何首烏炮制與質(zhì)量分析研究進(jìn)展

湯玉婷，張雪雪，唐 磊，何先元

（1.重慶醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院2014級(jí)本科生，重慶 401331；2.重慶醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院，重慶 401331）

何首烏［學(xué)名Fallopia multiflorum（Thunb.）Harald］，是蓼科蓼族何首烏屬多年生纏繞藤本植物，長(zhǎng)6～15cm、直徑4～12cm，表面呈紅棕色或紅褐色，塊根肥厚，長(zhǎng)橢圓形，黑褐色。何首烏生品可解毒、消癰、截瘧、潤(rùn)腸通便，制品能補(bǔ)肝腎、益精血、烏須發(fā)、強(qiáng)筋骨、化濁降脂。從古至今，何首烏炮制方法多樣，其復(fù)雜的化學(xué)成分也因炮制發(fā)生一系列的變化，有效的炮制對(duì)何首烏臨床用藥的安全至關(guān)重要。

1 何首烏的古法炮制方法

唐代以前，《靈烏丹》記載：“河水浸，七日換水，浸去皮尖，切片，干之。”唐代開始經(jīng)火炮制，黑豆開始被用作炮制輔料，為后世盛行的“九蒸九曝”制法提供了理論基礎(chǔ)與臨床經(jīng)驗(yàn)。宋代，最先由《太平圣惠方》提出“九蒸九曝”。《重修政和經(jīng)史證類備用本草》載有“春秋采臨用之，以苦竹刀切”。《圣濟(jì)總錄》有“火炮去皮”、“米泔水浸透去黑皮，麩炒干”及“酒炒”等炮制方法。此外，宋代有生姜汁、牛膝、甘草制等炮制方法。明代，《仁術(shù)便覽》引入酒浸的7次制法，以簡(jiǎn)化九蒸九曝制法；“何首烏酒浸軟，切大片，黑豆一層，何首烏一層，蒸曬各七遍，聽用”。《本草綱目》記載有“何首烏雌雄各半斤，分作四分，一分用當(dāng)歸汁浸，一分生地黃汁浸，一分旱蓮汁浸，一分人乳浸，三日取出，瓦焙”法。清代，炮制方法主要是九蒸九曝，如《嵩崖尊生全書》提出“大赤何首烏：內(nèi)有綿紋者連皮打碎，入乳浸蒸，日曬夜露九次”。此外，《成方切用》提出“小黑豆汁拌七次”及“牛乳拌蒸”。

2 何首烏的近現(xiàn)代炮制方法及新工藝

近現(xiàn)代的炮制方法主要有清蒸、加黑豆蒸制、酒制、甘草制等，出現(xiàn)了如高壓炮制、微波炮制、發(fā)酵炮制和膨化炮制等新工藝。同時(shí)對(duì)最佳炮制時(shí)間進(jìn)行了研究，周憶夢(mèng)等［1］發(fā)現(xiàn)何首烏最佳炮制時(shí)間為4h。羅旭蔚等［2］測(cè)定清蒸何首烏最佳條件為蒸制35h，100℃干燥，此時(shí)還原性糖和水溶性糖含量最高。李衛(wèi)先等［3］認(rèn)為采用高壓蒸7h炮制品較好。

2.1 何首烏炮制前后含量減少的成分

二苯乙烯苷。①二苯乙烯苷的含量測(cè)定方法。二苯乙烯苷于1975年首次由日本科學(xué)家k Hata發(fā)現(xiàn)并分離。有高效液相色譜法、薄層掃描法、分光光度法等方法用于測(cè)定其含量。如馮彥欽等［4］以甲醇為提取溶劑，將何首烏標(biāo)準(zhǔn)溶液用紫外分光光度計(jì)在200～500nm下進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，該法穩(wěn)定性和回收率均能達(dá)到較好效果，操作簡(jiǎn)潔、快速、成本低。②二苯乙烯苷的含量變化。《中國(guó)藥典》2010年版有規(guī)定生首烏其含量不得少于1.0%，而制何首烏中不得少于0.7%［5］。研究表明炮制后二苯乙烯苷含量呈下降趨勢(shì)，如楊文宇等［6］探索何首烏九蒸九曬后二苯乙烯苷炮制前后含量從3.56%下降至1.42%。

蒽醌類。①蒽醌類的含量測(cè)定方法。何首烏中蒽醌類包括大黃素、大黃素甲醚、大黃酸、大黃酚等，分為結(jié)合型蒽醌和游離型蒽醌，常采用高效液相色譜法、紫外分光光度法、比色法等法進(jìn)行含量測(cè)定。如賴秀娣等［7］采用高效液相色譜法，利用近紅外光譜儀采集制何首烏樣品的近紅外光譜，分辨率為8cm-1，掃描64次，掃描范圍為12000～4000cm-1，溫度21.5～22.5℃，相對(duì)濕度25%～35%，可實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確、快速地測(cè)定制何首烏中游離蒽醌的含量。②蒽醌類的含量變化。生何首烏以大黃素和大黃素甲醚的總量計(jì)含結(jié)合蒽醌量為不少于0.05%，而制何首烏以大黃素和大黃素甲醚的總量計(jì)含游離蒽醌量是不小于0.10%［5］。周憶夢(mèng)等［1］研究結(jié)果顯示在炮制的6h內(nèi)，蒽醌類含量均呈先增加后減少的趨勢(shì)，且比生品的含量較低。

多糖類。有硫酸-苯酚法和硫酸蒽酮法用于該成分含量測(cè)定。劉振麗［8］證明D-葡萄糖含量逐漸增加，而D-果糖和蔗糖的含量逐漸降低，兩者總量逐漸降低，前16h變化幅度最大。

鞣質(zhì)類。鞣質(zhì)類是一類結(jié)構(gòu)復(fù)雜的酚類化合物，可收斂、止血、抗菌，有皮粉吸附法、重量法、高錳酸鉀法、絡(luò)合滴定法與比色法等含量測(cè)定方法。李林福等［9］研究發(fā)現(xiàn)隨著炮制時(shí)間延長(zhǎng)，何首烏中鞣質(zhì)含量逐漸降低。

2.2 何首烏炮制前后含量增加的成分

卵磷脂。檢測(cè)卵磷脂有高效液相色譜法、分光光度法、薄層層析法等方法，如周慶華等［10］采用鉬藍(lán)-分光光度法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)測(cè)定，證明該法簡(jiǎn)便、靈敏、專屬性強(qiáng)。研究表明，何首烏炮制后卵磷脂含量呈增加趨勢(shì)。閔建華等［11］進(jìn)行研究顯示生品的卵磷脂含量低于各種何首烏的炮制品含量。

沒食子酸。目前，對(duì)于何首烏中沒食子酸含量測(cè)定采用毛細(xì)管電泳高頻電導(dǎo)法或HPLC法。沒食子酸是一種天然的多酚類化合物，有抗氧化、抑菌等生理活性［12］。在炮制后沒食子酸含量增大，并于炮制24h后其含量趨于穩(wěn)定［13］。

微量元素。微量元素即鐵、銅、鋅等通常低于人體體重0.01%的礦物質(zhì)，雖然含量低，但有養(yǎng)血補(bǔ)肝、益腎、強(qiáng)筋壯骨、烏須黑發(fā)，與人的生存和健康息息相關(guān)。金鵬飛等［14］研究微量元素的溶出率在炮制后總體上升，提示炮制可改變何首烏中微量元素的總量和溶出特性。

2.3 何首烏炮制前后新增加的成分

何首烏炮制后新產(chǎn)生的成分有5-羥甲基糠醛和5-羥甲基麥芽酚。5-羥甲基糠醛可抗心肌缺血、抗氧化、改善血流動(dòng)力學(xué)、降血糖［15］，但有致敏性。5-羥甲基麥芽酚是一種強(qiáng)氧化劑，有研究表明其生成活性氧自由基，導(dǎo)致DNA鏈斷裂和突變。關(guān)于含量變化，劉振麗等［16］運(yùn)用HPLC法測(cè)定結(jié)果表明隨著炮制時(shí)間的延長(zhǎng)5-羥甲基糠醛的含量隨炮制時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸升高，而5-羥甲基麥芽酚的含量逐漸升高后至炮制24h達(dá)到最高，隨后開始逐漸降低。

2.4 何首烏炮制后的毒性

可能毒性成分。蒽醌類成分是目前大多認(rèn)為引起肝損傷的主要毒性成分。如馬喆等［17］建立高通量的高內(nèi)涵分析技術(shù)，探討結(jié)果為何首烏致肝毒性的主要成分是蒽醌類成分和沒食子酸；而郜丹等［18］采用UPLC-Q/TOF-MS技術(shù)，篩選結(jié)果提示大黃素甲醚與順式二苯乙烯苷可能是何首烏的主要毒性成分。

毒性損害及其影響因素。使用何首烏產(chǎn)生毒性損害的主要原因是長(zhǎng)期過量服用生、制何首烏以及炮制工藝的不規(guī)范［19］。對(duì)此，崔鶴蓉等［20］對(duì)比了歷代醫(yī)籍與現(xiàn)代炮制規(guī)范探討了何首烏的毒性影響因素；黃偉等［21］進(jìn)行了急性毒性試驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，何首烏藥材全組分、水提及60%醇提組分對(duì)正常小鼠急性毒性的強(qiáng)度依次為全組分＞醇提組分＞水提組分，提示何首烏大劑量給藥易產(chǎn)生毒性反應(yīng)，臨床應(yīng)用應(yīng)掌握劑量。如今有更多實(shí)驗(yàn)在驗(yàn)證何種炮制方法更能減輕毒性，馬致潔等［22］等以同一批生何首烏為原料，分別采用高壓清蒸、高壓黑豆汁蒸、常壓清蒸法炮制何首烏，結(jié)果顯示高壓清蒸3h減毒效果較佳，二苯乙烯苷含量與毒性變化趨勢(shì)基本一致。

3 小 結(jié)

何首烏炮制工藝多樣，各種炮制品中主要有效成分含量變化參差不齊，現(xiàn)階段的研究并沒有明確指出這些指標(biāo)成分變化與藥效之間的直接相關(guān)性，還缺乏對(duì)何首烏系統(tǒng)的毒理學(xué)研究。因此，未來應(yīng)對(duì)何首烏炮制前后化學(xué)成分進(jìn)行更加深入的研究，結(jié)合藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)，綜合考慮不同品種、不同炮制方法、不同炮制時(shí)間等因素，建立指標(biāo)成分明確、含量測(cè)定方法專屬的質(zhì)量控制體系，保證何首烏炮制的科學(xué)性和臨床用藥的安全性。