浙江野生三葉青的規模化組培育苗

三葉青具有活血祛風、抗炎、鎮痛、抗病毒、抗腫瘤等功效，用于治療不明原因的高熱，對各種炎性水腫、肺炎、肝炎、腎炎、癌癥有奇效。在現代中藥上，三葉青直接用于治療外科傷口感染，療效顯而易見。病人在用藥后的24 h內，可見傷口周圍的組織紅腫明顯消退，體溫及局部組織溫度下降，傷口分泌物減少，干燥，結痂，愈合迅速，效果明顯，優于西藥的抗生素，且無副作用，無抗藥性，被稱為“植物抗生素”。

臨床研究已經表明，長期服用三葉青無任何毒副作用，在臨床和民間應用中尚無出現耐藥性，在治療過程中攻補兼施，除了直接的治療作用外，三葉青還可以通過增強人體的細胞免疫和體液免疫，實現免疫系統的防御、自穩、監視功能，及時清除變異細胞，正因為如此，三葉青被越來越多的應用于防腫瘤和抗腫瘤。其藥食兼用性、治療與預防的兩用性更是有利于三葉青的產業化開發。

野生三葉青通常生長于海拔300～1300 m的山坡林下灌叢、山谷溪邊林下巖石縫中。人們受經濟利益的驅使，大量采挖導致野生三葉青數量劇減，在很多自然分布區由原先的隨處可見減少為片狀或零星分布，三葉青野生資源逐漸成為一種瀕危植物。因此，十分必要對野生三葉青資源進行系統整理篩選、馴化與人工培育研究。

基于之前研究的基礎上，選用適應性強、功效成分高的高產優質三葉青品系作為試驗材料，通過系統的對比試驗后提出了適合規模化生產的三葉青組培快繁體系，希望借此解決野生三葉青轉變為栽培種的關鍵技術。

一、外植體的選擇和處理

（一）外植體的選擇

一般選擇無病蟲害、無病毒侵染的，生長健壯的，當年生嫩枝加工外植體。三葉青組培通常以莖尖、帶腋芽的莖段和葉片為外植體，研究證明，三葉青種苗規模化組培生產時以帶腋芽的莖段做外植體為好。

（二）外植體的處理

1.外植體清洗消毒

先將采集的三葉青嫩枝，用柔軟毛刷配合洗滌劑洗去表面塵土，再將其置于水龍頭下以流水沖洗10～20 min，然后在超凈工作臺上進行表面消毒。具體方法是：將外植體嫩枝先放入75%的乙醇溶液中浸泡10 s后，用無菌水洗凈，再放入0.1%HgCl2或2%次氯酸鈉溶液中消毒10～20 min后，用無菌水沖洗3～5次。

2.外植體的切段

取出莖段，置于滅過菌的培養皿中，用濾紙吸干表面水分，在超凈工作臺上，用滅過菌的解剖刀、鑷子將嫩枝均勻切分成大小約0.8～1.0 cm的小段，每段含1個腋芽。腋芽朝上，接種于事先準備好的誘導培養基中，每瓶5～10株。

二、初代培養

（一）培養基

基本培養基為MS培養基。植物激素為：0.3～0.5 mg/L濃度的芐氨基腺嘌呤（6-BA）和 0.01～0.05 mg/L濃度的萘乙酸（NAA）

（二）培養條件

培養溫度為25±2 ℃。前期暗培養，待有芽萌發后光照強度3000～5000 lx培養，每天的光照時間為10～12 h，待組培苗生長滿瓶后再進行增殖培養。

三、增殖培養

（一）增殖培養基

基本培養基為MS培養基。植物激素為：2.0～4.0 mg/L濃度芐氨基腺嘌呤（6-BA）和0.1～0.3 mg/L濃度的萘乙酸（NAA）。

（二）增殖培養條件

培養溫度為25±2 ℃。光照強度3000～5000 lx，每天的光照時間為10～12 h。待組培苗株高長至2 cm，可以將小苗切斷進行生根培養。

四、生根培養

（一）生根培養基

基本培養基為1/2 mS培養基。植物激素為0.5～2.0 mg/L濃度的吲哚丁酸（IBA）。

（二）生根培養條件

培養溫度為25±2 ℃。光照強度3000～5000 lx，每天的光照時間為10～12 h。待組培苗株高長至5 cm，可以將組培苗著手進行煉苗和移植。

五、組培苗移植

（一）基質配制

以70%細泥土+20%泥炭+5%珍珠巖+3%緩釋肥+2%草木灰作移栽基質，總體要求疏松透氣且有一定肥力，將pH值調節為5.5～6.0。

（二）煉苗和栽植

移植前，將培養瓶按批次分層放置在溫室自然散射光下，盡量減少彼此遮光。先封口煉苗3～7 d，然后再開口煉苗3～7 d，開口煉苗時可在培養基表面灑薄薄一層水，最好能將溫度控制在25±4 ℃。

煉苗完成后，繼續加水將培養基打散倒出，用清水仔細將小苗根部附著的培養基清洗干凈后，栽植于72穴穴盤中。根據環境溫度及光照條件，適時選擇將穴盤置于溫室或陰棚下進一步培育壯苗。

六、移栽后的管理

三葉青移栽后的管理內容主要是水分管理及光照和溫度條件控制，同時需注意適當施肥。移栽時澆足水分，以后每2～3 d淋水1次。移植后14～21 d，育苗環境相對濕度控制宜在80%～90%，當第一片新葉完全張開后，降低濕度至60%～70%。移栽28天內，光照強度控制在2000～3000 lx，28天后逐漸增大光照強度至3000～6000 lx。整個育苗期，溫度宜控制在15～30 ℃。

移栽后第28～56 d，每7天噴施液肥1次，通常選擇濃度為0.3%的磷酸二氫鉀肥液。

三葉青苗期病蟲害較少，可通過降低濕度、加強通風、保持生產環境清潔、及時清除病殘株等方法防治病害；可采用殺蟲燈、黏蟲板、防蟲網減輕蟲害。

七、出圃標準

由于各地栽培的三葉青來源地復雜，品種也較多，彼此間生物學特性差異較大，所以三葉青商品苗分級與出圃標準目前難以確定。出于對商品苗在移入大田后能盡快緩苗、快速生長的普遍要求，我們考慮主要從培育時間及生物學性狀兩方面來界定三葉青商品苗的出圃標準。即組培苗移栽培育90天左右，植株生長健壯、根系發達、無病蟲害。新根3條以上，新葉3～5片，葉色翠綠即可出圃。