一貫煎對子癇前期大鼠胎盤NF-κB mRNA與MMP-9 mRNA表達影響*

黎 燕 ，曹保利 ，劉 筠

子癇前期是妊娠期有著特殊臨床特征的多系統疾病,在世界范圍內影響著2%～8%的妊娠,是孕產婦發病和死亡的主要原因[1－2]，尤其是在低收入和中等收入的國家[3－4]。其發病病機和病因尚未完全明確,胎盤淺著床理論被廣泛接受，基質金屬蛋白酶－9（MMP－9）作為基質金屬蛋白酶的重要成員，在滋養細胞的浸潤過程中發揮著核心作用，核轉錄因子（NF－κB）是多種重要前炎性因子的轉錄激活因子，通過對表達過程中最重要的環節即轉錄水平的調節來發揮其重要功能。一貫煎為中醫經典滋陰名方,臨床上對妊娠期高血壓疾病有治療作用，本研究通過一氧化氮合成酶抑制劑亞硝基左旋精氨酸甲酯（L－NAME）建立子癇前期大鼠模型，用熒光定量聚合酶鏈式反應（PCR）法檢測各組大鼠胎盤NF－κB mRNA和MMP－9 mRNA的表達，探究一貫煎對子癇前期大鼠胎盤NF－κB mRNA和MMP－9 mRNA表達的影響。

1 實驗方法

1.1 分組及建立模型 將符合要求的孕鼠納入實驗，妊娠第10天測量孕鼠血壓并測24 h尿蛋白。妊娠第12天將孕鼠隨機分為兩組：正常妊娠組10只，子癇前期模型組26只，子癇前期模型組于妊娠13 d至妊娠第19天皮下注射L－NAME 50 mg/（kg·d）建立大鼠子癇前期模型，正常妊娠組則注射等量生理鹽水。妊娠第15天再次測量各組孕鼠血壓及24 h尿蛋白，將子癇前期模型組符合診斷標準的23只孕鼠隨機抽取20只納入實驗，進行第2次分組，隨機分為模型對照組10只，一貫煎治療組10只，從妊娠16 d開始，C組加用一貫煎顆粒，B組加注同等劑量的生理鹽水，灌胃給藥，直至妊娠19 d。

1.2 標本采集及指標檢測 妊娠第10天、妊娠第15天、妊娠第19天測量各組孕鼠血壓并收集24 h尿，送本院實驗室測量24 h尿蛋白。

1.3 標本采集與處理 各組大鼠妊娠第20天收集24 h尿后，腹腔注射10%水合氯醛（3 mL/kg）麻醉，取出胎鼠和胎盤，選取胎盤組織生理鹽水漂洗后保存于－70℃備用。以RT－PCR法檢測各組孕鼠胎盤組織NF－κB mRNA及MMP－9 mRNA的表達。

1.4 統計學處理 采用SPSS 21.0統計軟件進行統計學分析，實驗數據用均數±標準差（x±s）表示，組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組大鼠胎盤中NF－κBmRNA表達比較 與正常妊娠組比較，模型對照組、一貫煎治療組NF-κB mRNA表達均明顯升高，差異有統計學意義（P<0.05），一貫煎治療組較模型對照組相比，NF-κB mRNA表達明顯降低，差異有統計學意義（P<0.05），見表1。

表1 各組大鼠胎盤中NF-κB mRNA表達的比較（x±s）Fig.1 Comparison of the expression of NF-κB mRNA in placenta of rats in each group（x±s）

2.2 各組大鼠胎盤中MMP-9 mRNA表達比較 與正常妊娠組比較，模型對照組、一貫煎治療組MMP-9 mRNA表達均明顯降低，差異有統計學意義（P<0.05），一貫煎治療組較模型對照組相比，MMP-9 mRNA表達明顯升高，差異有統計學意義（P<0.05），見表2。

表2 各組大鼠胎盤中MMP-9 mRNA表達的比較（x±s）Fig.2 Comparison of the expression of MMP-9 mRNA in placenta of rats in each group（x±s）

3 討論

目前妊娠期高血壓疾病的發病病機和病因尚未完全明確,子宮淺著床被眾多學者所認可，妊娠期高血壓疾病患者的滋養細胞侵襲能力減弱,造成妊娠期胎盤床的血管重鑄發生障礙,胎盤植入過淺，導致胎盤缺血缺氧，最終出現臨床癥狀。免疫失調或免疫不匹配可能與妊娠期高血壓疾病的發生有著重要聯系。滋養細胞的整個浸潤過程包括黏附、基質的溶解、和細胞的遷移，在此過程中的重要環節為溶解基質，它為滋養細胞的侵蝕掃除了物理屏障，但是滋養細胞本身不能吞噬和溶解基質，只能分泌作用于細胞外間質的酶：基質金屬蛋白酶、絲氨酸蛋白酶/半胱氨酸蛋白酶蛋白酶等，其中基質金屬蛋白酶（MMPs）是一組降解細胞外基質、結締組織蛋白的蛋白酶家族[5-6]，是降解蛻膜基質的重要酶類，幾乎能降解全部的基質成分，在胚胎的植入、胎盤的形成、和子宮螺旋動脈重鑄等過程中發揮著重要的作用。MMP-9屬膠原酶類[8]，目前被證明為最有效的蛋白水解酶，其分泌量直接關系到胎盤滋養細胞的侵襲力和血管的重鑄，純化的抗MMP-9抗體可以阻斷滋養層細胞對基質的浸潤，表明MMP-9在滋養層細胞植入中起重要作用[7]，MMP-9的表達不足,導致滋養細胞對子宮螺旋動脈的侵襲不足，胎盤淺植入，造成胎盤血血流灌注不足，胎盤缺血，進而損傷母體血管系統，最終引發臨床癥狀。

NF－κB蛋白家族，是最近幾年來最有研究潛力的調節免疫反應的轉錄因子。正常情況下，它以非活性形式存在于胞漿中，由P50/P65和IkB組成[8]。在胞外刺激下，NF-κB三聚體復合物中的IkB發生磷酸化而解離，而NF-κB二聚體由胞漿移位至胞核，并與NF-κB反應基因啟動子區域的kB位點相結合，從而啟動這些基因的轉錄，從而實現對細胞因子、黏附分子、趨化因子等的調控，相關研究提示，NF-κB存在于人類滋養細胞中[10]。有學者發現妊高征孕婦血漿中升高的過氧化物可以使培養的人臍靜脈內皮細胞中NF-κB活化提高，并顯著上調細胞表面細胞間粘附分子-1的表達，提示NF-κB有可能在妊娠期高血壓疾病中的發病機制中起重要作用[11]。妊娠期由于胎盤低氧，激活NF-κB，一方面使滋養細胞增殖與凋亡的失調，從而使滋養細胞的浸潤能力減弱；另一方面在滋養細胞的浸潤活性形成的過程中，血管內皮細胞激活與損傷，血管內皮細胞功能發生異常，釋放的毒性因子使血管變得狹窄，不利于胎盤血管重鑄。同時滋養細胞凋亡時產生的一些細胞因子，使人核因子κB抑制蛋白（IκB）發生磷酸化，導致機體內的細胞因子的表達，使血管壁平滑肌細胞增生，促使血管壁增厚，血管痙攣，降低胎盤的血流灌注量，使胎盤缺血、缺氧，最終導致全身血壓增高。

NF-κB與MMP-9共同參與了滋養細胞侵蝕和胎盤血管重鑄，在妊娠中的意義重大，它們表達的異常可導致子癇前期的發生。研究結果子癇前期大鼠的胎盤NF-κB mRNA表達較正常妊娠組明顯升高，MMP-9 mRNA則明顯降低，經一貫煎治療后，NF-κ BmRNA較子癇前期組明顯降低，MMP-9 mRNA明顯升高。結果表明一貫煎以下調NF-κB，上調MMP-9的表達來治療子癇前期，為臨床治療子癇前期提供了新的思路。

在中醫學中，子癇前期屬“子腫”“子暈”“子癇”范疇[12]，陰虛陽亢、上擾清竅是其主要病機，臨床上該病患者以肝腎陰虛者多見，多表現為肝陰不足的諸多癥狀，治療多以滋陰為主，方選一貫煎加減。一貫煎為中醫經典名方，由名醫魏之琇所創，此方由北沙參、麥門冬、生地、當歸、枸杞、川楝子組成，具有滋陰疏肝的功效，可用于治療肝陰虧虛所致的多種疾病。一貫煎組方嚴謹、配伍精當，方中重用生地滋陰壯水，配伍枸杞子補肝血、養肝體以和肝用；再入甘寒質潤之麥冬、沙參補養肝胃之陰,使肺胃津旺，金氣清肅下行,自能制木;更入少量川楝子,性寒不燥,既能疏泄肝氣,又能順肝木條達之性,且制諸藥滋膩礙胃之弊[13]。有研究報道一貫煎加減對高血壓及妊娠期高血壓疾病療效顯著[14-15]。

本研究結果顯示：子癇前期大鼠的胎盤NF－κB mRNA表達較正常妊娠組明顯升高，MMP－9 mRNA則明顯降低，經一貫煎治療后，NF－κB mRNA較子癇前期組明顯降低，MMP－9 mRNA明顯升高。這表明：一貫煎以下調NF－κB，上調MMP－9的表達來治療子癇前期，為臨床治療子癇前期提供了新的思路。

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