不同處理方法對透骨香種子萌發的影響

2018-05-14 08:59:54劉紹歡何晶晶詹云慧樊天珺黃哲王世清

安徽農業科學 2018年33期

劉紹歡何晶晶詹云慧樊天珺黃哲王世清

摘要?[目的]采用不同濃度試劑對透骨香種子進行浸種處理，篩選出透骨香種子在此條件下發芽的最佳條件。[方法]采用不同濃度的C2H5OH、NaOH、KMnO4、GA3、NaCl對透骨香種子分別浸種30、60、90、120 min，采用培養皿發芽試驗，以發芽勢、發芽率以及發芽指數3個指標對不同處理進行評價。[結果]不同處理方法處理后的透骨香種子的發芽率均在80%以上，且發芽勢、發芽指數相比對照組明顯提高。其中用10 mg/mL NaOH 浸種60 min的種子發芽勢、發芽率均最高，分別為85%、96%，發芽指數為184.90，與對照組相比分別提高55.5、31百分點和105.63;而GA3對透骨香種子初期有一定的抑制作用，發芽勢均比對照組小。[結論]透骨香種子育苗最佳處理方式為10 mg/mL NaOH浸種60 min。

關鍵詞?透骨香;發芽率;發芽勢;發芽指數

中圖分類號?S567文獻標識碼?A文章編號?0517-6611（2018）33-0025-03

透骨香作為貴州常用苗族藥之一，為杜鵑花科植物滇白珠Gaultheria yunnanensis（Franch.）Rehd 的干燥全株或根[1-2]，具有清熱解毒、活血祛瘀、祛風除濕、降氣平喘的功效，在治療肌肉酸痛及跌打損傷、軟組織傷、風濕病、踝扭傷、腰椎骨質增生、腰膝疼痛、風濕痹痛等方面具有顯著作用[3-4]。

目前，在貴州以透骨香為主要原料的民族成方制劑有：“痹痛寧膠囊（金骨蓮膠囊）”[4]、“復方透骨香藥乳” [5]、“清痹通絡藥酒” [5]等。該藥材及制劑為貴州省中藥現代化及經濟發展帶來了效益。但是《貴州省中藥材、民族藥材質量標準》（2003 年版）及有關透骨香的研究文獻中僅見其藥性記載、藥材鑒定、藥理及毒理作用、化學成分與含量測定及臨床使用效果等報道。但筆者查閱文獻發現國內外罕見有關于透骨香藥材人工栽培相關技術的研究，且隨著對其化學成分[6-8]、藥理及臨床研究[9-10]的逐步深入，其臨床使用越來越廣，該藥材的來源也越來越重要，因此，將其由野生變為家種，建立規范化種植，從而更好地控制其藥材質量，真正做到“藥材好，藥才好”。

該試驗擬通過研究不同濃度的C2H5OH、NaOH、KMnO4、NaCl、GA3 5種試劑在不同時間處理下[11-16]對透骨香種子發芽勢、發芽率、發芽指數的影響，以選出試驗所需的最優處理條件，為下一步工作提供參考。

1?材料與方法

1.1?試驗材料

供試用種子來自貴州省花溪區高坡鄉，經筆者鑒定均為杜鵑花科的透骨香[Gaultheria yunnanensis（Franch.）Rehd.]的果實（含種子），連同蒴果自然風干后裝袋備用。

1.2?種子選定

隨機選定飽滿的種子進行試驗。

1.3?儀器與試劑

供試儀器：AL204型電子分析天平（梅特勒-托利多儀器）;供試試劑：95%乙醇（20150202成都金山化學試劑有限公司）、氫氧化鈉（080603成都金山化學試劑有限公司）、高錳酸鉀（20141213重慶川東化工有限公司）、氯化鈉（20151219重慶江川化工（集團）有限公司）、赤霉素（150418上海宇涵生物科技有限公司）。

1.4?試驗方法

用不同濃度的C2H5OH（10%、30%、50%、70%、90%）、NaOH（10、30、50、70、90、110 mg/mL）、KMnO4（0.1、0.3、0.5、0.7、0.9、1.1 mg/mL）、GA3（100、300、500、700、900、1 100 mg/mL）、NaCl（10、30、50、70、90、110 mg/mL）分別浸種30、60、90、120 min處理透骨香種子。用蒸餾水處理作為對照，每組100粒種子。

發芽床采用直徑9 cm的培養皿，內鋪一層濾紙，上蓋皿蓋保濕。置于室溫條件下培養。每天定時觀察種子發芽情況，并補充相應水分使濾紙保持濕潤，種子露白時開始計數，統計不同試劑、濃度、浸種時間下的累計發芽數、發芽勢、發芽指數，直到連續3 d不再發出新芽，停止計數，從發芽到不再長出新芽，一共記錄43 d數據。

1.5?觀測指標

以發芽后第10天作發芽勢計算，第34天作發芽率計算，10～34 d作發芽指數計算。所得數據用SPSS 21.0、Excel數據軟件分析。其中對照組發芽勢為29.5%，發芽率為65%，發芽指數為79.27。發芽勢、發芽率、發芽指數的計算公式如下：

n34為發芽第34天的正常發芽的粒數，

Gt為相應各日的正常發芽數，Dt為置床之日的天數。

2?結果與分析

2.1?不同濃度C2H5OH溶液、不同處理時間對透骨香種子發芽率的影響

由表1可知，經C2H5OH溶液處理的透骨香種子，發芽率大多得到提升，在低濃度中，僅10%浸種60 min和30%浸種30 min的發芽率比對照組低，但90%浸種對種子發芽率全呈抑制狀態。在用30%浸種60 min，50%、70%浸種90 min，10%浸種120 min時，其發芽勢、發芽率、發芽指數均比對照組高，其中50%浸種90 min發芽率最高，其發芽勢、發芽率和發芽指數分別為33%、90%、93.66，與對照組相比，分別提高了3.5、25百分點，發芽指數提高14.39。

由SPSS分析發現，各處理組對發芽勢、發芽率、發芽指數影響Sig.值均為0.00，極具顯著性差異影響;發芽勢、發芽率、發芽指數變化呈近似正相關，整齊度好。

2.2?不同濃度NaOH溶液、不同處理時間對透骨香種子發芽率的影響

由表2可知，經NaOH溶液處理的透骨香種子，低濃度（10、30 mg/mL）對種子萌發具明顯促進作用，用10 mg/mL浸種60、90、120 min，30 mg/mL浸種30、60、90 min，50 mg/mL浸種30 min時，發芽勢、發芽率、發芽指數均明顯增大，其中以10 mg/mL浸種60 min發芽最好，發芽勢、發芽率、發芽指數分別為85%、96%、184.90，與對照組相比，分別提高了55.5、31百分點，發芽指數提高105.63。但隨著NaOH溶液濃度增大，出現抑制萌發的情況，如在濃度50 mg/mL浸種90 min時，發芽率才4%，且幼苗后期有死亡現象。

SPSS數據分析可見，濃度對發芽勢、發芽率、發芽指數極具顯著性差異影響，浸種時間對發芽率極具顯著性差異影響，對發芽勢、發芽指數沒有明顯差異影響;種子發芽率、發芽勢、發芽指數在NaOH處理下變化呈正相關，整齊度好。

2.3?不同濃度KMnO4溶液、不同處理時間對透骨香種子發芽率的影響

由表3可知，經KMnO4溶液處理的透骨香種子，發芽率總體比對照組高，僅3組發芽率比對照組低，幼苗死亡情況不明顯，且在高濃度時發芽率相對低濃度要好，其用0.50 mg/mL浸種30 min，0.70 mg/mL浸種90 min，1.10 mg/mL浸種60 min時，發芽勢、發芽率、發芽指數相比對照組均明顯提高;在0.50 mg/mL浸種30 min時，發芽率最好，發芽勢、發芽率、發芽指數分別為51%、87%、112.93，與對照組相比，分別提高了21.5、22百分點，發芽指數提高33.66。

由SPSS進行分析發現，濃度對發芽勢、發芽率、發芽指數及浸種時間對發芽勢、發芽指數均不具顯著性差異影響，浸種時間對發芽率極具顯著性差異影響;種子發芽率、發芽勢、發芽指數變化成近似正相關，整齊度較好。

2.4?不同濃度NaCl溶液、不同處理時間對透骨香種子發芽率的影響

由表4可知，經NaCl溶液處理的透骨香種子，發芽率大多得到提高，在30 mg/mL浸種30 min時，發芽率最高，發芽率、發芽指數為84%、96.04，與對照組相比，發芽率提高了19百分點，發芽指數提高16.77，但發芽勢降低為26%。

由SPSS進行分析可知，濃度對發芽勢、發芽率、發芽指數具顯著性差異影響，浸種時間對發芽勢、發芽率、發芽指數沒有明顯差異影響;種子發芽率、發芽勢、發芽指數變化成近似正相關，整齊度較好。

2.5?不同濃度GA3溶液、不同處理時間對透骨香種子發芽率的影響

由表5可知，經GA3溶液處理的透骨香種子，發芽勢均比對照組低，但發芽率、發芽指數大多得到提高，在100 mg/mL浸種30 min時，發芽勢、發芽率、發芽指數均為最高，分別為24%、90%、93.19，與對照組相比，發芽勢降低了5.5百分點，發芽率、發芽指數分別升高了25百分點、13.92。

由SPSS處理可知，濃度和浸種時間對發芽勢、發芽率、發芽指數均不具顯著性差異影響;種子發芽勢、發芽率、發芽指數變化成近似正相關，整齊度較好。

3?結論與討論

（1）不同試劑處理后的種子與對照組相比，發芽率大多能夠得到提升，如10 mg/mL NaOH浸種30、60 min等;其中用10% C2H5OH浸種120 min，50%浸種90 min，10、30 mg/mL NaOH分別浸種60、90 min，0.50 mg/mL KMnO4浸種30 min、0.70 mg/mL浸種90 min、1.10 mg/mL浸種60 min，10 mg/mL NaCl浸種30 min，超聲浸種90 min后，發芽率均在80%以上，且發芽勢、發芽指數相比對照組明顯提高;其中用10 mg/mL NaOH浸種60 min發芽率、發芽勢均最高，發芽指

數第二，分別為96%、85%、184.90。

（2）透骨香種子種皮硬、厚，胚小，發芽率不高（由對照組可知），造成種子發芽率不高的原因很多，如種皮的蠟質層、油脂層，種皮細胞內的果膠質、種子霉變等;透骨香種子過小，數種過程可能混雜不夠成熟飽滿的種子，同樣可能影響試驗結果。

（3）種子發芽勢、發芽率、發芽指數作為測定種子萌發的指標，發芽勢高，種子發芽快;發芽率高，種子發芽多，存活率高;而在發芽指數也高時，才能保證種子發芽快且存活率好。在不同試劑、濃度、浸種時間處理中NaOH處理組發芽情況最好，整體發芽較快，即使有幼苗死亡情況，但幼苗存活率依然很高，其中以10 mg/mL浸種60 min處理最好，綜合三因素，下一步試驗時建議選用10 mg/mL NaOH溶液對透骨香種子浸種60 min。

參考文獻

[1] 《貴州植物志》編委會.貴州植物志：第三卷[M].貴陽：貴州人民出版社，1990：265.

[2] 貴州省藥品監督管理局.貴州省中藥材、民族藥材質量標準（2003年版）[M].貴陽：貴州科技出版社，2003：308.

[3] 陳芳，汪毅，杜江.貴州民族藥物研究及開發現狀[J].中國民族民間醫藥，2013，22（6）：1-2，5.

[4] 徐晏.苗藥透骨香的研究概況[J].醫學信息，2013，26（4）：677-678.

[5] 徐樹蕓.貴州十種民族藥的應用研究[J].世界科學技術，2006，8（6）：73-78.

[6] 李蒙禹，朱玉梅，王世清.不同干燥方式對透骨香藥材水楊酸甲酯含量的影響[J].貴陽中醫學院學報，2016，38（4）：36-38.

[7] 扶教龍，譚昌恒，譚俊杰，等.云南透骨草的化學成分研究[J].天然產物研究與開發，2012，24（1）：8-11.

[8] 劉紹歡，何晶晶，王世清.不同采收期和部位的黔產透骨香中槲皮素含量測定[J].時珍國醫國藥，2015，26（8）：2030-2032.

[9] 何飛，韋桂寧，蘇華，等.滇白珠提取物對胃腸功能以及止瀉作用研究[J].中國藥導報，2016，22（9）：20-22.

[10] 龍婷，丁丹，田夢杰，等.滇白珠水提物對慢性阻塞性肺疾病大鼠氧化應激的影響[J].實用心腦肺血管病雜志，2014，22（2）：29-30.

[11] 蘇家樂，李暢，陳璐，等.不同預處理方法對牛皮杜鵑和小葉杜鵑種子萌發的影響[J].植物資源與環境學報，2011，20（4）：64-69.