放置時間對免疫熒光干式定量法測定超敏CRP的影響

黎宇 龍庭燕 楊況甜

（廣西柳州市工人醫院檢驗科 廣西 柳州 545005）

C反應蛋白（CRP）是機體受到病菌入侵或組織損傷等炎癥性刺激時肝細胞合成的急性時相反應蛋白。因此，CRP的檢測可用于臨床對機體感染、組織傷害和炎性疾病的評價，也可為各種疾病的診斷、治療和監控提供依據[1]。在日常的工作中會發現有部分標本的測定結果與實際情況不符，究其原因發現這些標本是由于工作量的原因未能將檢測反應板按規定的時間及時放入儀器檢測，而放置時間是否會對測定結果造成影響，就這一問題來做次實驗，觀察放置時間對免疫熒光法測定CRP的影響狀況。

1.材料與方法

1.1 標本

選取2017年7月至2017年8月間來我院住院經診斷為各類感染性疾病的患者200例作為研究對象，包括自身免疫性疾病，心力衰竭，肺炎，支氣管炎，急性胰腺炎，尿路感染，手術，創傷患者，冠心病等疾病，要求標本無溶血，脂血，黃疸等現象。

1.2 儀器與試劑

韓國Boditech MED Inc公司生產的i-CHROMA Reader免疫熒光分析儀，韓國Bodi Tech Med Incorporated C反應蛋白檢測試劑盒。

1.3 方法

每天收集符合要求的患者血標本，并按照實驗要求進行測定并記錄好數據，每天每個標本均重復測定4次，將加好檢測混合樣本的反應板按照標準操作要求室溫放置3分鐘測定為對照組，記錄數據；再將檢測好的反應板繼續室溫放置至5分鐘測定為試驗1組，記錄數據；室溫放置至10分鐘測定為試驗2組，記錄數據；室溫放置至30分鐘測定為試驗3組，記錄數據。用i-CHROMA Reader免疫熒光分析儀檢測CRP的濃度，計算并比較實驗各組與對照組的差異。以上所有操作均嚴格按照廠家提供的試劑盒說明書進行操做。

1.4 統計學方法

使用SPSS11.0進行處理，C反應蛋白含量以均數±標準差表示，組間采用t檢驗，以P＜0.05為差異顯著。

2.結果

同一測試板在不同的4個時間點測定結果之間的比較，如表1所示。試驗1、2組的CRP檢測結果分別與對照組比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）；試驗3組的CRP與對照組比較，差異顯著（P＜0.05）。

表 1 樣本在4個時間點的CRP（mg/L）

3.討論

臨床檢測超敏CRP常用的方法有免疫散射比濁法，免疫透射比濁法，干式定量免疫熒光法等[2-3]。免疫散射比濁法與免疫透射比濁法均具有較好的準確性和重復性，比較適合用于大型全自動生化分析儀進行批量檢測，但這兩種方法也存在檢測所需的血量要足夠才能確保其準確性，檢測需要一定的反應時間，只能局限在實驗室內操作，不能隨時隨地檢測診斷的急救需求。而免疫熒光法因具有用血量少，反應時間快速，操作簡便，儀器小巧，可移動攜帶的特點使其運用于急診的急救需求。尤其是將干式定量免疫熒光法檢測超敏CRP應用在某些危急重病患者的救助上，縮短了檢驗結果的等待時間[4]。

然而對于需要做大量急救標本的實驗室而言，標本排序的囤積，導致部分標本因等候而未能及時檢測，使得結果的準確性不得而知。放置時間是否會影響免疫熒光法檢測超敏CRP的結果？通過實驗數據可以看出，試驗1、2組的CRP檢測結果分別與對照組比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）；試驗3組的CRP與對照組比較，差異顯著（P＜0.05）。C反應蛋白的測定值隨著放置時間的延長而呈現下降的局勢。分析其原因可以先從原理上分析，免疫熒光法測定超敏CRP的原理是將檢測緩沖液與血液樣本在檢測瓶中混合，緩沖液中的CRP抗體和血液樣本中的CRP抗原形成抗原抗體復合物，當混合樣本加到反應板上經滲透作用擴散至硝化纖維基質的測試帶上，測試帶上的抗CRP抗體會捕獲該復合物。因此，血液樣本中含有的CRP越多，測試帶上的復合物積聚得越多，信號就越大。熒光抗體的信號強度反應了CRP被捕獲的數量，經過i-CHROMA Reader免疫熒光分析儀色處理，就能夠反應出血液樣本中的CRP濃度。而在整個反應體系過程中，熒光強度會因外界物質的干擾，而導致熒光強度的不斷減弱；此外，熒光能量的不斷釋放會隨著放置時間的延長而逐漸減弱甚至消失，最終導致儀器接收到的熒光信號減弱，呈現出血液樣本中的CRP結果也會逐漸降低的結果。

總之，放置時間過長可對免疫熒光法測定超敏CRP造成影響，因此為了確保實驗室發送的數據準確可靠，檢驗科應加派人手，加裝儀器數量或合理分流調配相關門急診超敏CRP標本等方法解決標本多，儀器少，標本不能及時處理的問題。

[1]張亞蘭,王建利,王靜利,等.免疫熒光法與免疫散射比濁法測定超敏C反應蛋白的相關性及其在感染中的重要意義[J].山西醫藥雜志,2015,44,20:2360-2361.

[2]劉建康,萬敏才,李耀軍.2種方法檢測C-反應蛋白結果的比對分析[J].中國傷殘醫學2014,22(12):179-180.

[3]馮暉,趙進,馬晶.3種C反應蛋白檢測方法的比較[J].國際檢驗醫學雜志,2014,35(11):1470-1470.

[4]梁丹荔.C反應蛋白方法學相關性分析[J].檢驗醫學與臨床,2013,10(2):214-215.