不同廠家當(dāng)歸配方顆粒與當(dāng)歸飲片的質(zhì)量分析研究

張中華，牟倩倩，張亞會(huì)

甘肅省中醫(yī)院，甘肅 蘭州 730050

當(dāng)歸是最常用的中藥之一，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，為傘形科多年生草本植物當(dāng)歸的干燥根[1]。當(dāng)歸味甘而重，專能補(bǔ)血，為婦科調(diào)經(jīng)補(bǔ)血第一要藥，具有調(diào)經(jīng)止痛、潤(rùn)腸通便、補(bǔ)血活血的功效。當(dāng)歸能調(diào)節(jié)血脂、抗血栓、抑制血小板凝結(jié)，擴(kuò)張血管、降低血壓，抗氧化和清除自由基、增強(qiáng)免疫力，調(diào)節(jié)子宮平滑肌并且能促進(jìn)機(jī)體造血功能。當(dāng)歸的主要成分有酚類、揮發(fā)油、生物堿、當(dāng)歸多糖、有機(jī)酸等，其中分布于有機(jī)酸中的阿魏酸是當(dāng)歸的有效成分之一，由于其屬于水溶性有效成分，可溶于水及醋酸乙脂等溶劑，在制劑過(guò)程中易提取也易破壞，阿魏酸具有抑制膠原和抑制血小板聚集作用[2-6]，所以對(duì)當(dāng)歸及當(dāng)歸配方顆粒中阿魏酸的含量測(cè)定是藥品質(zhì)量控制的重要手段。當(dāng)歸配方顆粒便于管理與貯藏、便于藥師調(diào)配、便于攜帶、免煎易服，也可用于急救用藥，所以在臨床上的使用率逐步提高。本研究對(duì)當(dāng)歸飲片及當(dāng)歸配方顆粒質(zhì)量進(jìn)行分析比較，為臨床合理用藥提供依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器 Waters高效液相色譜儀，Waters 717自動(dòng)進(jìn)樣器，Waters1525泵，Waters 2487雙通道紫外檢測(cè)器(美國(guó)，Waters公司)；FW-400A型萬(wàn)能粉碎機(jī)(北京利偉永興儀器有限公司)；SB-3200DTT型超聲波清洗機(jī)(寧波新芝生物科技股份有限公司)；FA1004型電子分析天平(上海良平儀器儀表有限公司)；CP225D型電子天平(德國(guó)，Sartorius公司)。

1.2 試藥 當(dāng)歸飲片(甘肅省中醫(yī)院藥學(xué)部提供)；當(dāng)歸配方顆粒A、B(不同廠家提供)；阿魏酸對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，供含量測(cè)定用，批號(hào)：110773-200611)；磷酸(優(yōu)級(jí)純，北京益利精細(xì)化學(xué)品有限公司)；乙腈(色譜純，山東禹王實(shí)業(yè)有限公司化工分公司)；水為超純水；甲醇、乙醇均為色譜純；其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱為Waters Symmetry Shield RP-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；檢測(cè)波長(zhǎng)：320 nm；流動(dòng)相：甲醇 -0.5%醋酸溶液(20∶80)；流速：1.0 mL/min，柱溫：室溫；進(jìn)樣量：10 μL[7-9]。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱定對(duì)照品阿魏酸適量，置于50 mL容量瓶中，用流動(dòng)相溶解并定容，制成濃度為0.069 mg/mL的對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備 精密稱定當(dāng)歸飲片粉末6.9 mg及A、B廠家的當(dāng)歸配方顆粒各6.9 mg，置于容量瓶中，精密加入流動(dòng)相溶解并定容至100 mL，密塞，超聲處理30分鐘，提取之后，定容，用0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，即為供試品溶液。

2.4 專屬性 分別取適量阿魏酸對(duì)照品溶液(質(zhì)量濃度為0.069 mg/mL)、當(dāng)歸飲片粉末、當(dāng)歸配方顆粒，加70%甲醇稀釋，超聲破乳，過(guò)0.45 μm微孔濾膜，取濾液按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定[10]。阿魏酸色譜峰峰型良好，溶劑對(duì)樣品測(cè)定無(wú)干擾，見(jiàn)圖1—4。

圖1 阿魏酸對(duì)照品的HPLC圖

圖2 當(dāng)歸飲片中阿魏酸的HPLC圖

圖3 A廠家當(dāng)歸配方顆粒中阿魏酸的HPLC圖

圖4 B廠家當(dāng)歸配方顆粒中阿魏酸的HPLC圖

2.5 線性及其范圍 精密吸取“2.2”項(xiàng)下阿魏酸對(duì)照品溶液 2.0，2.5，3.3，5.0，10.0mL 置于 10 mL 容量瓶中，制成阿魏酸對(duì)照品系列溶液，分別取10 μL，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，測(cè)得峰積分面積。以阿魏酸濃度為橫坐標(biāo)(X)，峰積分面積為縱坐標(biāo)(Y)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得阿魏酸回歸方程為：

Y=2×10-7X+7989.5(r=0.999)

結(jié)果表明在0.013 8～0.069 0 mg/mL范圍內(nèi)阿魏酸濃度與峰積分面積線性關(guān)系良好。

2.6 方法學(xué)考察

2.6.1 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取“2.3”項(xiàng)下供試品溶液，分別于 0、4、8、12、18、24 小時(shí)進(jìn)行測(cè)定，并計(jì)算其RSD為1.26%。結(jié)果表明，供試品溶液在常溫條件下24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2.6.2 精密度實(shí)驗(yàn) 取“2.2”項(xiàng)下阿魏酸對(duì)照品溶液按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，1天進(jìn)樣6次，連續(xù)進(jìn)樣6天，計(jì)算日間與日內(nèi)精密度，結(jié)果表明，日內(nèi)精密度為0.71%，日間精密度為1.25%，均小于2%，表明高效液相色譜法測(cè)定阿魏酸含量，其精密度符合方法學(xué)要求[11-13]。

2.6.3 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 精密稱取已知含量的樣品6份，每份5 mL，分別精密加入同等含量的阿魏酸對(duì)照品溶液，分別加入一定量的阿魏酸對(duì)照品，按供試品制備方法制備供試品6份，進(jìn)樣量10 μL，進(jìn)行 HPLC 測(cè)定[14]，測(cè)得阿魏酸的平均回收率為97.72%，RSD=1.06%(n=6)。表明本法回收率高。

2.7 水分測(cè)定 按照2015版《中華人民共和國(guó)藥典》水分測(cè)定法(通則0832第四法)，分別精密稱定當(dāng)歸飲片粉末及A、B兩個(gè)廠家的配方顆粒各2 g。在圓底燒瓶中放置當(dāng)歸飲片粉末2 g，加入甲苯200 mL，在電熱套中放置圓底燒瓶，緩慢加熱，當(dāng)甲苯沸騰時(shí)，對(duì)溫度進(jìn)行調(diào)節(jié)，每秒餾出2滴，待水分完全餾出，即測(cè)定管刻度部分的水量不再增加時(shí)，用甲苯?jīng)_洗冷凝管內(nèi)部，蒸餾5分鐘，冷卻至常溫，拆卸裝置，若觀察二層管壁存在水滴情況，可用蘸有甲苯的銅絲進(jìn)行相關(guān)操作，對(duì)水量進(jìn)行檢測(cè)[1]。結(jié)果測(cè)得：當(dāng)歸飲片含水量為1.78 mL，百分比為7.0%；A廠家當(dāng)歸配方顆粒含水量為0.9 mL，百分比為3.4%。B廠家當(dāng)歸配方顆粒含水量為0.72 mL，百分比為2.83%；當(dāng)歸飲片中阿魏酸含量為0.052%，符合藥典規(guī)定；A廠家當(dāng)歸配方顆粒中阿魏酸含量為0.034%，B廠家當(dāng)歸配方顆粒中阿魏酸含量為0.021%，A、B兩個(gè)廠家當(dāng)歸配方顆粒中阿魏酸含量均低于當(dāng)歸飲片，且兩個(gè)廠家配方顆粒中阿魏酸的含量存在差異。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)主要以甘肅省中醫(yī)院門(mén)診使用的當(dāng)歸飲片、A、B兩個(gè)不同廠家的當(dāng)歸配方顆粒中主要成分阿魏酸的含量作為考察對(duì)象，所采用的HPLC法中流動(dòng)相的選擇與藥典不同，藥典選擇乙腈-0.085%磷酸梯度完成洗脫，本實(shí)驗(yàn)以甲醇-0.5%醋酸溶液(20∶80)作為流動(dòng)相，得到的色譜圖分離度高，峰形好，無(wú)拖尾現(xiàn)象，色譜干擾峰可清楚分開(kāi)。本實(shí)驗(yàn)測(cè)得的A廠家當(dāng)歸配方顆粒中阿魏酸含量高于B廠家，說(shuō)明A廠家當(dāng)歸配方顆粒質(zhì)量?jī)?yōu)于B廠家。造成當(dāng)歸不同廠家配方顆粒中阿魏酸含量差異的原因是由于企業(yè)之間配方顆粒的生產(chǎn)工藝不統(tǒng)一，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)不一致，添加輔料品種及用量未評(píng)價(jià)等，對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量有一定影響。面對(duì)中藥配方顆粒目前存在的問(wèn)題，相關(guān)部門(mén)應(yīng)進(jìn)一步明確并建立一套中藥配方顆粒規(guī)范化生產(chǎn)和管理的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)體系，加大監(jiān)管力度，以確保藥品質(zhì)量，為臨床用藥的安全性、有效性提供保障。

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