灘羊12個微衛(wèi)星基因座遺傳多態(tài)性研究

馬麗娜，馬 青，李穎康

（寧夏農(nóng)林科學(xué)院動物科學(xué)研究所，寧夏 銀川 750002）

微衛(wèi)星（microsatellite）一般由大小為2～6 bp的DNA分子組成核心序列，通常重復(fù)10～20次，首尾相接組成短串聯(lián)重復(fù) （short tandem repeat，STR），又稱為簡單序列重復(fù)（simple sequence repeat，SSR）。微衛(wèi)星普遍存在于真核生物的基因組中，平均每10 kb就出現(xiàn)一個STR。微衛(wèi)星因具有數(shù)量多、分布廣、多態(tài)性豐富、呈共顯性遺傳方式以及檢測快速方便等優(yōu)點而備受推崇。筆者以灘羊為研究對象，在參考國內(nèi)地方品種綿羊微衛(wèi)星研究的基礎(chǔ)上，選取12個對灘羊體重有影響的數(shù)量性狀基因座（quantitative trait locus，QTLs），通過分析這些標(biāo)記在灘羊群體中的遺傳變異特征，以期為灘羊種質(zhì)特性研究提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

實驗灘羊51只，來自鹽池灘羊繁育中心核心育種群。用采樣剪剪取羊耳組織塊少許作為試驗材料，放入-20℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 試驗方法

1.2.1 DNA提取：利用磁珠法動物組織基因組DNA提取試劑盒進(jìn)行樣本DNA提取。

1.2.2 微衛(wèi)星標(biāo)記與引物合成：根據(jù)已發(fā)表的綿羊基因組遺傳連鎖圖譜以及綿羊和牛相關(guān)QTLs定位的研究成果，從GenBank數(shù)據(jù)庫中選取綿羊染色體上的12個微衛(wèi)星標(biāo)記，其中，從第1號染色體上選取8個微衛(wèi)星標(biāo)記，分別為：BM6506、BM7145、BMS2263、ILSTS004、MCM58、BMS1636、CSSM004、MCM130；從綿羊第2號染色體上選取4個微衛(wèi)星標(biāo)記，分別為：BL1080、BMS678、ILSTS30、BMS1591。引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成，上游引物用4種熒光染料FAM、ROX、TAMRA和HEX進(jìn)行標(biāo)記，全部標(biāo)記經(jīng)多重PCR反應(yīng)優(yōu)化組合。選取的12個微衛(wèi)星標(biāo)記位點的引物信息見表1。

1.2.3 建立最佳PCR反應(yīng)體系與條件：采用25 μL多重 PCR 反應(yīng)體系，其中，樣本 DNA（50 ng）1 μL，上游……