海蛾魚提取物抗氧化及抗疲勞作用

,

(1.漳州職業(yè)技術(shù)學院食品與生物工程系,福建漳州 363000; 2.福州大學藥物生物技術(shù)與工程學院,福建福州 350108)

海蛾魚屬于海蛾魚科動物(Pegasuslaternarius)[1]。廣泛分布于熱帶及溫帶海洋水域,我國主要產(chǎn)于福建及兩廣沿海。海蛾魚具有化痰止咳、壯陽補骨、宣肺透疹、燥濕止瀉、消癭散結(jié)等多種藥用功能,民間多用于治療淋巴結(jié)核、甲狀腺腫瘤、小兒氣管炎、麻疹后腹瀉、咳嗽等疾病[2],是一種極具開發(fā)潛力、食藥兩用的海洋動物,具有良好的應(yīng)用前景。近年來對海蛾魚的現(xiàn)代藥理研究主要有抗血栓[3]、抗炎[4]、提高免疫力[4]、抗腫瘤[5]、提高應(yīng)激能力[6]、保護心血管[3,7-8]、修復(fù)和改善記憶損傷[9]及對離體神經(jīng)細胞[10]的保護作用。但有關(guān)海蛾魚提取物抗疲勞、體外抗氧化等方面的研究尚未見報道。

機體代謝過程中產(chǎn)生的活性氧(Reactive oygen species,ROS)和自由基,會使細胞和機體處于氧化應(yīng)激狀態(tài)(Oxidative stress),這是導(dǎo)致許多疾病的重要因素。如果長期處于氧化壓力狀態(tài),機體會面臨諸多慢性炎性疾病的風險,例如動脈粥樣硬化、類風濕性關(guān)節(jié)炎、肥胖、高血壓、肌肉萎縮等疾病[11]。化學合成抗氧化劑,如丁基羥基茴香醚(butyl hydroxy anisd,BHA)、二丁基羥基甲苯(butylated hydroxytoluene,BHT)、特丁基對苯二酚(tertiary butylhydroquinone,TBHQ)等,雖然有較好的抗氧化性能,但大多具有相當?shù)亩靖弊饔?在人體中并無應(yīng)用,只作為工業(yè)抗氧化防腐劑使用,由于化學合成抗氧化劑不能忽視的毒副作用,天然抗氧化劑的研究開發(fā)越來越受到人們的重視,而海洋來源天然抗氧化劑的開發(fā)也日益獲得廣泛關(guān)注,如滸苔、紫菜、棲菜提取物抗氧化作用以及魷魚蛋白肽抗氧化活性表現(xiàn)都比較好[12-15]。

隨著現(xiàn)代生活節(jié)奏不斷加快,疲勞越來越成為一種常見的癥狀,令人身心憔悴、痛苦不堪。疲勞同時也是其他許多慢性疾病的伴隨癥狀,如高血壓、糖尿病和慢性心衰等疾病。疲勞的發(fā)生會對機體產(chǎn)生不同程度的損傷,帶來諸多負面效應(yīng)。因此,機體需采取必要的措施來預(yù)防可能會出現(xiàn)的疲勞癥狀,或當疲勞癥狀出現(xiàn)時縮短恢復(fù)時間就顯得非常重要,以最大程度降低機體損傷。機體的自我調(diào)節(jié)作用是一種常見而有效的抗疲勞措施,但通常恢復(fù)時間較長。目前運用營養(yǎng)補充劑或滋補藥物來預(yù)防疲勞或加快疲勞恢復(fù)的研究日益受關(guān)注[16]。

本文以海蛾魚全實體為材料,分別用乙醇和水進行提取,得到乙醇提取物和水提物。通過DPPH自由基清除能力、鐵還原法(FRAP)法、β-胡蘿卜素-亞油酸體系法評價這兩種提取物的抗氧化活性,以及通過小鼠實驗進行抗疲勞作用研究。

1　材料與方法

1.1　材料與儀器

新鮮海蛾魚購自福建省東山島;實驗ICR小鼠雄性,體重18～22 g,購自上海斯萊克實驗動物有限公司，動物許可證號SCXK HU 2012-0002;BHT(2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚)、DPPH(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼)、β-胡蘿卜素和TPTZ(三吡啶三吖嗪)均為分析純,購自Sigma公司;糖原測定試劑盒、血乳酸測定試劑盒、葡萄糖測定試劑盒、尿素氮測定試劑盒購自南京建成生物工程研究所;其他試劑均為分析純。

47600型小鼠疲勞轉(zhuǎn)棒儀意大利UGO Basile公司;UV-1800紫外可見分光光度計日本島津公司;SHB-Ⅲ循環(huán)水式真空泵鄭州長城科工貿(mào)公司;YRE-202A真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器日本EYELA公司;THZ-103B 恒溫培養(yǎng)搖床上海一恒科學儀器有限公司;Scientz-12N立式冷凍干燥寧波新芝生物科技股份有限公司。

1.2　實驗方法

1.2.1海蛾提取物的制備新鮮海蛾魚洗凈,冷凍干燥后,粉碎至約50目。用95%乙醇按料液比1∶20 g/mL于35 ℃搖床200 r/min提取3次,每次2 h,過濾收集提取液,合并濾液,減壓濃縮至膏狀,轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)皿中,35 ℃減壓真空干燥過夜,即得海蛾乙醇提取物,-20 ℃冷凍保存;經(jīng)乙醇提取后的海蛾魚濾渣,用水按同樣的方法制備,即得海蛾水提取物,-20 ℃冷凍保存。

1.2.2抗氧化實驗

在70-80年代，十隊的公購糧一直保持不變。其中公糧為7415斤，這是生產(chǎn)隊必須無償上交的。購糧為14431斤[注]華楊大隊：《廣西壯族自治區(qū)農(nóng)村人民公社一九七五年收益分配統(tǒng)計表》，高縣檔案館藏，71/1/75/53。 ，價格為9.5元100斤。公購糧共需21846斤。1975年糧食總產(chǎn)為129727斤，由于豐收，多交了2000斤雙超糧。據(jù)老農(nóng)們介紹，上交的公購糧數(shù)額是按照土改時各隊分得田畝的等級來計算。在上表中，公購糧每年占總糧的比分別是：24.0%，18.3%，22.0%，平均占兩成左右。這對于一個山區(qū)生產(chǎn)隊而言無疑是巨大的數(shù)額。

1.2.2.1DPPH自由基清除實驗采用Souza等[17]的方法,略有改動,簡述如下:2 mL DPPH自由基甲醇或水溶液(1 mmol/L)與5 mL提取物溶液(含量變化范圍:0.125～8 mg/mL)混合,振蕩搖勻,室溫避光放置30 min。用2 mL蒸餾水代替樣品作為陰性對照,相同方法處理;以BHT為陽性對照,于517 nm波長測定吸光值。結(jié)果用相對于陰性對照的DPPH自由基清除率(%)來表示,計算公式如下:

式中,A0表示樣品與溶劑混合液的吸光度;Ai表示DPPH自由基與樣品反應(yīng)后的吸光度;Aj表示DPPH自由基與溶劑混合后的吸光度。實驗重復(fù)三次求平均值。

1.2.2.2β-胡蘿卜素-亞油酸體系抗氧化實驗采用Shon等[18]的方法,略做修改簡述如下:將1 mgβ-胡蘿卜素溶解于5 mL氯仿中,隨后加入100 μL亞油酸和1 mL Tween 80,混合物室溫振蕩混合10 min。隨后,40 ℃減壓旋蒸去除氯仿,再加入100 mL氧飽和蒸餾水,劇烈搖晃1 min,形成乳化物(β-胡蘿卜素-亞油酸乳化物)。96孔微孔板,每孔加入50 μL樣品溶液和200 μL以上乳化液,搖床80 r/min混勻1 min,50 ℃孵育反應(yīng)。在酶標儀上于470 nm波長處測定，初始反應(yīng)的吸光值以及反應(yīng)120 min后的吸光值，分別記為A0和A120,ΔA=A0-A120,ΔA越大表明β-胡蘿卜素氧化程度越高,褪色越多。計算樣品對體系β-胡蘿卜素褪色的抑制率,公式如下:

式中,ΔA0表示不加樣品抑制時的褪色情況;ΔAi表示加了某種樣品產(chǎn)生抑制作用時的褪色情況。

1.2.2.3鐵還原抗氧化能力實驗(FRAP)采用Benzie和Strain的方法[19],簡述如下:首先配制FRAP工作液,取2.5 mL 10 mmol/L的三吡啶三吖嗪(TPTZ,用40 mmol/L HCl配制)、2.5 mL 20 mmol/L的FeCl3和25 mL 0.3 mol/L的醋酸緩沖液(pH3.6)混合均勻,即得FRAP工作液。

測定方法:取0.3 mL濃度為1.0 mg/mL的不同樣品,加入2.7 mL預(yù)熱至37 ℃的FRAP工作液,搖勻后放置10 min,于593 nm處測定吸光值,用空白溶劑作參比對照測定。根據(jù)反應(yīng)后的吸光值,從FeSO4標準曲線上求得對應(yīng)FeSO4濃度值(μmol/L),根據(jù)受試樣品所配制的濃度,換算成對應(yīng)的當量“μmol(FeSO4)/g(樣品)”值,簡寫為“μmol/g”,定義為FRAP值。此值越大,表明抗氧化能力越強。

繪制FeSO4標準曲線:準確稱量6.08 mg FeSO4溶于適量水中,加入18 mol/L濃硫酸0.25 mL,再加水定容至50 mL,并放入一小鐵釘,作為貯液(濃度800 μmol/L),將此貯液稀釋成25、50、100、200、400、800 μmol/L系列標準液濃度,各取0.3 mL按以上FRAP方法處理,測定吸光值,繪制標準曲線。所得標準曲線為y=0.0012x+0.00958(R2=0.9999),其中y為所測得的吸光度,x為標準液濃度(μmol/L)。

1.2.3小鼠抗疲勞實驗

1.2.3.1給藥方案先進行樣品毒性預(yù)實驗,結(jié)果表明小鼠單次經(jīng)口給予5000 mg/kg,未見明顯毒性反應(yīng)。乙醇提取物用0.1% CMC(羧甲基纖維素鈉)分散;水提物用水溶解。小鼠隨機分組,每組10只,灌胃給藥(1次/d),持續(xù)一周后,進行抗疲勞實驗。組別設(shè)置如下所示:

陰性對照組:灌胃生理鹽水,每日一次;海蛾醇提物組:設(shè)置兩個濃度組100、400 mg/kg,每日灌胃一次;海蛾水提物組:設(shè)置兩個濃度組100、400 mg/kg,每日灌胃一次。

1.2.3.2小鼠轉(zhuǎn)棒實驗小鼠篩選:分組之前,動物放置于轉(zhuǎn)棒上,將轉(zhuǎn)速設(shè)定為15 r/min,選取協(xié)調(diào)能力較好、停留時間超過20 s的動物。訓練:分組之后,持續(xù)灌胃給藥一周,第4 d開始進行訓練,每次訓練10 min,每天一次,共3 d。測試:最后一次灌胃給藥后1 h,進行正式測試。將轉(zhuǎn)速調(diào)為15 r/min,觀察和記錄動物在轉(zhuǎn)棒上的停留時間,如果時間延長,表明具有抗疲勞作用。

1.2.3.3小鼠負重強迫游泳實驗此實驗分組及給藥同1.2.3.1,將小鼠放于深28 cm、溫度25 ℃的游泳池中,每只小鼠尾部負重為10%體重,記錄動物自游泳開始至力竭下沉10 s 內(nèi)不再露水面的持續(xù)時間。如果游泳持續(xù)時間延長,表明具有抗疲勞作用。

1.2.3.4抗疲勞血清生化指標測定1.2.3.3負重游泳的小鼠在強迫游泳后,眼眶取血,于4 ℃ 2500 r/min離心10 min,取上清液血清,-80 ℃保存以備測定;另解剖小鼠,取肝臟及大腿肌肉,-80 ℃保存以備糖原測定。尿素氮、乳酸、血糖及糖原含量測定均按照試劑盒說明書操作。

1.3　數(shù)據(jù)處理

采用Origin軟件單因素方差分析,p<0.05表明差異有顯著性,p<0.01表明差異極為顯著。結(jié)果用X±S表示。

2　結(jié)果與討論

2.1　海蛾提取物體外抗氧化實驗

2.1.1DPPH自由基清除能力DPPH自由基作為一種較穩(wěn)定的自由基供體,廣泛用于天然抗氧化劑自由基清除能力的評估。化合物對DPPH自由基的清除能力主要取決于其對未成對電子的配對能力。自由基清除實驗結(jié)果如圖1所示。幾種受試物相比較,陽性對照品BHT具有最強的DPPH自由基清除能力,在2、4、8 mg/mL濃度時清除率均超過92%,在最低濃度0.125 mg/mL時清除率也超過32%,其IC50約為0.39 mg/mL;其次是海蛾魚醇提物,其DPPH自由基清除能力呈現(xiàn)明顯的濃度依賴性,8 mg/mL濃度時清除率為89.3%,0.125 mg/mL時為6.69%,其IC50約為1.22 mg/mL;清除能力最差的為海蛾魚水提物組,最高濃度時僅為33.04%。由此可見,海蛾魚醇提物具有一定的DPPH自由基清除能力,但弱于陽性對照品BHT,而海蛾魚水提物則明顯低于醇提物。

圖1　海蛾提取物對DPPH自由基的清除率Fig.1　Effects of Pegasus laternarius extracts on the percentage of DPPH· clearance

2.1.2β-胡蘿卜素-亞油酸體系抗氧化能力由于體系中亞油酸氧化產(chǎn)生過氧化氫自由基,使得β-胡蘿卜素漂白褪色,如果體系中同時存在抗氧化劑,則會對抗過氧化氫自由基,對該漂白褪色產(chǎn)生抑制作用。β-胡蘿卜素漂白實驗結(jié)果如圖2所示。與DPPH自由基清除實驗結(jié)果相類似,BHT同樣具有最強的抑制β-胡蘿卜素褪色能力,其在濃度1、2、4、8 mg/mL時抑制率均超過90%,IC50為0.17 mg/mL;海蛾魚醇提物抑制褪色能力其次,最高8 mg/mL時為82.9%,最低為23.3%,IC50為1.18 mg/mL;而海蛾魚水提物抑制能力最低,最高僅為36.24%。由此可見,海蛾魚醇提物具有一定的抑制β-胡蘿卜素褪色方面抗氧化能力,但弱于陽性對照品BHT。

圖2　海蛾提取物β-胡蘿卜素-亞油酸體系抗氧化分析Fig.2　Effects of Pegasus laternarius extracts on β-carotene-lineate bleaching assaying

2.1.3鐵還原抗氧化能力(FRAP)FRAP分析反映了抗氧化劑通過電子轉(zhuǎn)移將氧化態(tài)的Fe3+還原為Fe2+復(fù)合物的能力,也間接反映了還原機體活性氧的能力。FRAP實驗結(jié)果如圖3所示。BHT具有最強的鐵還原抗氧化活性,其FRAP值為2039.48 μmol/g;海蛾魚醇提物其次,FRAP值為383.35 μmol/g;海蛾魚水提物最低為109.93 μmol/g。

表3　樣品對肝糖原、肌糖原、血糖、尿素氮及血乳酸含量的影響(n=10)Table 3　Effect of samples on hepatic glycogen,muscle glycogen,blood glucose,BUN,blood lactate contents(n=10)

圖3　海蛾提取物FRAP值比較Fig.3　Effects of Pegasus laternarius extracts on FRAP

對于幾種體外抗氧化分析方法,海蛾魚醇提取物都顯示了一定的抗氧化作用,優(yōu)于水提物,而弱于人工合成抗氧化劑BHT。結(jié)果表明,海蛾魚醇提物可望作為營養(yǎng)補充劑來緩解機體的氧化應(yīng)激狀,減少機體面臨某些慢性疾病的風險。但還需進行深入的機理研究。

2.2　小鼠抗疲勞實驗

2.2.1轉(zhuǎn)棒實驗結(jié)果如表1所示。與對照組相比,水提物組對小鼠轉(zhuǎn)棒的停留時間提高較為明顯,100 mg/kg劑量時,可使停留時間顯著(p<0.05)延長到(40.93±7.12) s,而400 mg/kg劑量時可進一步延長至(61.81±8.57) s,差異極顯著(p<0.01),具有劑量依賴性;但是醇提物100 mg/kg和400 mg/kg劑量與對照組相比并無統(tǒng)計學差異。由此可見,海蛾魚水提物具有一定的抗疲勞作用;而海蛾魚醇提物無明顯抗疲勞作用。

表1　不同樣品對小鼠轉(zhuǎn)棒停留時間的影響(n=10)Table 1　The influence of different sample on the rotating rod lasting time(n=10)

注：與對照組相比較,*p<0.05,**p<0.01;表2、表3同。

表2　樣品對小鼠負重游泳的影響(n=10)Table 2　The influence of different sample on weight-loaded swimming time(n=10)

2.2.2負重強迫游泳實驗結(jié)果如表2所示。與對照組相比較,海蛾魚醇提物在100、400 mg/kg劑量下均未有顯著差異;水提物雖在100 mg/kg劑量下也未見顯著差異,但在400 mg/kg可將游泳持續(xù)時間延長至(185.30±35.25) s,差異顯著(p<0.05)。可見,與轉(zhuǎn)棒實驗結(jié)果相類似,海蛾魚水提物展現(xiàn)出一定的抗疲勞功效,而醇提物在100～400 mg/kg范圍內(nèi)未見抗疲勞作用。

2.2.3海蛾魚提取物對肝糖原、肌糖原、血糖、尿素氮及血乳酸含量的影響糖原是ATP供能的主要來源,是機體重要供能源。肌糖原是最直接的供能源,而肝糖原則是重要的儲能物質(zhì)。當機體運動時,并不馬上分解肝糖原,而是當肌糖原消耗殆盡血糖不夠時,才動員分解肝糖原來提供能量。故肌/肝糖原含量是衡量機體運動耐力的重要指標。由表3可知,海蛾魚水提物對肝糖原提升效果顯著,100 mg/kg劑量時,肝糖原含量為(14.63±4.11) mg/g,比對照組顯著提高(p<0.05),400 mg/kg劑量時,肝糖原含量為(17.84±4.52) mg/g,極顯著提高(p<0.01),呈一定劑量依賴;而對于肌糖原含量,雖有一定的提升作用,但沒有顯著差異。海蛾魚醇提物對肝糖原和肌糖原都無明顯的提升作用。水提物還具有穩(wěn)定血糖作用,在400 mg/kg劑量時可使運動后的小鼠血糖提升至(9.24±1.17) mmol/L,與本實驗測定的正常值約為9～9.5 mmol/L相當,顯著(p<0.05)高于對照組血糖值(7.53±1.37) mmol/L,100 mg/kg時雖有提升,但并無顯著性。海蛾醇提物同樣不具備穩(wěn)定血糖功能,不具有顯著性。

當機體運動達到一定程度時,蛋白質(zhì)會分解代謝參與供能,使得血液中尿素氮(BUN)含量升高,血尿素氮是衡量機體運動耐受力的重要指標[20]。機體劇烈運動時,由于糖酵解作用產(chǎn)生乳酸,乳酸的累積會使機體產(chǎn)生疲勞感。乳酸產(chǎn)生速度與清除速度是否匹配決定著機體運動時的疲勞程度,故血乳酸也是衡量機體運動耐受力的重要指標[21]。由表3可知,相對于對照組,海蛾魚水提物顯著降低BUN水平,400 mg/kg時可使BUN降至(7.92±0.57) mmol/L,差異顯著(p<0.05),而100 mg/kg時無顯著性差異;海蛾魚水提物也可顯著(p<0.05)降低血乳酸水平,100 mg/kg時為(4.42±0.78) mmol/L,差異顯著(p<0.05),400 mg/kg時為(3.76±0.41) mmol/L,差異極顯著(p<0.01);同樣,海蛾魚醇提物對BUN和血乳酸的影響不具有顯著性。

本研究分別采用海蛾魚實體乙醇提取物和水提物進行抗疲勞研究,這兩種提取物存在一定的極性差異。根據(jù)相似相溶原理,極性分子組成的溶質(zhì)易溶于極性分子組成的溶劑。水提物成分極性較強,其中應(yīng)含有較多的糖類、蛋白質(zhì)、肽、氨基酸等物質(zhì)。近年來,天然來源的這幾類物質(zhì)抗疲勞方面的研究報道較多[22-25]。BUN含量降低,表明有可能是抑制了蛋白質(zhì)的分解代謝;血乳酸含量降低,表明可能促進乳酸代謝分解;運動后的血糖提升至正常水平,說明有可能促進糖類代謝,釋放葡萄糖進入血糖,而穩(wěn)定血糖值。根據(jù)本實驗結(jié)果可推測其抗疲勞機制可能為,海蛾魚水提物可抑制機體運動時蛋白質(zhì)的分解代謝,促進乳酸代謝,促進糖類物質(zhì)分解,穩(wěn)定血糖。

3　結(jié)論

海蛾魚醇提物對DPPH自由基清除IC50為1.22 mg/mL;β-胡蘿卜素-亞油酸體系抗氧化實驗中,醇提物IC50為1.18 mg/mL;鐵還原抗氧化能力實驗中,醇提物FRAP值為383.35 μmol/g,而水提物為109.93 μmol/g。海蛾魚醇提物具有一定的抗氧化活性,水提物不具有明顯的抗氧化活性。海蛾魚水提物可顯著提高小鼠轉(zhuǎn)棒滯留時間,具有劑量依賴性100 mg/kg為(40.93±6.76) s(p<0.05),400 mg/kg為(61.81±8.57) s(p<0.01);水提物在400 mg/kg劑量(p<0.05)時可顯著延長游泳時間;同時,海蛾魚水提物還可提高肝糖原含量至(17.84±4.52) mg/g(p<0.01),穩(wěn)定血糖(9.24±1.17) mmol/L(p<0.05),降低BUN含量至(7.92±0.57) mmol/L(p<0.05),降低血乳酸含量至(3.76±0.41) mmol/L(p<0.01)。而海蛾魚醇提物不具有明顯的抗疲勞作用。海蛾魚提取物具有一定的抗疲勞和抗氧化活性;兩種提取物可互補,使得海蛾魚提取物具有開發(fā)成相應(yīng)功能營養(yǎng)補充劑的潛力。

[1]羅獻瑞. 實用中草藥彩色圖集[M]. 廣州:廣東科技出版社,1993:36-41.

[2]中國人民解放軍海軍后勤部衛(wèi)生部. 中國藥用海洋生物[M]. 上海:上海人民出版社,1977:64-66.

[3]許實波,周軍,李瑞聲. 海蛾提取物的抗血栓作用研究[J].中山大學學報論叢,1994(6):23-28.

[4]許實波,唐孝禮,李瑞聲. 海蛾提取物對機體抗氧化、抗炎及免疫功能的影響[J]. 中山大學學報(增刊),1990,29:105-111.

[5]唐孝禮. 海蛾提取物的藥理作用研究[D]. 廣州:中山大學,1991:16-22.

[6]唐孝禮,許實波. 海蛾提取物對小鼠免免疫器官重量和抗應(yīng)激能力的影響[J]. 中藥材,1999,22(6):300-303.

[7]周軍,許實波. 海蛾提取物抗血小板作用機制研究[J]. 中山大學學報論叢,1994(6):18-22.

[8]許實波,周軍,李瑞聲,等. 海蛾提取物抗血小板作用研究[J]. 中山大學學報論叢,1994(6):11-17.

[9]Vohra B P,Hui X. Improvement of impaired memory in mice by taurine[J]. Neural Plasticity,2000,7(4):245-259.

[10]Li M,Chen M,Huang H,et al. Neuroprotective effects of active ingredients isolated fromPegasuslaternariuson cultured cerebral neurons[J]. Cellular and Molecular Neurobiology,2011,31(1):73-82.

[11]Kovatcheva E G,Koleva I I,Ilieva M,et al. Antioxidant activity of extracts fromLavandulavera MM cell cultures[J]. Food Chemistry,2001,72(3):295-300.

[12]李鋒,蔡振輝,陳金梅,等. 滸苔多酚的抗氧化及改善胰島素抵抗作用[J]. 現(xiàn)代食品科技,2016,32(8):34-41.

[13]吳燕燕,張婉,李來好,等. 海藻中抗氧化、保濕功能活性物質(zhì)的研究進展[J]. 海洋科學,2015,39(9):138-142.

[14]張麗斌,熊何健,吳靖娜,等. 羊棲菜中多酚的提取制備及體外抗氧化活性研究[J]. 中國農(nóng)學通報,2015,31(32):40-47.

[15]胡小軍,江敏,莫秋遠,等. 魷魚肌肉蛋白肽的制備工藝優(yōu)化及其抗氧化活性[J]. 食品工業(yè)科技,2017,38(5):191-195.

[16]Mizuma H,Tanaka M,Nozaki S,et al. Daily oral administration of crocetin attenuates physical fatigue in human subjects[J]. Nutrition Research,2009,29(3):145-150.

[17]Souza B W S,Cerqueira M A,Martins J T,et al. Antioxidant potential of two red seaweeds from theBraziliancoasts[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry,2011,59(10):5589-5594.

[18]Shon M Y,Kim T H,Sung N J. Antioxidants and free radical scavenging activity ofPhellinusbaumii(Phellinus of Hymenochaetaceae)extracts[J]. Food Chemistry,2003,82(4):593-597.

[19]Benzie I,Strain J. Ferric reducing/antioxidant power assay:direct measure of total antioxidant activity of biological fluids and modified version for simultaneous measurement of total antioxidant power and ascorbic acid concentration[J]. Methods in Enzymology,1999(299):15-27.

[20]熊正英,唐量. 蘆薈對運動訓練小鼠血清酶活性和血尿素氮、血糖及血紅蛋白含量的影響[J]. 陜西師范大學學報:自科版,2004,32(2):90-92.

[21]馬曉瑜. 血乳酸在運動訓練中的應(yīng)用分析[J]. 文體用品與科技,2017(4):170-171.

[22]Wang J,Li S,Fan Y,et al. Anti-fatigue activity of the water-soluble polysaccharides isolated fromPanaxginsengCA Meyer[J]. Journal of Ethnopharmacology,2010,130(2):421-423.

[23]Ding J-F,Li Y-Y,Xu J-J,et al. Study on effect of jellyfish collagen hydrolysate on anti-fatigue and anti-oxidation[J]. Food Hydrocolloids,2011,25(5):1350-1353.

[24]You L,Zhao M,Regenstein J M,et al.Invitroantioxidant activity andinvivoanti-fatigue effect of loach(Misgurnusanguillicaudatus)peptides prepared by papain digestion[J]. Food Chemistry,2011,124(1):188-194.

[25]余龍江,金文聞. 瑪咖(Lepidiummeyenii.)干粉的營養(yǎng)成分及抗疲勞作用研究[J]. 食品科學,2004,25(1):164-166.