豬胰多肽粗品對(duì)小鼠生長(zhǎng)和代謝影響的研究

任宏

胰多肽為36個(gè)氨基酸殘基組成的胃腸激素，并與酪酪肽、神經(jīng)肽Y以及酪甘肽共同組成PP大家族。相對(duì)分子質(zhì)量是4.2KDa，具有螺旋化學(xué)結(jié)構(gòu)。它廣泛的存在于各類動(dòng)物，如爬行類、兩棲類、哺乳類、和鳥類動(dòng)物中，因?yàn)橐榷嚯脑跈C(jī)體中發(fā)揮著重要作用，它對(duì)動(dòng)物的采食、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收、動(dòng)物體內(nèi)許多激素的分泌活動(dòng)以及胃腸道及其腺體的分泌和運(yùn)動(dòng)都有著重要的影響。

1 胰多肽研究現(xiàn)狀

1.1 胰多肽化學(xué)結(jié)構(gòu)

對(duì)于大部分兩棲類、爬行類、鳥類和哺乳類動(dòng)物，均是由36個(gè)氨基酸殘基組成的胰多肽，分子量大約為4.2KDa，具有螺旋結(jié)構(gòu)，結(jié)構(gòu)的共同點(diǎn)是在其肽鏈梭基端第36位上都是酪氨酰胺。除大鼠外，其它哺乳類動(dòng)物的胰多肽在化學(xué)結(jié)構(gòu)上都比較一致，各種屬之間僅有1-2個(gè)氨基酸的差異。

據(jù)研究報(bào)道，哺乳類的胰多肽與禽胰多肽相比有明顯差異，其中36個(gè)氨基酸殘基中只有15-16個(gè)氨基酸殘基是相同的。林從敏等報(bào)道的豬胰多肽（PPP）的氨基酸序列為：

Ala-Pro-Leu-Glu-Pro-Val-Tyr-Pro-Gly-Asp-Asp-Ala-Thr-Pro-Glu-Gln-Met-Ala-Gln-Tyr-Ala-Ala-Glu-Ile-Arg-Arg-Tyr-Ile-Asn-Met-Leu-Ser-Arg-Pro-Arg-Tyr-NH2 .

1.2 胰多肽細(xì)胞分布

從細(xì)胞形態(tài)學(xué)的角度看，PP細(xì)胞體積比較小，并且呈不規(guī)則形，而且在細(xì)胞的胞漿內(nèi)含有一種中等至高電子密度的呈卵圓形或圓形結(jié)構(gòu)的內(nèi)分泌顆粒，其直徑大約為140-150nm。動(dòng)物的胰腺器官是產(chǎn)生胰多肽的重要器官。不同動(dòng)物胰腺的胰多肽細(xì)胞的數(shù)量和分布有較大的差異。用免疫熒光的方法顯示，對(duì)人體研究發(fā)現(xiàn)，在胰島的周圍存在有大量的PP細(xì)胞，并且在胰導(dǎo)管上皮細(xì)胞以及胰腺外分泌實(shí)質(zhì)中也發(fā)現(xiàn)存在有散在的胰多肽細(xì)胞。經(jīng)熒光法顯示，哺乳動(dòng)物的胰多肽細(xì)胞在胰腺中的分布與在人體的分布基本相似，但在某些靈長(zhǎng)類動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)，除胰腺外，從食道到結(jié)腸整個(gè)消化道中含都有少量的胰多肽免疫反應(yīng)物。總體說(shuō)來(lái)，除了胰腺外，胃、十二指腸、回腸、結(jié)腸和直腸的粘膜中也均有存在的PP細(xì)胞。

1.3 胰多肽釋放機(jī)制

攝取食物：經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明，攝食是一個(gè)很強(qiáng)的能促使胰多肽釋放的重要因素。雞攝食后，血漿中APP的濃度可由475-1427pmol/L增加到950-2856pmol/L。人也如此，當(dāng)進(jìn)餐后，血漿PP的增加量為100-40pmol/L。并且研究表明，在食物的各成分中，引起胰多肽釋放作用最強(qiáng)的食物是蛋白質(zhì)，其次為脂肪和糖類。

體液因素：即由激素成分引起的因素，主要有胰島素、生長(zhǎng)抑素等激素，當(dāng)有食物刺激胃腸道后，會(huì)引起胃腸激素的釋放，胃腸激素通過(guò)血液循環(huán)而作用于胰多肽細(xì)胞，致使其釋放胰多肽。

1.4 胰多肽的生物活性

1.4.1 對(duì)代謝的影響

Kimmel等為了觀察APP對(duì)代謝的作用，他們做了給不禁食的雞注射APP的實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)其能分解肝糖元，經(jīng)檢測(cè)，血糖水平并無(wú)改變，反而使血液中的甘油三酯升高。其原理可能是由于APP通過(guò)刺激肝內(nèi)形成的脂肪，使肝糖元的分解產(chǎn)物轉(zhuǎn)化為脂肪，從而確保了血糖水平保持不變。

1.4.2 對(duì)胃腸道的作用

經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)研究，BPP對(duì)狗的胃腸運(yùn)動(dòng)的作用依其劑量大小而產(chǎn)生不同效果，大劑量會(huì)引起興奮，狗表現(xiàn)為嘔吐和排便;小劑量則是開始引起胃竇、十二指腸、回腸和結(jié)腸的運(yùn)動(dòng)增強(qiáng)，隨后則出現(xiàn)長(zhǎng)期抑制現(xiàn)象。如果狗的基礎(chǔ)胃酸分泌處于一個(gè)較高水平時(shí)，BPP則會(huì)抑制其分泌。

1.4.3 對(duì)機(jī)體內(nèi)分泌活動(dòng)的影響

經(jīng)學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)APP可促使動(dòng)物體內(nèi)的三碘甲腺原氨酸（T3）、生長(zhǎng)激素（GH）和四碘甲腺原氨酸（T4）的濃度升高，從而促使動(dòng)物機(jī)體的正常生長(zhǎng)發(fā)育。

2 本研究的目的和意義

從現(xiàn)有的研究結(jié)果來(lái)看，都足以說(shuō)明動(dòng)物體內(nèi)的胰多肽在多方面都具有著重要的作用。我們不僅可以從生理機(jī)能角度對(duì)胰多肽進(jìn)行研究，還可以從生化指標(biāo)與酶的活性方面來(lái)看，動(dòng)物機(jī)體中的許多物質(zhì)代謝都是通過(guò)相關(guān)酶的調(diào)節(jié)作用來(lái)實(shí)現(xiàn)的，通過(guò)觀察這些酶活性的變化，可以間接的反映出胰多肽對(duì)動(dòng)物生長(zhǎng)和代謝水平的作用。本實(shí)驗(yàn)擬從生化角度對(duì)胰多肽的功能進(jìn)行研究，本試驗(yàn)采用不同的給予PPP方式，用不同濃度的PPP粗品喂養(yǎng)小鼠，對(duì)小鼠生長(zhǎng)的影響進(jìn)行了交叉對(duì)比研究，并著重對(duì)小鼠給予不同濃度的PPP后，動(dòng)物體內(nèi)各生化指標(biāo)及酶活性產(chǎn)生的影響進(jìn)行了比較。旨在前人研究工作的基礎(chǔ)上進(jìn)行探討：①PPP喂養(yǎng)小鼠，對(duì)促進(jìn)小鼠生長(zhǎng)、提高機(jī)體免疫力等效果方面的影響。②通過(guò)試驗(yàn)得出PPP促進(jìn)小鼠生長(zhǎng)的最佳劑量和給予方式。③從分子水平研究PPP對(duì)動(dòng)物生理機(jī)能的作用，分析PPP對(duì)機(jī)體代謝相關(guān)酶活性變化的影響。

通過(guò)對(duì)PPP層析制品的制備及肽含量的測(cè)定與純度鑒定試驗(yàn)，利用磷酸鈣吸附法從豬胰臟中得到了PPP粗提液，再用sephadex G-50柱層析脫鹽后制備出PPP粗品的層析制品;并用Folin-酚試劑的方法測(cè)得自制PPP層析制品的肽含量為：8.05mg/g;用SDS-PAGE電泳法對(duì)自制PPP粗品進(jìn)行鑒定，經(jīng)Sephadex G-50層析后的PPP純度較高，PPP的分子量在4.2KD范圍內(nèi)，這一結(jié)果與研究學(xué)者報(bào)道的結(jié)果以及市售PPP純品的分子量是一致的。

綜上所述：PPP粗品能促進(jìn)動(dòng)物機(jī)體生長(zhǎng)發(fā)育，促進(jìn)動(dòng)物體重增長(zhǎng)，其作用機(jī)理與胰多肽可改善飼料利用率有關(guān)。試驗(yàn)中所測(cè)的總蛋白、白蛋白和球蛋白結(jié)果表明，口服或注射胰多肽可以提高動(dòng)物機(jī)體的組織生長(zhǎng)和損傷組織修復(fù)能力以及動(dòng)物機(jī)體的免疫力，提高免疫相關(guān)蛋白的血液含量。通過(guò)不同實(shí)驗(yàn)的結(jié)果對(duì)比，選出了PPP促進(jìn)小鼠生長(zhǎng)的最佳效量和使用方式：即80ug/ml的PPP粗品注射液0.2ml。