羊流產衣原體滅活疫苗對綿羊流產的治療效果觀察

王文勇, 劉寶漢, 馬元蓮, 解安敏, 周繼章, 蔡金山

(1. 青海省互助縣畜牧獸醫工作站, 青海 互助810599 ;2. 中國農業科學院蘭州獸醫研究所 家畜疫病病原學國家重點實驗室, 甘肅 蘭州730046 ;3. 青海省動物疫病預防控制中心, 青海 西寧810000)

衣原體(Chlamydia) 是嚴格胞內寄生的革蘭陰性細菌,直徑0.2 ～0.5 μm,介于立克次體和病毒之間,能夠通過0.45 μm 濾膜,只能在宿主細胞內生長,不能像大部分細菌一樣生長在瓊脂平板上。 衣原體病由不同種的衣原體感染引起,廣泛地流行于動物界和人類,是一種高度接觸性傳染病。 其中,流產衣原體主要寄生于豬、牛、羊等多種動物生殖道黏膜表面的上皮細胞內,能夠引發生殖道黏膜受損,導致母畜流產、產死胎、弱胎等,還可能引發公畜睪丸炎、尿道炎、龜頭和包皮炎等,并且偶爾也會對妊娠婦女產生巨大的威脅,引起流產或急性感染[1]。 流產衣原體是羊地方性流產(OOEA)的病原,也能引起豬、牛等多種脊椎動物在妊娠晚期發生流產,造成嚴重經濟損失。 作為一種嚴重的人獸共患病病原,其防控研究具有非常重要的公共衛生及經濟意義。

我國對羊衣原體病的研究開始于1978 年,科研人員對青海、西藏、內蒙以及甘肅等地的羊流產病料進行了分離、鑒定和免疫學研究[2-3],調查報道這些地區山羊的流產率高達20% ～25%。 何存利等對寧夏各地區的16 個規模化羊場進行了衣原體病調查,發現羊場的陽性率為100%,羊群的平均陽性率為19. 3%[4]。 何成基等采用衣原體間接血凝試驗對青海省海北州門源縣、祁連縣、剛察縣和海晏縣的1 223 份羊血清進行了檢測,結果顯示,公羊血清陽性率為6.18%,生產母羊血清陽性率為8.07%[5]。 成偉偉等對采自全國8 個省(區)的羊血清樣本進行檢測,陽性率達46.09%(342/742),顯示羊衣原體在我國流行嚴重[6]。

青海省互助縣是畜牧業養殖大縣,目前全縣共存欄羊44.8 萬只,其中,規模養殖場存欄量占總存欄量的51.38%,散養戶存欄量占總存欄量的48.62%,規模養殖場存欄占全縣存欄量的比重越來越大,規模養殖業呈現“半放牧+半舍飼”和“全舍飼”的新型養殖方式。 由于規模養殖飼養密度大,衣原體病感染呈逐年上升趨勢,在預防免疫中發現衣原體疫苗對已感染衣原體病的母羊似乎有一定的治療作用,為了證實治療效果,用衣原體疫苗對流產母羊進行了免疫治療研究。

1 材料與方法

1.1 主要材料 布魯菌病用虎紅平板凝集試驗試劑盒(批號為201602),購自哈藥集團生物疫苗有限公司;接種用羊衣原體卵黃囊甲醛滅活疫苗(為試驗苗,批號為201603)、衣原體間接血凝試驗試劑盒(批號為151120)與弓形蟲用間接血凝試驗試劑盒(批號為150520),購自中國農業科學院蘭州獸醫研究所;試驗動物試驗羊為互助縣塘川鎮某專業合作社飼圈養小尾寒羊母羊,全部為產一胎以上經產母羊。

1.2 試驗方法 本研究在青海省互助縣塘川鎮某專業合作社進行,從2016 年3 月2 日至2016 年10月10 日,共218 d。 對試驗母羊在衣原體疫苗免疫前進行內外寄生蟲驅蟲,并注射羊四聯苗(羊快疫,羊猝阻,羊腸毒血癥,羔羊痢疾)、小反芻獸疫疫苗。

1.2.1 分組 采集流產母羊的血清進行衣原體間接血凝試驗,將檢測出的衣原體陽性母羊分為A、B 二個組,其中A 組為試驗組,進行衣原體疫苗注射免疫,B組為對照組,注射生理鹽水,每組50 只,共100 只。

1.2.2 疫苗接種前血清學檢測 (1)樣本采集：采集試驗羊血樣共計100 份,采集后置室溫下,待凝固后用離心機分離血清,待檢;(2)布魯菌病用虎紅平板凝集試劑盒進行檢測,布魯菌病虎紅平板凝集試驗判定標準：+ + + + 凝集塊呈菌叢狀,凝塊間液體明顯清亮;+ + + 凝集反應較強,液體比較清亮;+ +形成較明顯卷邊,凝集塊間液體稍清亮; + 稍能查到凝集,稍有卷邊形成,凝集物間液體呈紅色; -無凝集,呈均勻和粉紅色。 陽性血清用試管凝集試驗進行復檢。 衣原體病用衣原體間接血凝試劑盒進行檢測,判定標準為對照各孔成立,則被撿血清1∶24 孔出現“ + +”以上者為陽性;1∶22 孔出現“ +”以下者為陰性;1∶22 孔“ + +”至1∶24 孔“ +”以下者為可疑。 弓形蟲用間接血凝試劑盒進行檢測,判定標準為被撿血清效價達到或超過1 ∶26 為陽性,“ + +”為陽性終點。

1.2.3 疫苗免疫 從4 月至5 月份對配種25 ～30 d內的A 組50 只試驗母羊全部進行免疫,每只羊肌肉接種羊衣原體卵黃囊甲醛滅活疫苗2 mL,B 組50只對照母羊全部接種2 mL 生理鹽水,免疫后按照本養殖場正常養殖程序進行分組飼養。 自分組飼養開始,記錄各組母羊的妊娠數、流產數、流產率、產羔數、產死羔數、產死胎率,并統計分析。

2 結果

2.1 疫苗接種前血清學檢測 共檢測100 份血清,經檢測,布魯菌病和弓形蟲陽性率均為零,衣原體陽性率為100%,見表1。

表1 疫苗接種前血清學檢測結果

2.2 疫苗接種后結果統計 A 組免疫注射后,母羊的流產、產死胎現象明顯減少,從2016 年6 月至7月份對免疫后母羊調查統計,A 組50 只母羊中,妊娠母羊48 只,妊娠率為96%,48 只妊娠母羊中沒有出現流產現象,流產率為0;B 組50 只母羊中,妊娠母羊49 只,妊娠率為98%,在49 只妊娠母羊流產9只,流產率為18.4%,A 組比B 組流產率降低了18.4%;A 組產羔95 只,死胎2 只,死胎率為2.1%,B 組產羔79 只,死胎24 只,死胎率為30.4%,A 組比B 組死胎率降低了28.3%,見表2。

3 討論

流產衣原體引起的羊地方性流產作為一種重要的人獸共患傳染病,不僅給養羊業造成了相當大的經濟損失,也危及人員健康。 懷孕期的婦女被流產衣原體感染可能會導致嚴重的敗血癥進而發生流產或產下死胎。 作為一種世界性的流行性疫病,羊地方性流產危害嚴重,羊衣原體病的防治工作受到人們的廣泛關注。 因此,探究羊衣原體病的診斷和防治措施對提高羊養殖的經濟效益具有十分重要的意義。

表2 疫苗接種后結果統計

目前對于已經發病的羊只采取措施,主要為添加抗生素進行治療。 根據患病羊體出現癥狀的不同,需要采用不同的治療手段。 針對呼吸道、敗血癥、生殖道感染等癥狀,需要采用復方芐星青霉素3號進行注射,每次注射200 萬IU ～300 萬IU,每天2次,連續注射3 d。 針對衣原體結膜炎癥狀,則需要在飲水和飼料中加入磺胺二甲嘧啶鈉,飲水的混入劑量為1 g/15 ～20 kg·bw,而飼料中是按照1 g/8 ～12 kg·bw 量,進行混飼。 對于呼吸道感染、骨髓炎、關節炎和軟組織感染等癥狀,要按照0.03 mL/kg·bw劑量,注射鹽酸林可霉素,每天2 次,連續3 d[7]。 但是由于抗生素與化學合成藥物在畜牧生產中濫用,飼料中抗菌藥物的添加等,導致病原體出現耐藥性、甚至變異,同時藥物殘留問題也逐漸浮現出來,因此,尋找綠色、高效、有利于生物體健康、有利于環境保護以及提高養殖效益的能夠代替抗生素的新型生物治療制劑迫在眉睫。 作為眾多疫苗的一種,治療性疫苗是指在已感染病原生物或患某些疾病的機體中,可誘導機體產生特異性或非特異性免疫應答,從而達到治療疾病的制品,具有廣泛的應用前景[8]。

從本試驗結果可以看出,衣原體感染母羊引起懷孕后期流產中,除在頭胎中流產外,有少數母羊流產一胎后還會繼續流產數胎,而且在初產羔羊中死胎多,死胎率達到了30.4%,是導致養殖效益低的主要原因。 用羊衣原體卵黃囊甲醛滅活疫苗按每只2 mL 免疫注射后,該疫苗對配種后1 個月內的衣原體陽性母羊有良好的治療效果,母羊流產、死胎現象明顯減少,但是,仍然有流產現象發生,這是否與免疫時間有關(如懷孕前1 個月),因為,感染母羊一旦懷孕,從理論上來說,懷孕胎兒立刻受到衣原體的侵襲,從而導致一定的損傷。 這時候免疫,也許生命力弱的胎兒無法得到很好的免疫治療,最后死亡,導致流產。 另外,眾所周知,獸用疫苗基本用來預防動物疾病的,就當前而言,未見到預防疫苗具有治療效果的相關報道。 因此,羊流產衣原體滅活疫苗是否確有一定的治療效果,還應展開進一步研究,從分子的水平對衣原體滅活疫苗的治療效果進行闡釋。