高效液相色譜法測定250g/L丙環(huán)唑乳油中有效成分丙環(huán)唑含量的不確定度評估

王廣友，林 波，吳 培，李 磊

(山東省農(nóng)藥科學(xué)研究院 山東省化學(xué)農(nóng)藥重點實驗室，山東 濟南 250033)

測量不確定度在化學(xué)分析領(lǐng)域中受到很大關(guān)注。測量不確定度是表征測量值的分散性，是一個與測量結(jié)果相聯(lián)系的參數(shù)。實驗室應(yīng)建立并實施測量不確定度的評價程序。本文以高效液相色譜法測定丙環(huán)唑含量為例，對測量過程中產(chǎn)生的不確定度分量進行分析和評估，從而評定其不確定度，如實反映測量的置信度和準(zhǔn)確度。

1 實驗方法

1.1 儀器及試劑

島津20A高效液相色譜儀，日本島津公司；150mm×4.6mm(i.d.)不銹鋼柱，內(nèi)裝ODS-C ,粒徑5μm填充物；電子分析天平(ME204/02型，METTLER TOLEDO)；密度測定儀(DM-100型，上海圖新電子科技有限公司)；超聲清洗儀(KQ-3200DB，昆山市超聲儀器有限公司)；乙腈(含量99.9%，色譜純,德國merck公司)；新制超純水(18.2MΩ·cm，Milli-Q)；丙環(huán)唑標(biāo)樣(純度98.7%，國家農(nóng)藥質(zhì)檢中心)；250g/L丙環(huán)唑乳油(某企業(yè))。

1.2 色譜條件

流動相為V(甲醇)∶V(水)=65∶35，流速1.0mL/min;柱溫40℃；檢測波長：230nm；進樣體積5μL。

1.3 實驗步驟

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液的配制

稱取丙環(huán)唑標(biāo)樣0.06g(精確至0.0002g)，置于50mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，過濾。

1.3.2 樣品溶液的配制

稱取含丙環(huán)唑0.06g(精確至0.0002g)的試樣，置于50mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，過濾。

1.3.3 測定

在上述操作條件下，待儀器穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，直至相鄰兩針丙環(huán)唑峰面積相對變化小于1.2%后，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進行測定。

1.3.4 計算

將測得的兩針試樣溶液以及試樣前后兩針標(biāo)樣溶液中丙環(huán)唑A與丙環(huán)唑B峰面積的和進行平均。試樣中丙環(huán)唑的質(zhì)量分?jǐn)?shù)ω(%)，按下式計算：

試樣中丙環(huán)唑的質(zhì)量濃度ρ2(g/L)，按下式計算：

式中：A1——標(biāo)樣溶液中，丙環(huán)唑A與丙環(huán)唑B峰面積和的平均值；

A2——試樣溶液中，丙環(huán)唑A與丙環(huán)唑B峰面積和的平均值；

m1——標(biāo)樣的質(zhì)量，單位為克，g；

m2——試樣的質(zhì)量，單位為克，g；

ρ——試樣溶液密度，(g/mL)；

ω——標(biāo)樣中丙環(huán)唑的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，以%表示。

2 檢測方法不確定度評定

2.1 不確定度的來源

以丙環(huán)唑質(zhì)量濃度計算公式為數(shù)學(xué)模型，可得出不確定度分量來源包括：標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)純度、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)稱樣量、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液的配制、樣品稱樣量、樣品溶液的配制、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)及樣品測定的重復(fù)性、密度測定及樣品測定的重復(fù)性。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)純度引入的不確定度

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書中提供的信息，丙環(huán)唑純度為98.7，不確定度為0.6%，k=2，屬于B類評定，按正態(tài)分布，取置信水準(zhǔn)P=95%，K=2,則標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度

Urel(1)=0.6/(2×98.7)=3.04×10-3。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)稱量引入的不確定度

查稱量所使用的電子天平檢定證書，其最大允許誤差為±0.1mg，屬于B類評定，按正態(tài)分布，取置信水準(zhǔn)P=99%，K=3，則標(biāo)準(zhǔn)不確定度為U1=0.1mg/3=0.0333mg，稱樣量為0∶0642g，則其相對不確定度為：

Urel(2)=0.0333/64.2=5.19×10-4。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液配制引入的不確定度

2.4.1 50mL容量瓶引起的體積不確定度

2.4.2 溶液溫度與校準(zhǔn)時溫度不同引起的體積不確定度

可得標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液配制引入的相對不確定度為：

2.5 樣品稱量引入的不確定度

參考2.3所述，樣品稱樣量為0.2534g，則其相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

Urel(4)=0.0333/253.4=1.31×10-4

2.6 樣品溶液配制引入的不確定度

同2.4所述，樣品溶液配制引入的相對不確定度為:

2.7 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)及樣品測量峰面積的重復(fù)性引入的不確定度

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液及樣品溶液重復(fù)進樣2次，峰面積見表1所示。

表1 峰面積測量結(jié)果

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)峰面積測量重復(fù)性引入的相對不確定度為：

樣品峰面積測量重復(fù)性引入的相對不確定度為：

2.8 密度ρ測量引入的不確定度

查測量密度所使用的密度計說明書，其最大允許誤差為±0.001g/cm3，屬于B類評定，按正態(tài)分布，取置信水準(zhǔn)P=95%，K=2，則標(biāo)準(zhǔn)不確定度為U4=0.001g/cm3/2=0.0.0005g/cm3,密度測量值為0.979g/cm3，則其相對不確定度為

Urel(8)=0.0005/0.979=5.11×10-4。

2.9 密度測量的重復(fù)性引入的不確定度

密度重復(fù)測量5次，測量值見表2。

表2 密度測量結(jié)果

密度測量重復(fù)性引入的相對不確定度為：

3 合成相對不確定度的評定

綜合上述各不確定度分量，得出合成相對不確定度：

=[(3.04×10-3)2+(5.19×10-4)2+(3.41×10-3)2+(1.31×10-4)2+(3.41×10-3)2+(1.62×10-5)2+(9.92×10-5)2+(5.11×10-4)2+02]1/2=0.0057

本次實驗測得250g/L丙環(huán)唑乳油中丙環(huán)唑質(zhì)量濃度為260g/L,則:

U(ρ)=260×0.0057=1.48g/L

4 擴展不確定度的評定

按95%置信概率，取包含因子K=2，則擴展不確定度:

U=K×U(ρ)=2×1.48≈3g/L

故本次采用高效液相色譜法測定250g/L丙環(huán)唑乳油中丙環(huán)唑質(zhì)量濃度為260±3g/L。

5 結(jié)論

在不確定度的評估過程中，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)含量、標(biāo)樣及樣品溶液配置引入的不確定度占主導(dǎo)地位，即標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)含量的準(zhǔn)確性、玻璃量器的校準(zhǔn)及實驗室操作人員的規(guī)范操作對實驗結(jié)果具有極其重要的影響。本實驗最終擴展不確定度的評定結(jié)果在符合上述方法和條件的規(guī)范測量情況下可直接引用。

[1] 全國法制計量管理計量技術(shù)委員會.JJF1059.1-2012規(guī)程測量不確定度評定與表示[M].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2012.

[2] 全國流量容量計量技術(shù)委員會.JJG196-2006 常用玻璃量器檢定規(guī)程[J].北京：中國計量出版社,2006.

[3] 王志波，康文斌，黃瓊輝.氣相色譜法測定40%毒死蜱乳油中有效成分含量的不確定度評估[J].農(nóng)藥科學(xué)與管理，2006,25(10)：1-5.

[4] 顧愛國，曹 磊，王 莉.高效液相色譜法測定20%氯啶菌酯懸浮劑中有效成分氯啶菌酯含量的不確定度評估[J].農(nóng)藥，2017(10)：742-743.