山西管涔山林區傳統食用菌紅水皮的DNA分子鑒定

劉 虹 ，董淑英 ，許 晶 ，李素玲

（1.山西省農業科學院食用菌研究所，山西太原 030031；2.忻州市科技局，山西忻州 034000）

紅水皮是山西管涔山林區出產的一種肉紅色、個體比較小的特產蘑菇。管涔山當地人通常把菇體肥大、香味濃郁的森林里的野生食用蘑菇叫銀盤，而將菌肉較薄的種類叫水皮。紅水皮是當地最為常見的水皮蘑菇，每年夏、秋兩季在華北云杉Picea wilsonii Mast和華北落葉松（紅杄）Larix principis-rupprechtii Mayr林內草地上生長，散生或者群生，有時形成蘑菇圈。當地人通常將其用開水煮熟調涼菜或者做湯，味道雖然不濃，但是也別有滋味。查閱此前的山西野生食用菌類相關專業文獻[1-10]，山西管涔山紅水皮蘑菇并沒有發現對應的拉丁學名。

山西省農業科學院食用菌研究所育種室課題組首次采用nr DNA-ITS分子方法，對2017年采自山西管涔山林區的紅水皮蘑菇進行了鑒定分析，并結合子實體形態特征，確認其科學名稱為深凹漏斗傘 Infundibulicybe gibba（Pers.）Kumm.。

1 材料和方法

1.1 標本采集

擔子果樣本于2017年7—9月采自山西省中北部寧武縣管涔山一帶的華北落葉松Larix principis-rupprechtii Mayr和華北云杉Picea wilsonii Mast林中草地上，共3份，分別編號為FANM99，LH170750，LH170925。新鮮的擔子果標本經45℃烘干后保存于山西省農業科學院食用菌研究所和首都師范大學標本館（BJTC）。

1.2 形態學方法

將擔子果的宏觀特征放在手持放大鏡和體視顯微鏡下進行觀察和描述，主要包括擔子果的形狀、大小、顏色、菌褶及菌柄特征等。

將擔子果的顯微結構特征在北京首都師范大學生命科學學院微生物實驗室光學顯微鏡下進行觀察。首先采用手術刀進行徒手切片，以蒸餾水、3%KOH作為浮載劑制作水封片。用棉蘭（cotton blue）和梅氏試劑（Melzer）來檢驗擔孢子壁有無喜蘭和淀粉質反應。

1.3 分子方法

本研究在北京首都師范大學生命科學學院微生物實驗室進行，研究樣本的DNA提取、PCR以及測序方法等完全采用了FAN等[11-12]研究塊菌屬物種所使用的方法。本研究比對的DNA序列下載自NCBI數據庫，提取和測序的nr DNA-ITS序列采用BLAST軟件在NCBI上進行比對，比對結果中相似性高于97%的序列用于本研究分析。

2 結果與分析

2.1 nr DNA-ITS比對結果

3份樣本之間nr DNA-ITS片段相似性高于99%，證實為同一物種。其中，樣本FANM99在NCBI數據庫比對，結果顯示，本樣本與NCBI數據庫中8條Infundibulicybe gibba名下序列相似值高于97%（表1），結果證實這些序列與山西省管涔山林區出產的紅水皮蘑菇為同一個物種。

表1 紅水皮樣本FANM99的ITS片段的BLAST結果

2.2 形態學結果

對采自山西管涔山林區樣本進行觀察，紅水皮蘑菇形態學特征如圖1所示。

擔子果小到中型，菌蓋初期扁半球形，光滑，無毛，后漸平展、稍下凹到最后強力下凹呈漏斗狀，邊緣整齊，無條紋，中部有時有一小凸起，淺黃褐色、黃褐色、肉褐色或有點淺紅褐色，直徑1.5～6 cm；菌肉白色，較薄；菌褶白色，不等長，較密，延生；菌柄較細，圓柱狀或向下漸漸變細，2～8 cm長，0.5～0.9 cm粗，白色或淺肉褐色，表面近平滑，初期中實，后近中空；擔孢子橢圓形或杏仁狀，有一小尖，（6～9）μm×（4～5）μm，無色，表面光滑，非淀粉質。

3 結論

從產于山西管涔山林區的紅水皮蘑菇提取的ITS-DNA片段在NCBI上用BLAST比對，結果顯示，與樣本相似度高于97%（同時滿足QC大于88%）的8條來自北美洲美國、墨西哥，歐洲的意大利，亞洲的朝鮮、日本以及中國的序列名稱均為深凹漏斗傘Infundibulicybe gibba；從宏觀形態的擔子果和微觀特征的擔孢子分析，紅水皮蘑菇也完全符合深凹漏斗傘。因此，綜合DNA分子和形態學特征分析，確認山西管涔山的紅水皮蘑菇的科學名稱為深凹漏斗傘 Infundibulicybe gibba（Pers.）Kumm.，主要異名為 Clitocybe gibba（Pers.）Kummer，在我國文獻中也叫深凹杯傘[2]或杯傘[3]，是一種可以食用的野生蘑菇。四川九寨溝地區新近發現的紅漏斗傘Infundibulicybe rufa[13]與本種相似，區別在于紅漏斗傘菌蓋和菌柄顏色為紅褐色，而深凹漏斗傘顏色為肉褐色或黃褐色。深凹漏斗傘在我國北部各地和南部高海拔地區均有分布[2-3，7-10，14-17]，是一個北溫帶物種[18-20]。深凹漏斗傘在管涔山林區有一個類似的種類，即當地著名的野生食用菌品種紅銀盤，這2個物種形狀和顏色很像，區別在于紅銀盤個體明顯較大，柄粗壯，肉厚，就像大一號的紅水皮。此外，紅水皮產季較長，每年從初夏到深秋在山西管涔山都極為常見，而紅銀盤通常只在秋季發生。

［1］劉波.山西大型食用真菌[M].太原：山西高校聯合出版社，1991.

［2］卯曉嵐.中國大型真菌[M].鄭州：河南科學技術出版社，2000：154.

［3］李玉.中國大型菌物資源圖鑒 [M].鄭州：中原農民出版社，2015：759.

［4］杜復.山西野生食用菌與毒菌調查報告（上）[J].山西大學學報（自然科學版），1979（3/4）：40-54.

［5］杜復.山西野生食用菌與毒菌調查報告（下）[J].山西大學學報（自然科學版），1980（3）：71-78.

［6］劉波.山西的野生食用菌[J].中國食用菌，1985（1）：21-24.

［7］戴芳瀾.中國真菌總匯[M].北京：科學出版社，1979.

［8］鄧叔群.中國的真菌[M].北京：科學出版社，1963.

［9］應建浙.食用蘑菇[M].北京：科學出版社，1982.

［10］張光亞.云南食用菌[M].昆明：云南人民出版社，1984.

［11］FAN L，HAN L，ZHANG P R，et al.Molecular analysis of Chinese truffles resemblingTuber californicum in morphologyreveals a rich pattern of species diversity with emphasis on four new species[J].Mycologia，2016，108（2）：344-353.

［12］ HUANG K B，CHEN M，FAN L.Tuber griseolivaceum sp.nov.，a new olive-gray truffle species from China based on morphological and DNAdata[J].Phytotaxa，2017，309（2）：166-172.

［13］ZHAO Q，HAO Y J，LIU J K，et al.Infundibulicybe rufa sp.nov.（Tricholomataceae），a reddish brown species from southwestern China[J].Phytotaxa，2016，266（2）：134-140.

［14］李建宗.湖南大型真菌志 [M].長沙：湖南師范大學出版社，1993：275.

［15］應建浙.西南地區大型經濟真菌[M].北京：科學出版社，1994：195.

［16］戴賢才.四川省甘孜州菌類志 [M].成都：四川科學技術出版社，1994：161.

［17］榮福雄.山西五臺山地區大型真菌調查報告（一）[J].山西大學學報（自然科學版），1984（1）：81-89.

［18］VIZZINI A，CONTU M，MUSUMECI E，et al.A new taxon in the Infundibulicybe gibba complex（Basidiomycota，Agaricales，Tricholomataceae）from Sardinia （Italy）[J].Mycologia，2011，103：203-208.

［19］LINCOFF G H.The audubon societyfield guide toNorth American mushrooms[M].NewYork：Alfred A.Knopf，1981.

［20］ WEBER N S，SMITH A H.A fild guide to southern mushrooms[M].Ann Arbor：The UniversityofMichigan Press，1985.