牛羊布病的診斷及防治

通遼市科爾沁左翼后旗農(nóng)畜產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗檢測站 028100

1 病原

布魯氏菌為革蘭氏陰性短桿菌，大小為0.6～1.3um×0.5～0.7um，散在分布，無芽孢及鞭毛，在條件不利時有形成夾膜的能力。該菌難以著色，吉姆薩染色呈紫色。該菌屬包括6個種19個生物型。按生化和血清學(xué)反應(yīng)可分為馬爾他布魯菌(羊型)、流產(chǎn)布魯菌(牛型)和豬布魯菌(豬型)，另外還有森林鼠型、綿羊附睪型和犬型。感染人者主要為羊、牛和豬型。其中致病力最強的為羊型，其次為豬型，牛型最弱。傳染源是患病的羊、牛、豬，病原菌主要存在于病畜的組織、糞便、尿液、乳汁、產(chǎn)道分泌物、羊水、胎盤及皮毛內(nèi)。消化道、呼吸道和生殖道是主要的感染途徑，也可通過損傷的皮膚和黏膜感染，常呈地方性流行。人主要通過皮膚、黏膜、消化道和呼吸道感染，尤其以感染羊種布魯氏菌、牛種布魯氏菌最為嚴(yán)重。豬種布魯氏菌感染人較少見，犬種布魯氏菌感染人罕見，綿羊附睪種布魯氏菌和沙林鼠種布魯氏菌基本不感染人。

2 臨床癥狀

（1）牛的潛狀期為2周至6個月。母牛最明顯的臨診癥狀是流產(chǎn)，通常發(fā)生于妊娠后的6～8個月。流產(chǎn)前數(shù)日表現(xiàn)出分娩預(yù)兆，陰道黏膜潮紅腫脹，有粟粒大紅色的結(jié)節(jié)，陰唇及乳房腫脹，不久即發(fā)生流產(chǎn)。流產(chǎn)胎兒多為死胎，有時產(chǎn)下弱犢，往往存活不久。大多數(shù)母牛流產(chǎn)后伴發(fā)胎衣停滯和子宮內(nèi)膜炎，從陰道內(nèi)流出污穢不潔的紅褐色惡臭分泌物，持續(xù)2～3周，有的病例長期不愈，不能妊娠。非妊娠牛常常發(fā)生關(guān)節(jié)炎和局部腫脹，多見于膝關(guān)節(jié)。病公牛發(fā)生睪丸炎、附睪腫脹、關(guān)節(jié)炎及局部腫脹，配種能力降低。牛布魯氏菌病的病程為慢性經(jīng)過，可延續(xù)數(shù)年之久。明顯癥狀消失后，如不伴發(fā)慢性子宮炎可自愈。

（2）妊娠病母羊的主要臨床癥狀是流產(chǎn)，多發(fā)于妊娠后的3～4個月。流產(chǎn)前的癥狀一般不明顯，部分病羊在流產(chǎn)前2～3天呈現(xiàn)胃腸弛緩和精神沉郁癥狀，常喜伏臥，食欲減退，飲欲增加，體溫升高，陰道流出黏液性或黏性血樣分泌物，還可能有乳房炎、關(guān)節(jié)炎、滑膜炎及支氣管炎癥狀。病公羊經(jīng)常發(fā)生睪丸炎、附睪炎及多發(fā)性關(guān)節(jié)炎。

3 診斷

（1）母牛最顯著的臨診癥狀是流產(chǎn)。流產(chǎn)前數(shù)日除表現(xiàn)出陰唇和乳房增大、肷部與肋部下陷及生殖道發(fā)炎等分娩預(yù)兆外，流產(chǎn)時胎水多清薄，但有時渾濁含有膿樣絮片。公牛有時可見陰莖潮紅腫脹，更常見的是睪丸炎、附睪炎、腱鞘炎和滑液囊炎。妊娠母羊流產(chǎn)常發(fā)生在妊娠后的90～110天，食欲減退、精神萎頓、起臥不安，陰道中流出黃色或灰黃色黏液，流產(chǎn)母羊發(fā)生子宮內(nèi)膜炎，排污穢惡露。也有早產(chǎn)、產(chǎn)死胎、乳房炎、關(guān)節(jié)炎、跛行、公羊睪丸炎和附睪炎等。

（2）病理學(xué)診斷。該病的主要病變?yōu)樯称鞴俚难仔詨乃溃ⅰ⒘馨徒Y(jié)、肝、腎等器官形成特征性肉芽腫(布病結(jié)節(jié))，有的可見關(guān)節(jié)炎。胎兒主要呈敗血癥病變，漿膜和黏膜有出血點和出血斑，皮下結(jié)締組織發(fā)生漿液性和出血性炎癥。

（3）細菌學(xué)診斷。流產(chǎn)胎兒的胎衣和胃內(nèi)容，病畜的肝、脾、乳房、腹股溝及下頜骨等處的淋巴結(jié)，子宮和睪丸等組織都是布魯氏菌分離的好材料[1]。將其制成涂片，使用柯茲羅夫斯基染色法染色，通過顯微鏡觀察，可見單個、成對或成堆存在的紅色球桿狀細菌，其他細菌被染成綠色或藍色[2]。也可將采取的病料接種于培養(yǎng)基、敏感的動物或未受精的雞卵進行分離培養(yǎng)。雖然細菌學(xué)檢查是確診人畜間布魯菌病最可靠的方法，可鑒定布魯菌的各生物型，但是組織中含布魯菌的量比較少，又很難獲得未污染的樣本[3]。進行血和組織培養(yǎng)時，因敏感性低、耗時和生物安全要求較高等因素，使這種診斷方法不宜推廣，常規(guī)檢測應(yīng)用時受到了限制。

（4）血清學(xué)診斷。血清學(xué)診斷的基本原理是用已知的布魯菌抗原檢測被檢動物血清中的抗體確定是否被感染，結(jié)合臨床癥狀等分析發(fā)病情況。臨床中常用的血清方法有虎紅平板凝集試驗和試管凝集試驗等，這些血清學(xué)方法各具優(yōu)點、各有不足，所以臨床中同時使用幾種方法來綜合分析其檢測結(jié)果。

①虎紅平板凝集試驗。取一潔凈玻璃板，用玻璃鉛筆劃分為4cm2的方格，在玻璃板上標(biāo)記各受檢血清號，然后加相應(yīng)血清30ul，接著在受檢血清旁滴加抗原30ul，用牙簽將各格中的血清和抗原混勻，輕輕轉(zhuǎn)動玻璃板，5分鐘后在對照組完全成立的條件下判讀結(jié)果。

徐春厚等人在1995年報道，使用虎紅平板凝集試驗、試管凝集試驗、二巰基乙醇試管凝集試驗和致敏紅細胞凝集試驗檢測了32份奶牛血樣，比較了這4種診斷方法的優(yōu)缺點、符合率和檢出率，結(jié)果發(fā)現(xiàn)虎紅平板凝集試驗檢出的陽性率最高，占90.63%，其他3種診斷方法基本類似；這4種診斷方法的陰陽性符合率僅為50%，二巰基乙醇試管凝集試驗與試管凝集試驗，這兩者與致敏紅細胞凝集試驗的符合率偏低。由此看出，診斷布魯菌病不可單用一種檢測方法來判定，必須結(jié)合幾種檢測方法來綜合判定，因為有可能出現(xiàn)非特性結(jié)果[4]。1981年呂南平報道，虎紅平板凝集試驗與抗球蛋白試驗要比試管凝集試驗、半胱氨酸試驗敏感性高，而虎紅平板凝集試驗比抗球蛋白試驗的操作程序要簡單得多。虎紅平板凝集試驗簡便易行、成本低廉，適用于布魯菌病大面積檢測和流行病學(xué)調(diào)查，我們國家將其作為布魯菌病診斷的初篩檢測方法。

②試管凝集試驗。用0.5%石炭酸生理鹽水稀釋牛血清 1∶25、1∶50、l∶100 及 l∶200，檢驗羊血清時，稀釋度為 1∶12.5、l∶25、1∶50 及 1∶100， 稀釋后加入 l∶20 倍稀釋抗原，置37～38℃溫箱中20～22小時，取出在室溫中靜止2小時判定結(jié)果。試管凝集試驗是各國診斷布魯菌病的常規(guī)血清學(xué)診斷方法，至今仍在臨床中廣泛使用。1997年馮元璋描述，試管凝集試驗是比較敏感、特異和穩(wěn)定的診斷方法，它可以檢測人畜血清中三類免疫球蛋白：IgG、IgM 和 IgA，IgG2、IgM 是其主要檢測的抗體，而且此診斷方法檢測IgM的敏感性明顯高于IgG2，因此試管凝集試驗可作為人畜間布魯菌病的早期診斷[5]。此診斷方法簡便，判定容易，特異性較強，具有很高的診斷價值，是我國診斷布魯菌病法定的診斷方法。但是此診斷方法因受各種因素影響，可能會出現(xiàn)假陽性或假陰性的結(jié)果，而且有些感染動物的抗體滴度未必都能達到檢測水平，所以單獨使用此診斷方法容易造成漏診和誤診，因此應(yīng)采取綜合診斷為妥。

③瓊脂擴散試驗。此項試驗技術(shù)已成功用于檢測綿羊附睪種布魯菌病沉淀抗體，被列為檢測綿羊布魯菌病的常規(guī)方法，但是不能區(qū)別綿羊附睪種還是羊種布魯菌感染。另外，此試驗與補體結(jié)合試驗相同，主要檢測的是IgG型抗體，所以兩者的檢測結(jié)果比較一致。該試驗方法簡單易行，特異性較高，但敏感性較低，因此對陽性病畜有診斷意義。但是陰性病畜不能排除無布魯菌病，使之在臨床應(yīng)用上受到了限制。

檢疫和診斷布魯菌病主要采用血清學(xué)和細菌學(xué)方法。細菌培養(yǎng)耗時，而易污染周圍環(huán)境，存在實驗室人員感染的風(fēng)險。培養(yǎng)布魯菌要求在生物安全三級實驗室進行，細菌培養(yǎng)方法當(dāng)前很少采用。血清學(xué)檢測方法種類繁多，是布魯菌病流行病學(xué)監(jiān)測的標(biāo)準(zhǔn)方法。

4 防治措施

（1）防止外來牛羊布病感染者。控制該病傳入最好的辦法是自繁自養(yǎng)。必須引進種畜或補充畜群時，要嚴(yán)格執(zhí)行檢疫，將引進種畜隔離飼養(yǎng)2個月，然后進行布病檢測，全群2次免疫生物學(xué)檢查為陰性者才可以與原有牲畜混群飼養(yǎng)。

（2）做好感病牛羊的凈化工作。定期檢疫，每年至少檢疫1次，一經(jīng)發(fā)現(xiàn)帶菌者立即淘汰處理。對已經(jīng)感染的牛羊做好無害化處理，同時將圈養(yǎng)感染布病牛羊的圈舍、產(chǎn)生的垃圾、用具、運輸工具以及周圍的建筑物進行嚴(yán)格消毒。同時工作人員也要做好自身的防護，消毒時要著防護服、口罩等。

（3）做好牛羊布病的預(yù)防與檢疫。由于牛羊布病的感染率的逐年遞增，這嚴(yán)重威脅到牛羊養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展和當(dāng)?shù)厝藗兊慕】禒顩r。因此必須提前預(yù)防，做好牛羊的免疫接種工作。目前國內(nèi)布病主要疫苗有A19、M5、S2，由于抗體活性較強，A19、M5 不能用于懷孕動物。另外還要對牛羊進行定期的檢疫工作，防止后期由于其他原因造成的布病感染。

（4）做好人員預(yù)防并加大宣傳力度。人類布病的預(yù)防，特別要注意職業(yè)性感染，凡在動物養(yǎng)殖場、屠宰場、動物產(chǎn)品加工廠的工作者以及獸醫(yī)、實驗室工作人員，必須嚴(yán)守防護制度，尤其在子畜大批生產(chǎn)季節(jié)，更要特別注意，做好相應(yīng)的防護措施；患病動物乳肉食品必須滅菌后食用；必要時可用疫苗（如104M苗）皮上劃痕接種，接種前應(yīng)進行變態(tài)反應(yīng)試驗，陰性反應(yīng)者才能接種。同時各級地方政府要加強布病對牛羊養(yǎng)殖、人類健康危害以及防治措施的宣傳力度，提高人們對布病危害與防治的認識。另外還要提高防疫工作人員的防治水平，增強工作人員自身的防范能力，避免工作人員感染布病。切斷動物源布魯氏菌病，便可減少人間布魯氏菌病的發(fā)生率。因此，防治和根除動物布魯氏菌病是控制人間布魯氏菌病的關(guān)鍵。

參考文獻：

［1］吳冬玲.布魯氏菌VirB8PCR診斷方法的建立與應(yīng)用及Ery基因的克隆與序列分析[D].新疆農(nóng)業(yè)大學(xué),碩士論文,2008.

［2］尚德秋,于恩庶,趙恒云,等.布魯氏菌病實驗診斷的非特異性反應(yīng)及其鑒別[M].北京：海洋出版社,1995.

［3］李福興,尚德秋.實用臨床布魯菌病[M].哈爾濱:黑龍江科學(xué)技術(shù)出版社,2010.

［4］黃建,李恪梅.布病防治工作中檢測制劑和技術(shù)的新動向[J].中國地方病雜志，1999,14(2):80-82.

［5］齊景文.布魯氏菌病常用診斷方法應(yīng)用現(xiàn)狀及評價[J].中國畜牧獸醫(yī),2006,33(8):70-73.