診斷對(duì)根除豬繁殖和呼吸綜合征病毒至關(guān)重要

豬繁殖和呼吸綜合征(PRRS)每年給全球養(yǎng)豬業(yè)帶來數(shù)億歐元的損失，賽默飛世爾科技公司（Thermo Fisher Scientific）的產(chǎn)品專家NardyRobben寫道。僅在德國(guó)，每年因豬繁殖和呼吸綜合征而造成的損失約為1.16億歐元。然而，對(duì)其積極主動(dòng)的監(jiān)測(cè)與診斷測(cè)試可以改善這一情況。

豬繁殖和呼吸綜合征是由PRRS病毒引起的一種免疫抑制性傳染病，各種年齡的豬均易感，且不同年齡的豬感染后癥狀差別較大。以妊娠母豬和1月齡以內(nèi)的仔豬最易感。患病豬和帶毒豬是本病的重要傳染源。豬繁殖與呼吸綜合征病毒的主要傳播途徑是接觸感染、空氣傳播和精液傳播，也可通過胎盤垂直傳播。易感豬可經(jīng)口、鼻腔、肌肉、腹腔、靜脈及了宮內(nèi)接種等多種途徑而感染病毒，豬感染病毒后2～14周均可通過接觸將病毒傳播給其他易感豬。從病豬的鼻腔、糞便拭子及尿中均可檢測(cè)到病毒。易感豬與帶毒豬直接接觸或與污染有豬繁殖與呼吸綜合征病毒的運(yùn)輸工具、器械接觸均可受到感染。感染豬的流動(dòng)也是本病的重要傳播方式。

持續(xù)性感染是豬繁殖與呼吸綜合征病毒流行病學(xué)的重要特征，豬繁殖與呼吸綜合征病毒可在感染豬體內(nèi)存在很長(zhǎng)時(shí)間。繁殖與呼吸綜合征病毒能夠破壞豬體的免疫防御系統(tǒng)引起免疫抑制，豬感染后抵抗力降低，而易繼發(fā)其他疾病，如附紅細(xì)胞體病，豬二型圓環(huán)病毒病等，因此給本病的診斷帶來了很大的困難，往往造成誤診，結(jié)果使疫情不斷擴(kuò)大，給養(yǎng)豬場(chǎng)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。

并且，由于癥狀通常以一般的臨床癥狀出現(xiàn)，在豬群中識(shí)別豬繁殖和呼吸綜合征病毒是很困難的。豬通常會(huì)出現(xiàn)呼吸困難，咳嗽，發(fā)燒，食欲減退，嗜睡等癥狀；有些母豬發(fā)生流產(chǎn)、產(chǎn)死胎和弱仔的情況；種公豬的發(fā)病率較低，主要表現(xiàn)為一般性的臨診癥狀，但公豬的精液品質(zhì)下降，精子出現(xiàn)畸形，精液可帶毒；仔豬臨床癥狀明顯，早產(chǎn)的仔豬當(dāng)天或幾天內(nèi)死亡。這時(shí)畜群的獸醫(yī)應(yīng)該使用診斷測(cè)試排除其他疾病或混合感染，然后再著手計(jì)劃解決豬繁殖和呼吸綜合征。

由于農(nóng)場(chǎng)豬繁殖和呼吸綜合征感染的復(fù)雜性、病毒的致病性和病毒的突變率，以及在使用疫苗時(shí)難以解釋的診斷結(jié)果，均需要加強(qiáng)獸醫(yī)的監(jiān)督，制定一項(xiàng)戰(zhàn)略計(jì)劃，例如對(duì)豬群積極主動(dòng)的監(jiān)測(cè)和診斷測(cè)試，可以大大改善豬繁殖和呼吸綜合征疾病的管理。

TOPIGS-SNW GmbH的生產(chǎn)經(jīng)理萊因哈德·龐坎普(Reinhard Bomkamp)說：“大多數(shù)獸醫(yī)一開始就會(huì)檢測(cè)出畜群感染是陽性還是陰性，然后他們就可以著手制定計(jì)劃以控制畜群中的豬繁殖和呼吸綜合征的感染。在德國(guó)西北部，我們的豬群密度很高，許多農(nóng)場(chǎng)對(duì)豬繁殖和呼吸綜合征呈陽性反應(yīng)。大多數(shù)人使用疫苗來并控制病毒傳播并減少豬繁殖和呼吸綜合征感染造成的經(jīng)濟(jì)影響。”

特別是在無豬繁殖和呼吸綜合征感染的豬群中，定期檢查病毒是否被引入或重新引入農(nóng)場(chǎng)是很重要的。龐坎普建議每月對(duì)繁殖動(dòng)物進(jìn)行檢測(cè)，并每?jī)蓚€(gè)月進(jìn)行一次聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）和酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）檢測(cè)，以確認(rèn)農(nóng)場(chǎng)中是否存在豬繁殖和呼吸綜合征病毒。使用分子和血清學(xué)測(cè)試提供了最完整的豬群狀況，因?yàn)檫@兩種方法是從不同方面檢測(cè)豬繁殖和呼吸綜合征病毒。

龐坎普說：“將豬繁殖和呼吸綜合征病毒趕出畜群需要加強(qiáng)生物安全措施和定期檢測(cè)，以實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)病毒情況。經(jīng)濟(jì)優(yōu)勢(shì)顯而易見：這樣一來仔豬就不需要接種疫苗，從而節(jié)省了每頭仔豬1.50歐元的成本。”

一、變異的豬繁殖和呼吸綜合征病毒

豬繁殖和呼吸綜合征通過引起非特異性疾病癥狀來逃避檢測(cè)。PRRS有兩種基因型：歐盟(EU)基因型和北美(NA)基因型。歐盟基因型豬繁殖和呼吸綜合征菌株的變化比北美基因型菌株更快，這使得處理它的工作相當(dāng)棘手。與此同時(shí)，歐盟型菌株更加多樣化，與北美型菌株相比，包含更多的亞型菌株。

“聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)最大的挑戰(zhàn)是由過時(shí)的引物(檢測(cè)的起始序列)導(dǎo)致的假陰性結(jié)果，這些引物不再與高度可變的病毒相匹配。”德國(guó)薩克森聯(lián)邦州的獸醫(yī)Hendrik Nienhoff博士指出。

賽默飛世爾科技公司（Thermo Fisher）將繼續(xù)跟蹤和監(jiān)測(cè)這兩種基因型在全球的發(fā)展情況。賽默飛世爾科技公司是一家全球公司，可以從世界各地獲取豬繁殖和呼吸綜合征病毒樣本，以跟蹤和監(jiān)測(cè)病毒的遺傳變化。該公司的PCR檢測(cè)了目前已知的北美和歐盟型基因型的所有菌株，歐洲的客戶要求持續(xù)進(jìn)行這一檢測(cè)，以監(jiān)測(cè)和跟蹤高致病性菌株的任何變化。

二、診斷選項(xiàng)

為了準(zhǔn)確診斷豬繁殖和呼吸綜合征，需要結(jié)合各種診斷方法。賽默飛世爾科技公司的酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ThermoFisher ELISA)是檢測(cè)歐盟基因型和北美基因型的豬繁殖和呼吸綜合征病毒的一種很好的篩選工具。由于抗體早在感染后7d就能被檢測(cè)出來，所以ELISA也被用于常規(guī)的畜群監(jiān)測(cè)。

監(jiān)測(cè)還應(yīng)包括同時(shí)進(jìn)行實(shí)時(shí)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測(cè)。通過這種方法，可以確定哪些豬實(shí)際攜帶PRRS病毒，在農(nóng)場(chǎng)中傳播。利用PCR檢測(cè)病毒可以提供感染或非感染的明確證據(jù)，這在將豬運(yùn)送或轉(zhuǎn)移到另一個(gè)農(nóng)場(chǎng)或谷倉(cāng)之前非常重要。即使動(dòng)物有豬繁殖和呼吸綜合征抗體，至關(guān)重要的是要確保抗體不會(huì)失效，因?yàn)樗鼈兛梢詡鞑ゲ《静⒏腥酒渌麆?dòng)物，并可能導(dǎo)致臨床感染。

PCR還可以區(qū)分EU和NA豬繁殖和呼吸綜合征基因型，在陽性結(jié)果的情況下，可以使用核酸進(jìn)行測(cè)序，從而提供該病毒的詳細(xì)信息。測(cè)序可以進(jìn)一步回答一個(gè)關(guān)鍵問題：“是由于正在進(jìn)行改良的活疫苗接種，還是因?yàn)榘l(fā)生了新的現(xiàn)場(chǎng)感染，所以檢測(cè)結(jié)果呈陽性？”該公司有一個(gè)工作流程，可以對(duì)完整或部分基因組進(jìn)行有針對(duì)性的測(cè)序。

三、抽樣選擇

診斷通常用于證實(shí)臨床病例，但如果農(nóng)場(chǎng)主和獸醫(yī)想要控制這種疾病并盡量減少經(jīng)濟(jì)損失，制定積極主動(dòng)的豬繁殖和呼吸綜合征監(jiān)測(cè)方案必不可少。采用血清學(xué)和分子診斷相結(jié)合的常規(guī)月度或季度檢測(cè)以及測(cè)序應(yīng)該是農(nóng)場(chǎng)主對(duì)豬群健康管理計(jì)劃的一部分。

Nienhoff警告說，不僅要在農(nóng)場(chǎng)出現(xiàn)問題時(shí)尋找豬繁殖和呼吸綜合征，而且還要尋找其他疾病情況，因?yàn)橄窳鞲羞@樣的疾病會(huì)引起類似的問題，并使情況復(fù)雜化。做好其他疫病的免疫接種，控制好其他疫病，特別是豬瘟、豬偽狂犬病和豬氣喘病的控制。在豬繁殖與呼吸綜合征病毒感染豬場(chǎng)，應(yīng)盡最大努力把豬瘟控制好，否則會(huì)造成豬群的高死亡率；同時(shí)應(yīng)竭力推行豬氣喘病疫苗的免疫接種，以減輕豬肺炎支原體對(duì)肺臟的侵害，從而提高豬群肺臟對(duì)呼吸道病原體感染的抵抗力。

口腔唾液取樣：豬喜歡嚼繩子，對(duì)他們來說壓力更小。

由于動(dòng)物福利條例的規(guī)定，通常不允許在沒有疑似疾病的情況下進(jìn)行血液取樣。因此，許多獸醫(yī)開始使用從豬只咀嚼過的繩子收集唾液，放置在一個(gè)離心管內(nèi)，再將離心管送往實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行PCR或ELISA測(cè)試，用于疾病的常規(guī)監(jiān)測(cè)。由于這種方法可以進(jìn)行更有規(guī)律的主動(dòng)取樣，在一些國(guó)家，口腔唾液取樣已經(jīng)成為標(biāo)準(zhǔn)方法。

盡管該程序的侵入性較低，但德國(guó)的獸醫(yī)擔(dān)心漏診和感染而遲遲不接受唾液取樣。然而，最近的一些出版物已經(jīng)明確驗(yàn)證了唾液取樣的結(jié)果可以在畜群中進(jìn)行首次篩查。

Nienhoff說：“用唾液取樣，我們可以從少量樣本中獲得更多的信息監(jiān)測(cè)豬群，其優(yōu)點(diǎn)還包括更容易抽取樣本及改善動(dòng)物福利。”例如，我可以用四根繩子對(duì)60只動(dòng)物取樣，而在血清檢測(cè)的情況下，我需要對(duì)60只動(dòng)物抽血檢驗(yàn)。唾液取樣對(duì)動(dòng)物和我來說，都非常方便。”

基因管拭子可以幫助運(yùn)輸穩(wěn)定，高質(zhì)量的樣品到實(shí)驗(yàn)室。

由于唾液樣品的性質(zhì)，我們面臨的挑戰(zhàn)是：它們必須在冷卻運(yùn)輸?shù)?4小時(shí)內(nèi)運(yùn)送到實(shí)驗(yàn)室，以防止核酸降解。考慮到這一不利因素，賽默飛世爾科技公司提供了geno tube，旨在快速干燥和穩(wěn)定流體樣品。獸醫(yī)可以用基因管擦拭口腔唾液樣本，這樣樣品就可以在室溫下送到實(shí)驗(yàn)室，且沒有時(shí)間限制。

四、優(yōu)化樣品制備

賽默飛世爾科技公司提供了一個(gè)優(yōu)化的樣品提取工作流程，以幫助客戶從樣本中獲得最佳的PCR結(jié)果。無論是用基因管、血樣還是組織樣本采集的口腔唾液樣本，其目的都是為了使結(jié)果準(zhǔn)確性更高。

*資料來源：科學(xué)海報(bào)“關(guān)于口服液體的新見解，作為在野外條件下檢測(cè)和確定豬繁殖和呼吸綜合征流行情況的診斷程序”(2015年)