雌激素受體β表達評估老年直腸癌術后放化療療效的價值

吳 陽 居 培 余紅民

(徐州醫學院附屬醫院放療科，江蘇 徐州 221002)

結直腸癌好發于中老年人群，是我國常見消化系統惡性腫瘤之一〔1〕。近年來,隨著人民生活水平的不斷提高,飲食習慣和飲食結構的改變及人口的老齡化,我國結直腸癌的發病率和死亡率均保持上升趨勢，且大多數患者發現時已屬中晚期〔2〕。在結直腸癌構成中，直腸癌約占60%〔3〕。術后放化療為Ⅱ ～Ⅲ期直腸癌的標準治療手段〔4〕。雌激素受體(ER)有2種形式：ERα和ERβ。在結直腸癌細胞株中ERα亞型不表達,而ERβ亞型高表達〔5〕,ERβ在結直腸癌中即使少量表達，也能起到保護效應，而ERα的生理作用與ERβ相反〔6〕。本文探討ERβ表達預測老年Ⅱ ～Ⅲ期直腸癌術后放化療療效的價值。

1 資料及方法

1.1一般資料 對2008年10月至2012年2月于徐州醫學院附屬醫院放療科接受序貫放化療的54例Ⅱ、Ⅲ期直腸癌根治術(Miles或Dixon)術后患者的臨床資料進行回顧性分析，年齡60～80(中位68)歲，男30例，女24例。

1.2術后放化療方案 2組患者術后輔助治療開始的時間為術后3～8 w，放療采用調強放療，體膜固定，經螺旋CT 定位機5 mm 層厚連續掃描，將影像學信息數據傳輸至Eclipes 治療計劃系統，靶區范圍根據直腸癌靶區勾畫指南〔7〕，臨床靶區包括直腸系膜區加吻合口加骶前加髂內血管周圍淋巴引流區，計劃靶區為臨床靶體積外放1 cm。如為Dixon 保肛手術后，則下界在閉孔下緣；如為Miles 術，則下界在原肛門口水平。照射總劑量為45～50 Gy/25～28次/5～5.5 w，每次1.8～2.0 Gy。輔助化療方案分別按照標準XELOX 和FOLFOX 方案進行，周期數4～6個。

1.3免疫組化法檢測ERβ表達 石蠟切片，常規脫蠟至水。蒸餾水洗滌，5 min×3次。3%過氧化氫(甲醇配)室溫10 min，以阻斷內源性氧化酶。再蒸餾水洗滌，5 min×3次。置于0.01 mol/L檸檬酸緩沖液(pH 6.0)中微波爐高火預熱3 min，低火保溫5 min，共2次，自然冷卻，作抗原修復。TBS洗滌，5 min×3次。正常小牛血清1∶20，37℃水浴20 min，以阻斷非特異性結合。仔細吸干血清，滴加一抗，抗體稀釋度均為1∶50，不加一抗為陰性對照。37℃水浴1 h。TBS 洗滌，5 min×3次。滴加EnVision試劑,37℃水浴1 h。TBS 洗滌,5 min×3次。二氨基聯苯胺(DAB)室溫顯色10 min或在顯微鏡下觀察至棕黃色反應后終止。流水洗10 min。蘇木素復染細胞核，鹽酸乙醇分化、藍化。遞增梯度乙醇脫水1 min，二甲苯1 min，常規樹脂封片。陽性信號:癌細胞的細胞質和(或)細胞核出現棕黃色顆粒。陽性判斷標準：光鏡下用10×10的視野觀察整張切片，如陽性癌細胞數占全部癌細胞總數的10%以上，則判為陽性。10.0%～50.0%為(+)， 50.1%～75.0%為()，75.0%以上為()。

1.4監測及隨訪 入院后完善相關理化檢查，如血常規、肝腎功、心電圖、胸腹部及盆腔MRI/CT等，評估患者病情及放化療耐受性。每周行血常規、肝腎功等血液學檢查，監測并及時處理放療期間不良反應。治療結束后隨訪：全部病例進行3年隨訪，時間從手術開始起，截至2015年3月1日。采用電話、信訪及門診隨診等方式進行隨訪，隨訪終點為死亡。隨訪內容為患者的一般情況、有無毒副反應發生、進行過何種治療、有無腫瘤局部復發、復發的時間及部位、有無遠處轉移、遠處轉移的時間及部位，復發轉移后的治療、生存情況及死亡時間、死亡原因等。其中1例失訪，隨訪率98.1%。

1.5觀察指標 總生存率(OS)、無病生存率(DFS)。不良反應發生率(%)=至少發生一個不良反應的例數/評價安全性人數×100%。

1.6統計學方法 采用SPSS17.0軟件進行Mamm-WhiteyU及χ2檢驗。應用Kaplan-Meier生存曲線和Logranktest檢驗比較兩組OS及DFS。

2 結 果

2.1ERβ不同表達組臨床資料比較 ERβ陽性組與ERβ陰性組性別、年齡、手術方式、病理類型、腫瘤分化程度及TNM分期差異均無統計學意義(P>0.05)，見表1。

2.2ERβ不同表達組不良反應發生率比較 ERβ陽性組與ERβ陰性組中放射性直腸炎、放射性膀胱炎、骨髓抑制和胃腸道反應發生率比較差異無統計學意義(P<0.05)，見表2。治療期間，不良反應經對癥處理后均可以逐漸恢復，不影響治療，無不良反應相關死亡。

表1 ERβ不同表達組臨床資料比較(n)

表2 ERβ不同表達組不良反應發生率比較(n)

2.3療效評價 ERβ陽性組3年OS(86.1%)與ERβ陰性組差異無統計學意義(77.8%，χ2=0.390，P=0.532)，但二條生存曲線有分開的趨勢，其結果仍需進一步隨訪，見圖1。ERβ陽性組3年DFS(72.2%)與ERβ陰性組差異無統計學意義(55.6%，χ2=2.000，P=0.157)。ERβ陽性組3年局部復發率(16.7%)較ERβ陰性組明顯降低，差異有統計學意義(33.3%，χ2=5.120，P=0.024)。ERβ陽性組3年遠處轉移率(22.2%)較ERβ陰性組明顯降低(38.9%)，差異有統計學意義(χ2=4.738,P=0.030)。

圖1 兩組總生存率的比較

3 討 論

ERα和ERβ在多途徑發揮著相反的作用：ERα在促進生長和增殖方面起著重要作用；而ERβ起著抗增殖、分化和促進凋亡的作用〔8〕。研究顯示ERβ在抑制腫瘤方面起著十分重要的作用，而干擾ERα信號通路卻顯示無作用，例如，ERβ對鼠結腸癌的保護作用〔9〕；ERβ能夠激活結腸癌細胞系中抗炎信號網絡的作用〔10〕；ERβ在腫瘤體積比較大和分期比較晚的病人中的表達明顯降低〔11〕等。除此之外，ERβ可作為發生結直腸癌危險的潛在生物標志物〔12〕，也可作為治療有效性的監測指標，例如有報道稱激素治療對ERβ陽性的結直腸癌患者有效，而對ERβ陰性的患者卻無效〔13,14〕。本實驗結果顯示，ERβ可作為預測老年直腸癌術后3年局部復發率和遠處轉移率的有效指標，即ERβ可作為預測老年直腸癌術后放化療療效的指標，可改善患者的預后。

1馮 莉，王貴英.老年晚期結直腸癌患者腫瘤組織胸苷酸合成酶表達與氟尿嘧啶敏感性、副反應及預后的關系〔J〕.中國老年學雜志,2015;35(6):1474-6.

2何振華,張 森.結直腸癌NCCN、NICE指南及中國衛生部診療規范的比較〔J〕.世界華人消化雜志,2013;21(14):1297-302.

3Wong RK,Berry S,Spithorff K,etal.Preoperative or postoperative therapy for stageⅡor Ⅲ rectal cancer:all updated practice guideline〔J〕.Clin Oncol(R Coll Radiol),2010;22(4):265-71.

4任 驊，金 晶，王 鑫，等.術前同步放化療是直腸癌標準治療模式〔J〕.實用腫瘤雜志,2013;28(1):20-3.

5朱 冰,張傳珉.雌激素受體和孕激素受體與結直腸癌預后關系的研究進展〔J〕.醫學綜述,2008;14(21):3236-8.

6Galluzzo P,Caiazza F,Moreno S,etal.Role of ERbeta palmitoylation in the inhibition of human colon cancer cell proliferation〔J〕.Endocr Relat Cancer,2007;14(1):153-67.

7Roels S,Duthoy W,Haustermans K,etal.Definition and delineation of the clinical target volume for rectal cancer〔J〕.Int J Radiat Oncol Biol Phys,2006;65(4):1129-42.

8Dey P,Barros RP,Warner M,etal.Insight into the mechanisms of action of estrogen receptor β in the breast,prostate,colon,and CNS〔J〕.J Mol Endocrinol,2013;51(3):T61-74.

9Saleiro D,Murillo G,Lubahn DB,etal.Enhanced induction of mucin-depleted foci in estrogen receptor {beta} knockout mice〔J〕.Cancer Prev Res(Phila),2010;3(9):1198-204.

10Edvardsson K,Str?m A,Jonsson P,etal.Estrogen receptor β induces antiinflammatory and antitumorigenic networks in colon cancer cells〔J〕.Mol Endocrinol,2011;25(6):969-79.

11Rudolph A,Toth C,Hoffmeister M,etal.Expression of oestrogen receptor β and prognosis of colorectal cancer〔J〕.Br J Cancer,2012;107(5):831-9.

12Principi M,Di Leo A,Pricci M,etal.Phytoestrogens/insoluble fibers and colonic estrogen receptor β: randomized,double-blind,placebo-controlled study〔J〕.World J Gastroenterol,2013;19(27):4325-33.

13Rudolph A,Toth C,Hoffmeister M,etal.Colorectal cancer risk associated with hormone use varies by expression of estrogen receptor-β〔J〕.Cancer Res,2013;73(11):3306-15.

14Caiazza F,Ryan EJ,Doherty G,etal.Estrogen receptors and their implications in colorectal carcinogenesis〔J〕.Front Oncol,2015;5:19.