò)張充血，肺泡間隔未見毛細(xì)血管，但見紅細(xì)胞，提示明顯出血，血管損傷嚴(yán)重。與空白對(duì)照組相比較，100 mg·kg-1VitE組肺組織結(jié)構(gòu)和細(xì)胞形態(tài)正常，而100 mg·kg-1VitE+150 mg·kg-1DIDP組肺組織結(jié)構(gòu)輪廓基本可見，但不規(guī)則，肺泡腔大小不一，基本能分辨肺泡壁，但寬窄不均，細(xì)胞增生不均，部分肺泡壁增厚，部分?jǐn)嗔眩谓M織內(nèi)血管擴(kuò)張充血明顯，可見肺泡壁毛細(xì)血管擴(kuò)張。

2.2 小鼠肺組織的熒光染色觀察結(jié)果

由Hoechst熒光染料33258染色的細(xì)胞核呈藍(lán)色，細(xì)胞質(zhì)及其他組織呈綠色。如圖2所示，對(duì)照組中細(xì)胞核大多數(shù)呈圓形或橢圓形、淡藍(lán)色、視野內(nèi)細(xì)胞核分布密集，肺泡腔結(jié)構(gòu)基本完整；0.15 mg·kg-1DIDP組中，細(xì)胞核大多數(shù)呈橢圓形、淡藍(lán)色，且細(xì)胞核分布較為密集，但肺泡壁增寬；1.5 mg·kg-1DIDP組中，細(xì)胞核大多數(shù)呈橢圓形，開始縮小，呈藍(lán)色，有明顯的藍(lán)色顆粒，細(xì)胞核內(nèi)突顯凋亡小體，肺泡壁明顯增寬，受壓扭曲；15 mg·kg-1DIDP組中，細(xì)胞核大多數(shù)不規(guī)則，開始變形，呈亮藍(lán)色，細(xì)胞核內(nèi)凋亡小體明顯增多，肺組織結(jié)構(gòu)基本存在，明顯變小；150 mg·kg-1DIDP組中，細(xì)胞核稍顯畸形，不規(guī)則，出現(xiàn)細(xì)胞核邊集，呈亮藍(lán)色，且細(xì)胞核內(nèi)凋亡小體十分密集，肺組織結(jié)構(gòu)血管不規(guī)則，扭曲變形；150 mg·kg-1DIDP+VitE組與150 mg·kg-1DIDP組相比，細(xì)胞核大多數(shù)呈橢圓形，顏色改變?yōu)樗{(lán)色，細(xì)胞核內(nèi)凋亡小體減少，且肺泡壁相對(duì)變窄，說明VitE能起到一定的保護(hù)作用。

圖1 鄰苯二甲酸二異癸酯(DIDP)不同處理組小鼠肺組織H&E染色結(jié)果(10×40)Fig. 1 H&E staining of lung tissue in different treatment groups of diisodecyl phthalate (DIDP) (10×40)

圖2 DIDP不同處理組小鼠肺組織熒光染色結(jié)果(10×40)Fig. 2 Fluorescence staining of lung tissue in different treatment groups of DIDP (10×40)

2.3 小鼠肺組織ROS含量的變化

ROS含量是反映機(jī)體氧化應(yīng)激水平的指標(biāo),圖3可見不同處理組肺組織的ROS含量的變化，隨著染毒劑量的增多,ROS含量逐漸上升,呈一定的劑量-效應(yīng)關(guān)系。與對(duì)照組比較,較高劑量的DIDP能造成ROS含量的上升。與單獨(dú)150 mg·kg-1的DIDP組比較，150 mg·kg-1DIDP+100 mg·kg-1VitE組的ROS含量顯著下降。

2.4 小鼠肺組織GSH含量的變化

GSH是谷胱甘肽過氧化物酶(GPx)催化過氧化物還原的必需底物，可反映機(jī)體抗氧化應(yīng)激的水平，由圖4可以看出隨著DIDP染毒劑量的升高，GSH含量逐漸下降，呈一定的劑量-效應(yīng)關(guān)系。與對(duì)照組比較，0.15、1.5 mg·kg-1劑量組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，15、150 mg·kg-1劑量組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P< 0.01)。在較高劑量的DIDP作用下，小鼠肺的GSH含量下降明顯。與150 mg·kg-1DIDP組比較，150 mg·kg-1DIDP+100 mg·kg-1VitE組的GSH含量顯著上升。

圖3 不同處理組小鼠肺組織ROS含量注：圖中DIDP的濃度單位為mg·kg-1，下同；** P < 0.01，與對(duì)照組相比較；## P < 0.01，與150 mg·kg-1 DIDP+ 100 mg·kg-1 VitE組比較。Fig. 3 ROS content in mouse lung of different groupsNote: The concentration unit of DIDP in the figure is mg·kg-1. ** P < 0.01, compared with the control group; ## P < 0.01, compared with the 150 mg·kg-1 DIDP+100 mg·kg-1 VitE group.

圖4 不同處理組小鼠肺組織GSH含量注：** P < 0.01，與對(duì)照組相比較；## P < 0.01，與150 mg·kg-1 DIDP+ 100 mg·kg-1 VitE組比較。Fig. 4 GSH content in mouse lung of different groupsNote: ** P < 0.01, compared with the control group; ## P < 0.01, compared with the 150 mg·kg-1 DIDP+100 mg·kg-1 VitE group.

圖5 不同處理組小鼠肺組織MDA含量注：* P < 0.05，** P < 0.01，與對(duì)照組相比較；## P < 0.01， 與150 mg·kg-1 DIDP+100 mg·kg-1 VitE組比較。Fig. 5 MDA content in mouse lung of different groupsNote: * P < 0.05, ** P < 0.01, compared with the control group; ## P < 0.01, compared with the 150 mg·kg-1 DIDP+ 100 mg·kg-1 VitE group.

2.5 小鼠肺組織MDA含量的變化

脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的主要代謝產(chǎn)物是MDA，其反映的是脂質(zhì)的過氧化作用。由圖5可見,與對(duì)照組比較,不同劑量的DIDP均能使小鼠肺MDA含量有不同程度的升高。0.15、1.5 mg·kg-1劑量組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，15、150 mg·kg-1劑量組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P< 0.05，P< 0.01)，這表明小鼠肺組織已受到損傷。與單獨(dú)150 mg·kg-1的DIDP組比較，150 mg·kg-1DIDP+100 mg·kg-1VitE組的MDA含量顯著下降。

2.6 小鼠肺組織8-OHdG含量的變化

不同處理組肺組織的8-OHdG含量的變化見圖6。與對(duì)照組比較，不同劑量的DIDP能使小鼠肺8-OHdG含量有不同程度的升高。0.15、1.5 mg·kg-1劑量組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，15、150 mg·kg-1劑量組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P< 0.05，P< 0.01)，在較高劑量的DIDP作用下，小鼠肺組織的8-OHdG含量升高明顯。與單獨(dú)150 mg·kg-1的DIDP組比較，150 mg·kg-1DIDP+100 mg·kg-1VitE組的8-OHdG含量顯著下降。

圖6 不同處理組小鼠肺組織8-OHdG含量注：* P < 0.05，** P < 0.01，與對(duì)照組相比較；# P < 0.05， 與150 mg·kg-1 DIDP+100 mg·kg-1 VitE組比較。Fig. 6 8-OHdG content in mouse lung of different groupsNote: * P < 0.05, ** P < 0.01, compared with the control group; # P < 0.05, compared with the 150 mg·kg-1 DIDP+ 100 mg·kg-1 VitE group.

3 討論(Discussions)

DIDP可通過飲食攝入、呼吸道吸入和皮膚接觸等途徑進(jìn)入人體，其中飲食攝入是普通人群接觸DIDP的最主要途徑[4]。有研究指出，鄰苯二甲酸酯可經(jīng)消化道吸收進(jìn)入血液循環(huán)到達(dá)肺臟[8]。本研究中病理學(xué)觀察結(jié)果顯示，隨著DIDP染毒劑量的升高，小鼠肺組織出現(xiàn)不同程度的病理?yè)p傷，尤其150 mg·kg-1DIDP組肺組織結(jié)構(gòu)難以辨認(rèn)，肺泡腔大小不一，肺泡壁彌漫性增寬，肺泡間隔細(xì)胞大量增生，提示較高劑量DIDP可對(duì)肺實(shí)質(zhì)部的肺泡和肺泡囊造成損傷，而肺泡是氣體交換的主要功能單位，對(duì)肺泡細(xì)胞的損傷將直接影響肺功能。此外，通過Hoechst 33258熒光染色分析結(jié)果表明，當(dāng)DIDP的染毒濃度達(dá)到15 mg·kg-1以上時(shí)，細(xì)胞核開始變形，核由于濃集由淡藍(lán)色逐漸變?yōu)榱了{(lán)色，或核呈分葉、碎片狀，肺組織結(jié)構(gòu)發(fā)生改變。這提示較高劑量的DIDP可對(duì)肺組織結(jié)構(gòu)造成一定的損傷。

Ma等[10]的研究表明，氧化應(yīng)激可能是鄰苯二甲酸酯致相關(guān)疾病和毒理作用的重要機(jī)制之一，其原因在于：人和動(dòng)物機(jī)體內(nèi)由于細(xì)胞呼吸和能量代謝時(shí)刻發(fā)生著有氧氧化，在細(xì)胞中產(chǎn)生活性氧分子(ROS)。而肺是直接暴露于高氧環(huán)境中的唯一器官，肺泡部分的氧分壓要比心、肝、腦等其他臟器要高得多，更易導(dǎo)致氧化應(yīng)激。氧化應(yīng)激分子能夠?qū)ι锎蠓肿尤绲鞍踪|(zhì)、脂質(zhì)、核酸等造成損傷，引發(fā)肺組織細(xì)胞凋亡、肺部炎癥反應(yīng)，進(jìn)而表現(xiàn)出各種病理學(xué)改變。

ROS在線粒體氧化代謝過程中產(chǎn)生，是反映細(xì)胞內(nèi)氧自由基水平的主要指標(biāo)[11]。ROS在機(jī)體正常代謝狀態(tài)下含量很低，但當(dāng)細(xì)胞受到內(nèi)外環(huán)境的刺激后，ROS產(chǎn)生增多，過量的ROS會(huì)使細(xì)胞內(nèi)氧化與抗氧化不平衡，從而導(dǎo)致氧化應(yīng)激的發(fā)生[12]。谷胱苷肽(GSH)是維持細(xì)胞氧化還原狀態(tài)重要的巰基氧化還原反應(yīng)系統(tǒng)。還原型的GSH是ROS的主要清除劑，它的消耗能反映機(jī)體的受氧化損傷程度[13-14]，因此在評(píng)價(jià)氧化損傷中具有重要意義。本研究中，隨著DIDP染毒劑量的升高，ROS含量逐漸上升，GSH含量逐漸下降，且有濃度效應(yīng)關(guān)系，說明較高劑量DIDP暴露可使小鼠肺組織細(xì)胞產(chǎn)生過量的ROS，GSH消耗，導(dǎo)致細(xì)胞的抗氧化能力下降；同時(shí)，加入抗氧化劑VitE后，DIDP+VitE組ROS含量下降，GSH含量上升，提示VitE可降低DIDP暴露后產(chǎn)生的ROS。

脂質(zhì)發(fā)生過氧反應(yīng)是由過量的ROS造成的，其使細(xì)胞膜脆性增加、膜之間的成分發(fā)生交聯(lián)，導(dǎo)致離子轉(zhuǎn)運(yùn)、能量代謝等細(xì)胞穩(wěn)態(tài)功能紊亂。脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的主要代謝產(chǎn)物是MDA，MDA反映的是脂質(zhì)的過氧化作用，其水平的高低代表脂質(zhì)的過氧化強(qiáng)度[15]。在本研究中，15、150 mg·kg-1DIDP劑量組MDA含量與對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P< 0.05,P< 0.01)，這表明小鼠肺組織的脂膜已受到損傷。同時(shí)，加入抗氧化劑VitE后，DIDP+VitE組MDA含量下降，提示VitE可降低DIDP暴露后產(chǎn)生的MDA。

8-OHdG是活性氧自由基如羥自由基、單線態(tài)氧等攻擊DNA分子中的鳥嘌呤堿基第8位碳原子而產(chǎn)生的一種氧化性加合物，是內(nèi)源性及外源性因素對(duì)DNA氧化損傷作用的生物標(biāo)志物[16]。8-OHdG在體內(nèi)穩(wěn)定存在，為代謝終產(chǎn)物，且只能通過DNA氧化損傷途徑形成，是目前國(guó)際上公認(rèn)的一種新型評(píng)價(jià)DNA氧化損傷和氧化應(yīng)激的生物標(biāo)志物，測(cè)定機(jī)體8-OHdG含量對(duì)評(píng)估體內(nèi)氧化損傷和修復(fù)程度有重要意義[17]。本研究中，隨著DIDP染毒劑量的增加，小鼠肺組織中8-OHdG含量有不同程度的升高，與對(duì)照組比較15、150 mg·kg-1DIDP劑量組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P< 0.05，P< 0.01)，說明較高劑量的DIDP能在小鼠肺組織內(nèi)形成8-OHdG，造成肺組織的損傷。同時(shí)，加入抗氧化劑VitE后，DIDP+VitE組8-OHdG含量下降，提示VitE可降低DIDP暴露后產(chǎn)生的8-OHdG。

本研究中，DIDP作為外源物質(zhì)，可在肺臟內(nèi)參與氧化還原代謝途徑，產(chǎn)生大量ROS，一方面破壞肺臟的抗氧化保護(hù)機(jī)制，另一方面直接誘發(fā)肺細(xì)胞的脂質(zhì)過氧化作用，進(jìn)而損傷肺細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能[8,18]。維生素E(Vitamin E, VitE)，又稱生育酚(tocopherol, TH)，是一種脂溶性維生素，主要存在于細(xì)胞線粒體膜和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上，具有良好的抗衰老、抗過氧化及抗紫外線損傷作用，VitE結(jié)合在細(xì)胞膜上使細(xì)胞免受自由基進(jìn)攻和氧化損傷[19-21]。根據(jù)本實(shí)驗(yàn)結(jié)果，在DIDP的高劑量組中加入抗氧化劑VitE與高劑量DIDP單獨(dú)暴露組相比，小鼠肺組織所致的氧化損傷程度有所減輕，提示VitE可拮抗DIDP產(chǎn)生的氧化應(yīng)激從而對(duì)肺組織起著一定的保護(hù)作用。

綜上所述，在較高劑量的DIDP誘導(dǎo)下，小鼠肺組織產(chǎn)生過量的ROS，破壞自身的氧化與抗氧化平衡，使細(xì)胞的抗氧化能力下降，間接引起了小鼠肺組織的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)和8-OHdG的形成，造成肺組織的氧化損傷和病理?yè)p傷。抗氧化劑VitE可通過拮抗氧化應(yīng)激，從而降低DIDP所致小鼠肺組織的氧化損傷和病理?yè)p傷。