豬胰多肽粗品對小鼠生長和代謝影響的研究

任宏

胰多肽為36個氨基酸殘基組成的胃腸激素，并與酪酪肽、神經肽Y以及酪甘肽共同組成PP大家族。相對分子質量是4.2KDa，具有螺旋化學結構。它廣泛的存在于各類動物，如爬行類、兩棲類、哺乳類、和鳥類動物中，因為胰多肽在機體中發揮著重要作用，它對動物的采食、營養物質的吸收、動物體內許多激素的分泌活動以及胃腸道及其腺體的分泌和運動都有著重要的影響。

1 胰多肽研究現狀

1.1 胰多肽化學結構

對于大部分兩棲類、爬行類、鳥類和哺乳類動物，均是由36個氨基酸殘基組成的胰多肽，分子量大約為4.2KDa，具有螺旋結構，結構的共同點是在其肽鏈梭基端第36位上都是酪氨酰胺。除大鼠外，其它哺乳類動物的胰多肽在化學結構上都比較一致，各種屬之間僅有1-2個氨基酸的差異。

據研究報道，哺乳類的胰多肽與禽胰多肽相比有明顯差異，其中36個氨基酸殘基中只有15-16個氨基酸殘基是相同的。林從敏等報道的豬胰多肽（PPP）的氨基酸序列為：

Ala-Pro-Leu-Glu-Pro-Val-Tyr-Pro-Gly-Asp-Asp-Ala-Thr-Pro-Glu-Gln-Met-Ala-Gln-Tyr-Ala-Ala-Glu-Ile-Arg-Arg-Tyr-Ile-Asn-Met-Leu-Ser-Arg-Pro-Arg-Tyr-NH2 .

1.2 胰多肽細胞分布

從細胞形態學的角度看，PP細胞體積比較小，并且呈不規則形，而且在細胞的胞漿內含有一種中等至高電子密度的呈卵圓形或圓形結構的內分泌顆粒，其直徑大約為140-150nm。動物的胰腺器官是產生胰多肽的重要器官。不同動物胰腺的胰多肽細胞的數量和分布有較大的差異。用免疫熒光的方法顯示，對人體研究發現，在胰島的周圍存在有大量的PP細胞，并且在胰導管上皮細胞以及胰腺外分泌實質中也發現存在有散在的胰多肽細胞。經熒光法顯示，哺乳動物的胰多肽細胞在胰腺中的分布與在人體的分布基本相似，但在某些靈長類動物中發現，除胰腺外，從食道到結腸整個消化道中含都有少量的胰多肽免疫反應物。總體說來，除了胰腺外，胃、十二指腸、回腸、結腸和直腸的粘膜中也均有存在的PP細胞。

1.3 胰多肽釋放機制

攝取食物：經實驗證明，攝食是一個很強的能促使胰多肽釋放的重要因素。雞攝食后，血漿中APP的濃度可由475-1427pmol/L增加到950-2856pmol/L。人也如此，當進餐后，血漿PP的增加量為100-40pmol/L。并且研究表明，在食物的各成分中，引起胰多肽釋放作用最強的食物是蛋白質，其次為脂肪和糖類。

體液因素：即由激素成分引起的因素，主要有胰島素、生長抑素等激素，當有食物刺激胃腸道后，會引起胃腸激素的釋放，胃腸激素通過血液循環而作用于胰多肽細胞，致使其釋放胰多肽。

1.4 胰多肽的生物活性

1.4.1 對代謝的影響

Kimmel等為了觀察APP對代謝的作用，他們做了給不禁食的雞注射APP的實驗，發現其能分解肝糖元，經檢測，血糖水平并無改變，反而使血液中的甘油三酯升高。其原理可能是由于APP通過刺激肝內形成的脂肪，使肝糖元的分解產物轉化為脂肪，從而確保了血糖水平保持不變。

1.4.2 對胃腸道的作用

經過實驗研究，BPP對狗的胃腸運動的作用依其劑量大小而產生不同效果，大劑量會引起興奮，狗表現為嘔吐和排便;小劑量則是開始引起胃竇、十二指腸、回腸和結腸的運動增強，隨后則出現長期抑制現象。如果狗的基礎胃酸分泌處于一個較高水平時，BPP則會抑制其分泌。

1.4.3 對機體內分泌活動的影響

經學者研究發現APP可促使動物體內的三碘甲腺原氨酸（T3）、生長激素（GH）和四碘甲腺原氨酸（T4）的濃度升高，從而促使動物機體的正常生長發育。

2 本研究的目的和意義

從現有的研究結果來看，都足以說明動物體內的胰多肽在多方面都具有著重要的作用。我們不僅可以從生理機能角度對胰多肽進行研究，還可以從生化指標與酶的活性方面來看，動物機體中的許多物質代謝都是通過相關酶的調節作用來實現的，通過觀察這些酶活性的變化，可以間接的反映出胰多肽對動物生長和代謝水平的作用。本實驗擬從生化角度對胰多肽的功能進行研究，本試驗采用不同的給予PPP方式，用不同濃度的PPP粗品喂養小鼠，對小鼠生長的影響進行了交叉對比研究，并著重對小鼠給予不同濃度的PPP后，動物體內各生化指標及酶活性產生的影響進行了比較。旨在前人研究工作的基礎上進行探討：①PPP喂養小鼠，對促進小鼠生長、提高機體免疫力等效果方面的影響。②通過試驗得出PPP促進小鼠生長的最佳劑量和給予方式。③從分子水平研究PPP對動物生理機能的作用，分析PPP對機體代謝相關酶活性變化的影響。

通過對PPP層析制品的制備及肽含量的測定與純度鑒定試驗，利用磷酸鈣吸附法從豬胰臟中得到了PPP粗提液，再用sephadex G-50柱層析脫鹽后制備出PPP粗品的層析制品;并用Folin-酚試劑的方法測得自制PPP層析制品的肽含量為：8.05mg/g;用SDS-PAGE電泳法對自制PPP粗品進行鑒定，經Sephadex G-50層析后的PPP純度較高，PPP的分子量在4.2KD范圍內，這一結果與研究學者報道的結果以及市售PPP純品的分子量是一致的。

綜上所述：PPP粗品能促進動物機體生長發育，促進動物體重增長，其作用機理與胰多肽可改善飼料利用率有關。試驗中所測的總蛋白、白蛋白和球蛋白結果表明，口服或注射胰多肽可以提高動物機體的組織生長和損傷組織修復能力以及動物機體的免疫力，提高免疫相關蛋白的血液含量。通過不同實驗的結果對比，選出了PPP促進小鼠生長的最佳效量和使用方式：即80ug/ml的PPP粗品注射液0.2ml。