季節對羊同期發情和胚胎移植效果的影響研究

宮旭胤，蘇永生，王 斐，劉立山，姚喜喜

（1.甘肅省農業科學院畜草與綠色農業研究所，甘肅 蘭州 730070；2.甘肅農業大學動物科學技術學院，甘肅 蘭州 730070）

綿羊屬于季節性發情動物，除少數常年發情品種如湖羊、小尾寒羊和陶賽特等之外，大多數的綿羊品種都在短日照的秋冬季發情，春夏季進入乏情期，繁殖活動較弱[1]。綿羊一般為單胎，1胎產羔1只，即使是如邊區萊斯特、東弗里生以及布魯拉美利奴等多胎品種，1胎也只產羔2～3只[1]。因此，將同期發情與胚胎移植技術配合使用，可以充分發揮一些優良綿羊品種的生產潛能，加快綿羊繁殖的速度，提高綿羊的生產水平，具有明顯的經濟效益。

同期發情是綿羊繁殖技術的主要方法之一，它可以使母羊在短時間內集中發情，以便有計劃地組織配種或人工輸精，同時也是胚胎移植的基礎和重要環節[2]。尤其在優良綿羊品種的改良和推廣示范工作中，需要對母羊進行大批同期發情處理，來提高生產效率，從而達到集中移植和產羔的目的。有研究表明，供體和受體發情的同期化直接影響到胚胎移植的成功率[3]，母畜生殖狀況、藥品質量、處理方案的選擇、季節等構成影響綿羊同期發情效果的諸多因素[4]。

胚胎移植技術作為一項新的繁殖技術，為家畜迅速良種化提供了新的途徑[5]。胚胎移植在擴大良種覆蓋率方面有重要作用[6-7]，已廣泛地應用于生產并發揮了巨大的商業價值[8]。影響胚胎移植效果的因素很多，目前對影響移植效果的因素研究多集中在胚胎、受體以及胚胎與受體的相互作用這3個方面[9]，其中胚胎質量和胚齡是影響胚胎移植成功率的重要因素[10-13]。受體對移植成功率的影響因素較多，包括誘導發情方法、發情狀況、外源性激素的處理以及受體年齡和季節等[14-16]。其中季節因素對移植的影響較為復雜，其研究結果不盡一致。有研究表明，在非繁殖季節和繁殖季節時進行綿羊胚胎移植，受體的同期發情效果有差異，妊娠率卻無顯著差異[17]；母羊在春夏季（尤其是2—5月）繁殖活動較秋冬季弱[18]。因此，研究季節因素對受體綿羊同期發情和胚胎移植效果具有重要意義。我們以小尾寒羊為試驗受體，采用放置CIDR結合注射PG、FSH的方法，對供體和受體綿羊分別在冬季和春季進行同期發情處理，并在發情后進行胚胎移植試驗，以期為綿羊冬春季節誘導同期發情、胚胎移植等技術提供應用參考。

1 材料與方法

1.1 供試材料

供體為年齡2～4歲、膘情良好、無明顯產道損傷、無繁殖障礙和其他傳染性疾病的特科賽爾和黑頭薩福克羊，受體為小尾寒羊。試驗藥品有羊用海綿栓CIDR（EAZI-BREED CIDR Sheep and Goat Device新西蘭生產）、PMSG（內蒙古松山獸藥廠生產，1000 IU/瓶）、FSH（寧波市三生藥業有限公司生產）、PG（寧波市三生藥業有限公司生產0.2 mg×10/盒）。

1.2 試驗設計

根據配對試驗設計原則，選擇年齡在2～4歲，膘情良好無明顯產道損傷、無繁殖障礙和其他傳染性疾病的特科賽爾和黑頭薩福克共12只作為供體羊，其中1只薩福克在冬季時有陰道發炎癥狀，故冬季未使用。選擇204只小尾寒羊作為受體羊，第1批冬季處理94只，第2批春季處理110只，由于實驗動物量過大，為減少操作誤差，將試驗組羊只隨機分為I、II和III 3個處理組，各試驗組采用相同的處理條件。

1.3 時間和地點

試驗選擇在冬季（2016年12月27日至2017年1月18日）和春季（2017年3月2日至4月22日）進行。試驗地點位于嘉峪關市新景養殖農民專業合作社，該場地處東經104°12′48″～105°01′06″、北緯 35°17′54″～36°02′40″，海拔 1 850 m，年平均日照時數2 500 h，年平均氣溫6.3℃。

1.4 試驗羊只的飼養管理

試驗母羊均為舍飼飼養，以組單獨組群，專人管理。提供良好的外部環境，供給全價的日糧和清潔的飲水，保持足夠的運動。公羊在配種前除提供全價日糧和清潔飲水外，補飼以適量的胡蘿卜和雞蛋，并進行訓練。所有羊只在處理前均打耳號，采集血樣并做布病檢測。

1.5 同期發情處理方法

同期發情方法如表1所示。對供體羊只和受體羊只處理方法不同，供體羊只為PG＋CIDR栓＋FSH處理組，首次注射PG 0.1 mg后第6天放栓，第17天注射FSH 25 IU并同時去栓，處理組在最后一次注射后連續72 h試情。受體羊只為PG+PMSG處理組，間隔8 d分別注射2次PG 0.1 mg，并在第2次注射同時注射PMSG300 IU。

表1 胚胎移植羊只處理方式

1.6 發情判斷標準

以母羊主動接近公羊鳴叫表現溫順接受爬跨，同時人工觀察母羊陰道口紅腫有黏液流出為母羊發情的判斷標準。

1.7 受體羊黃體觀察及胚胎移植

試驗羊只發情后第7天（發情日為0 d），利用腹腔鏡觀察發情羊卵巢排卵及黃體發育情況[19]，選擇正常排卵并發育為功能黃體的受體小尾寒羊進行胚胎移植，移植所用胚胎無角陶賽特和黑頭薩福克羊從供體體內采集，不同季節按相同的方法處理。

1.8 數據處理與統計分析

所有試驗數據采用Excel進行初步統計，再用SPSS19.0軟件進行t檢驗，分析季節對小尾寒羊同期發情與胚胎移植效果的差異。

2 結果與分析

2.1 季節對母羊同期發情率的影響

采用激素陰道海綿栓法，對供體羊和受體小尾寒羊進行超數排卵同期發情處理。結果表明（表2），冬季供體羊只的發情率為90.9%，顯著高于春季的發情率75.0%（P＜0.05）；冬季受體小尾寒羊的發情率84.0%，顯著高于春季的發情率76.4%（P＜0.05）。

表2 冬春兩季受體羊只的同期發情

2.2 季節對供體母羊超數排卵的影響

由表3可知，季節對供體母羊超數排卵個數、可利用卵子個數及卵子回收率均有不同影響。冬季供體羊只可利用卵子個數高于春季，冬季的卵子回收率85.3%，顯著高于春季的67.4%（P＜0.05）。

表3 冬春兩季受體羊只的超排

2.3 季節對母羊胚胎移植的影響

由表4可知，季節對受體母羊受胎率和繁殖率均有不同的影響。冬季受體小尾寒羊的受胎率為65.0%，與春季的60.0%差異不顯著（P＞0.05）；冬季受體小尾寒羊的繁殖率達到100.0%，顯著高于春季的82.0%（P＜0.05）。

表4 冬春兩季受體羊只的胚胎移植

3 小結與討論

綿羊是短日照季節性多次發情的繁殖家畜，因此，綿羊的繁殖季節一般為9—11月[19]。本試驗分別于2016年12月和2017年4月對小尾寒羊作為受體進行發情同期化處理，結果表明，冬季供體羊只的發情率為90.9%，顯著高于春季的75.0%；冬季受體羊的發情率為84.0%，顯著高于春季的76.4%。說明胚胎移植供體同期發情處理在冬春兩季均可進行，無論供體和受體，均表現出冬季發情率顯著高于春季，其中小尾寒羊在冬季的同期發情率顯著高于春季的結果與李煥玲等[20]和 Mitchell等[21]等報道的一致。

研究表明，綿羊的季節性生殖特性會影響到在不同季節進行的同期發情和超排效果[21]。在冬季發情季節，卵巢上卵泡在內環境各種激素協調作用下呈現周期性發育，因此超排效果較好，可以得到較高的排卵數。本研究表明，冬季供體羊只可利用卵子個數多于春季，冬季卵子回收率85.3%，顯著高于春季的67.4%，這與文獻報道一致。

目前有關胚胎移植季節和受胎率之間的關系文獻報道較多，如昭通綿羊在秋冬季移植的妊娠率顯著高于春季[21-22]，秋季移植的妊娠率（68.6%）顯著高于春季（58.5%）[22]，秋冬季移植的羊羔率比在春季的要高[23]，與本研究冬季受體小尾寒羊的受胎率65.0%和春季受體小尾寒羊的受胎率60.0%差異不顯著；冬季受體小尾寒羊的繁殖率達到100.0%，顯著高于春季的82.0%的結果一致。

綜上所述，季節對供體、受體（小尾寒羊）同期發情率均有顯著影響，且冬季發情率高于春季；冬季供體羊只可利用卵子個數高于春季可利用卵子個數，冬季卵子回收率85.3%顯著高于春季的卵子回收率67.4%。季節對冬春季小尾寒羊的受胎率沒有顯著影響，冬季受體小尾寒羊的繁殖率100.0%顯著高于春季受體小尾寒羊的發情率82.0%。

參考文獻：

[1]易金云.季節與品種對綿羊超數排卵的影響[D].蘭州：甘肅農業大學，2005.

[2] 李秋艷，閻鳳祥，侯 健，等.不同因素對綿羊同期發情的影響[J]. 畜牧與獸醫，2008（12）：48-50.

[3]ROWSON L E A，MOORE R M.Embryo transfer in sheep：the significance of synchronizing oestrus in the sonor and recipient animal[J].J.Reprod.Fertil.，1986，11（7）：207-212.

[4]桑潤滋.動物繁殖生物技術[M].北京：中國農業出版社，2006.

[5]徐 君.在繁殖季節與非繁殖季節以小尾寒羊為受體進行冷凍胚胎移植的對比試驗[J].中國畜牧獸醫，2007（34）：139-140.

[6]THIBIER M，NIBART M.Clinical aspects of embryo transfer in some demestic farm animals[J].Anim.Rep.Sci.，1992（28）：139-148.

[7] SMITH C.Use of embryo transfer in genetic improvement of sheep[J].Anim.Reprod.，1986（42）：81-88.

[8]COGNIE Y.State of the art in sheep-goat embryo transfer[J].Theriogenology，1999（51）：105-116.

[9]SPELL A R， BEAL W E， CORAH L R，et al.Evaluation recipient and embryo factors that affect pregnancy rates of embryo transfer in beef cattle[J].Theriogenology，2001（56）：287-297.

[10]QI M Y，LI W.Study on the embryo transfer in nonbreeding season with imported sheep embryos[J].China Herbiv，2003，23（6）：17-18.

[11]BARI F， KHALID M， HARESIGN W，et al.Factors affecting the survival of sheep embryos after transfer within a MOET program[J].Theriogenology，2003（59）：1265-1275.

[12]王永軍，田秀娥，陳玉林，等.胚齡對Dorper羊冷凍胚胎移植效果的影響研究[J].中國農業科學通報，2003，19（5）：10-11.

[13]SLAVIK T，FULKA J，GOLL I.Pregnancy rate after the transfer of sheep embryos originated from randomly chosed oocytes matured and fertilized in vitro[J].Theriogenology，1992（38）：749-756.

[14]趙 霞，達 來，阿拉坦沙.不同誘導發情對胚胎移植產羔率的影響[J]. 中國草食動物，2003，23（2）：6-7.

[15]和力新，曹 冶，李 紅，等.不同品種受體羊對胚胎移植后代生長發育的影響[J].西南農業學報，2004，17（3）：386-389.

[16]WEI ZHANG，JIANHUA SUN，LIXIA PEI，et al.Systematic review of acupuncture for functional constipation[J].Journal of Acupuncture and Tuina Science，2014（12）：89-95.

[17]丁 威，李 武.繁殖與非繁殖季節綿羊冷凍胚胎移植結果的比較[J].湖北畜牧獸醫，2004（3）：23-24.

[18]LASSOUED N，REKIK M，KHENISSI S，et al.Seasonality of oestrus，ovulation and ovulation rate of Sicilo Sarde sheep[J].Journal of Animal Physiology and Animal Nutrition，2014，98（4）：686-692.

[19]王家貴.不同條件綿羊同期發情效果研究[D].蘭州：甘肅農業大學，2007.

[20]李煥玲，王立銘，王金文，等.季節對綿羊冷凍胚胎移植效果的影響[J].當代畜牧，2004（5）：37-38.

[21]MITCHELL L M， DINGWALL W S， MYLNE M J A，et al.Season affects character istics of preovulatory LHsurge and embryo viability in superovulated ewes[J].Anim.Rep.Sci.，2002（74）：163-174.

[22]吳曉東，蘇 雷，和協超，等.受體品種、體重及移植季節對杜泊羊胚胎妊娠率和新生羔羊體重的影響[J]. 動物學研究，2005，26（6）：627-631.

[23]CHAGAS E SILVA J，LOPES DA COSTA L，CIDADAO R，et al.Plasma progesterone profiles，ovulation rate，donor embryo yield and recipient embryo survival in native Saloia sheep in the fall and spring breeding seasons[J].Therigenology，2003（60）：521-532.