通絡玉液湯對糖尿病大鼠大動脈管壁保護作用的機制

于春濤 胡 慶 楊麗軍 張山起

(滄州醫學高等專科學校，河北 滄州 061001)

糖尿病是引起動脈粥樣硬化的主要原因之一，據文獻報道，在40歲以上人群中病程5年以上的2型糖尿病患者并發血管病變達90.8%，并發血管病的發病率是非糖尿病患者的20倍〔1〕。糖尿病血管病變，即在糖尿病狀態下的血管重構，是糖尿病心腦血管并發癥的主要病理學基礎，其發病機制尚未完全明了，臨床治療也沒有有效的方法，本研究探討通絡玉液湯對糖尿病大鼠大動脈管壁保護作用的機制。

1 材料和方法

1.1臨床材料 清潔級健康SD大鼠72只，體重170～190 g〔(購自天津軍事醫學科學院，編號：SCXX-(軍)2009-003)〕。隨機分為正常對照4、8 w組；糖尿病4、8 w組；通絡玉液湯4、8 w組，每組12只。

1.2藥物與試劑 通絡玉液湯：生曬參8 g，生黃芪30 g，生山藥20 g，麥冬15 g，知母10 g，花粉10 g，葛根10 g，五味子9 g，雞內金6 g，丹參15 g，當歸尾15 g，地龍8 g。以上中藥均購自滄州同仁堂藥店。將所購中藥飲片浸泡，水煎煮30 min，過濾；再加水煎煮30 min，過濾，兩次濾液合并，并濃縮成100%的液體(每毫升含原方生藥1.7 g)，4℃冰箱保存備用。

1.3動物模型建立 大鼠適應性飼養1 w后，隨機選取正常大鼠24只，其中12只為正常對照4 w組，另12只作為對照8 w組，普通飼料喂養；其余48只作為造模組給予高糖高脂飼料(20%蔗糖、10%豬油、2.5%膽固醇和67.5%基礎飼料)分籠喂養4 w。第5周造模組大鼠禁食12 h，給予一次性腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ，購自Sigma公司)30 mg/kg(將STZ溶于0.1 mol/L，pH4.4的檸檬酸緩沖液中，終濃度為2%，在冰水中進行，現配現用，5 min內用完)。注射72 h后采集尾尖血(禁食12 h)，檢測血糖，濃度>16.7 mmol/L確定為2型糖尿病模型；正常對照組僅給予等量檸檬酸鈉緩沖液(pH4.4)腹腔注射。將符合2型糖尿病標準的大鼠，分籠繼續原飼料喂養，自由飲水。6 w后即成糖尿病血管病變模型，模型大鼠均以原飼料再繼續喂養4 w和8 w。

1.4藥物干預 將血管病變模型大鼠分組后分別開始給予藥物干預：通絡玉液湯組灌服通絡玉液湯，劑量為17 g·kg-1·d-1；正常對照組和糖尿病組每日灌服相應劑量的生理鹽水，每周根據大鼠體重及飼料消耗來調整藥物劑量。

1.5血管內皮生長因子(VEGF)、腫瘤壞死因子(TNF)-α、血糖、血脂檢測 禁食12 h后，給予10%水合氯醛0.3 ml/100 g腹腔注射麻醉，于頸總動脈取血，其中4 ml靜置、分離血清，雙抗夾心酶聯免疫吸附法(ELISA)定量測血清VEGF、TNF-α(ELISA試劑盒購自上海建寧生物科技公司)，實驗嚴格按照試劑盒說明書操作。其余血液用強生快速血糖儀檢測血糖(GLU)，奧林巴斯AU400全自動生化分析儀測血脂〔三酰甘油(TG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)〕。

1.6數據處理 應用SPSS13.0軟件進行t檢驗。

2 結 果

2.1各組血液指標變化 糖尿病4、8 w組GLU、TG、LDL-C、TC水平明顯高于正常對照組，HDL-C水平明顯低于正常對照組(P<0.01)；糖尿病8 w組GLU、TC水平明顯高于糖尿病4 w組，TG、HDL-C水平明顯低于糖尿病4 w組(P<0.01)；通絡玉液湯4、8 w組GLU、TG、LDL-C、TC水平明顯低于同時間糖尿病組(P<0.01,P<0.05)，HDL-C水平明顯高于同時間糖尿病組(P<0.01)。見表1。

表1 各組生化指標

與正常對照組比較：1)P<0.01；與糖尿病4 w組比較：2)P<0.01；與糖尿病4、8 w組比較：3)P<0.05；4)P<0.01

2.2各組血清VEGF、TNF-α比較 糖尿病4、8 w組血清VEGF、TNF-α水平均明顯高于正常對照組(P<0.01)，且與時間無關；通絡玉液湯4 w、8 w組血清VEGF、TNF-α水平均明顯低于糖尿病組(P<0.01)，與正常對照組差異無統計學意義(P>0.05)，且與用藥時間無關，見表2。

表2 各組血清VEGF、TNF-α比較

與正常對照組比較:1)P<0.01；與糖尿病組比較:2)P<0.01

3 討 論

本實驗所用通絡玉液湯是在玉液湯和生脈散的基礎上加減化裁而來，玉液湯記載于《醫學衷中參西錄》，由清代著名醫家張錫純創立，具益氣滋陰、固腎止渴之功。現代廣泛應用于糖尿病、高血壓等疾病。但對糖尿病血管病變的療效未見報道。生脈散出自《醫學啟源》，是治療氣陰兩虛證的常用方，近年來常用于治療心血管病變等屬于氣陰兩虛者。針對糖尿病血管病變氣陰兩虛，瘀血阻絡的病機，本實驗利用通絡玉液湯，行益氣養陰、活血通絡之功，達到了治療糖尿病血管損傷的作用。

VEGF在生理條件下，VEGF表達量很低，以維持機體內正常的血管生長、保持血管密度的生理穩定。可特異性地促進血管內皮細胞的有絲分裂，促進血管內皮細胞的生長、遷移。通過與細胞表面相應受體結合，激活胞內的信號轉導途徑，活化血管平滑肌細胞，并能促進炎性細胞在血管壁的黏附；增強血管通透性，引起血漿蛋白滲漏、血管壁水腫、炎癥細胞的浸潤，進而加重動脈粥樣硬化〔2〕，其水平升高是平滑肌增生、內皮細胞損傷及功能紊亂的重要標志物〔3〕。

TNF-α在炎癥和動脈粥樣硬化過程中起重要作用〔4〕。①TNF-α對血管內皮細胞具有直接的細胞毒作用〔5〕；②大量的TNF-α會損傷機體，除損傷血管內皮細胞外，更重要的是可以放大炎性反應，刺激C反應蛋白等合成，加重炎性反應。TNF-α可加重局部缺血，促進血栓的形成，還通過上調黏附分子、一氧化氮和氧自由基引起組織損傷。TNF-α通過細胞間黏附分子1及E-選擇素等黏附因子向內皮細胞表面聚集、黏附及滲出，加重炎性反應〔6〕；③TNF-α促進特異性細胞損傷蛋白的表達，例如醛糖還原酶、蛋白激酶C、有絲分裂激活蛋白激酶、誘導性一氧化氮合酶等〔7〕；④TNF-α是炎性介質連鎖反應中最早的啟動因子，濃度升高則可促進IL-6等炎性因子的合成和分泌，擴大級聯反應，加速了糖尿病的發生發展〔8〕；⑤TNF-α可能參與內皮細胞自噬進而誘導炎癥反應，還可以直接促進血管平滑肌細胞的分裂增殖〔9〕。長期的高血糖、血脂可直接抑制血管內皮細胞DNA合成和有絲分裂，增加細胞凋亡，延緩內皮細胞增殖，導致血管內皮損傷〔10〕。通絡玉液湯可通過降低血糖、血脂、VEGF、TNF-α對血管壁內皮細胞、平滑肌發揮保護作用，同時也延緩了動脈硬化的發生和發展。

1楊維娜，王 璇，藍 茜，等.2型糖尿病并發周圍血管病變的臨床流行病學分析〔J〕.西安交通大學學報:醫學版，2013;34(1)：73-6.

2王婉秋，孫 侃，靳 瑾，等.2 型糖尿病性動脈粥樣硬化大鼠血漿 VEGF、TGF-β1、CTRP3 的表達及辛伐他汀的干預作用〔J〕.天津醫藥，2015;43(4)：370-4.

3張月華，周嘉強.老年2型糖尿病白細胞介素-6、C-反應蛋白、血管內皮生長因子與大血管病變的相關性〔J〕.中國老年學雜志，2015;35(20)：5796-7.

4劉才華.2型糖尿病病人血清TNF-α、瘦素及抵抗素水平與心腦血管并發癥相關性〔J〕.青島大學醫學院學報，2014;50(2)：136-8.

5Wu S,Xu H, Peng JY,etal.Potent anti-inflammatory effect of dioscin mediated by suppression of TNF-α-induced VCAM-1,ICAM-1 and EL expression via the NF-κB pathway〔J〕.Biochimie,2015;110:62-72.

6王先坤，王秉鈞，李培武，等.急性胰腺炎患者血清白細胞介素6和腫瘤壞死因子α的改變與病情的關系〔J〕.醫學綜述，2014;20(24)：4575-6.

7羅 瑋.腫瘤壞死因子α與2型糖尿病患者神經病變的相關性〔J〕.中國老年學雜志，2014;34(13)：3619-21.

8范 穎，李 新.黃芪部分有效部位對糖尿病模型大鼠氧化應激的影響及其交互關系〔J〕.中華中醫藥雜志，2014;29(11)：3432-6.

9Qi LI,Zhi JI,Zhang T,etal.Inhibition of microRNA-25 by tumor necrosis factor α is critical in the modulation of vascular smooth muscle cell proliferation〔J〕.Mol Med Rep,2015;11(6):4353-8.

10孫衛華，張曉梅，李曉麗，等.Hcy、CysC和VEGF與2型糖尿病微血管病變的關系研究〔J〕.中華全科醫學，2015;12(10)：1547-9.