升降散對膿毒癥大鼠凝血功能的影響*

沙媛媛 趙 雷 錢風(fēng)華 錢義明

上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬岳陽中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院 上海 200437

升降散由僵蠶、蟬蛻、姜黃、大黃組成，前期研究中我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)升降散對炎癥介質(zhì)有調(diào)控作用[1,2]，隨著對膿毒癥的認識逐漸深入，由炎癥介質(zhì)引發(fā)的彌散性血管內(nèi)凝血(DIC)被認為是主要致死因素，因此預(yù)防DIC的發(fā)生成為新的研究重點，但目前沒有關(guān)于升降散對膿毒癥凝血功能影響的實驗研究，本實驗通過觀察升降散對膿毒癥大鼠凝血功能的影響，為升降散治療膿毒癥中的凝血功能障礙尋找證據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物：SPF級SD雄性大鼠30只，體質(zhì)量（270±50）g，購自上海西普爾-必凱實驗動物有限公司，動物合格證號SCXK(滬2013-0016)。

1.2 實驗藥物：升降散由僵蠶6g，蟬蛻、姜黃各3g，大黃12g組成，加水煎濃縮至每毫升含生藥1g，由岳陽中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院中藥制劑室提供。全自動血凝儀（貝克曼ACLTOP7000）。

1.3 模型制備：按照Rittirsch D方法行大鼠盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)（cecal ligation puncture，CLP）制備大鼠膿毒癥模型[3]。即大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)2周后，造模前24h禁食，自由飲水；以1%戊巴比妥（每20g體質(zhì)量0.1ml，皮下注射）腹腔麻醉大鼠后固定，剃除動物中下腹皮毛，常規(guī)消毒鋪巾，于中下腹正中作1cm左右切口，打開腹腔，尋找到盲腸后游離盲腸根部，小心分離其遠端與大腸的系膜。用4#線在距回盲瓣約0.5cm處結(jié)扎盲腸，避免結(jié)扎回腸及盲腸系膜血管，在結(jié)扎遠端用12號針頭反復(fù)貫穿盲腸2次并略加擠壓，見少量糞便溢出后將盲腸回納腹腔，還納盲腸并逐層縫合腹壁切口；術(shù)后于腹腔皮下注射生理鹽水（每20g體質(zhì)量1ml）以行液體復(fù)蘇；術(shù)后注意保暖，禁食、水；造模后大鼠出現(xiàn)豎毛、精神萎靡、腹瀉等表現(xiàn)。

1.4 分組與給藥：取10只正常大鼠作為對照組，20只造模后大鼠隨機分為膿毒癥模型組(n=10)和升降散治療組(n=10)。升降散治療組小鼠于手術(shù)前72h開始灌胃（2次/d），根據(jù)文獻換算實驗大鼠和人臨床用藥劑量[3]，即每只每次11μl/g。對照組和模型組大鼠給予同等劑量0.9%NaCl溶液灌胃，灌胃3天。

1.5 檢測方法：術(shù)后24h將大鼠脫脊椎處死，取腹主動脈血5ml，離心后取血清低溫保存，采用全自動血凝儀檢測凝血酶原時間(PT)、活化部分凝血酶時間(APTT)、纖維蛋白原(FIB)、凝血時間(TT)，D-二聚體（D-Di）水平。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法：采用SPSS20.0進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計。計量資料以±s表示，比較采用t檢驗。P＜0.05表示差異存在統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

與對照組比較，模型組和治療組PT、APTT、TT水平均明顯升高(P＜0.01)。治療組APTT、TT均明顯低于模型組(P＜0.01)。而各組間FIB和D-Di無明顯差別。見表1。

3 討論

隨著對膿毒癥研究的深入，除了早期的大量的炎癥介質(zhì)產(chǎn)生，人們逐漸意識到凝血功能障礙也是膿毒癥死亡的獨立危險因素[4]，炎癥介質(zhì)通過各種途徑激活凝血和纖溶系統(tǒng)，引起凝血功能紊亂，進一步導(dǎo)致DIC的發(fā)生。DIC被認為是膿毒血癥患者多器官功能衰竭的重要因素之一。因此有學(xué)者認為應(yīng)該把抗凝作為膿毒癥的常規(guī)治療方案[5]。也相繼推出了絲氨酸蛋白酶抑制劑和血栓調(diào)節(jié)蛋白等，但因為出血風(fēng)險及療效等問題都沒有投入臨床[6,7]。

表1 各組大鼠凝血功能水平比較（±s）

表1 各組大鼠凝血功能水平比較（±s）

注：與對照組比較，*P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.01。

對照組模型組治療組0.18±0.02 0.19±0.02 0.21±0.01 10 10 10 18.5±1.02 22.37±1.87*20.33±2.02*26.63±2.77 40.72±3.02*33.4±3.03*#27.98±2.66 37.54±3.62*33.62±3.22*#2.73±0.33 3.08±0.52 2.98±0.32

中醫(yī)學(xué)界也一直在尋求更加有效的方法治療膿毒癥，但之前的研究更傾向于免疫方面，也取得了不錯的效果[1,2,8]，其實中醫(yī)對于膿毒癥的認識從王金達的“三證三法”到劉清泉的“正虛邪實”血瘀證都是重要的環(huán)節(jié)，活血化瘀法也是重要的治療方法之一。目前隨著國際上對膿毒癥合并凝血功能障礙的重視，中醫(yī)學(xué)研究的重點也逐漸偏向于活血化瘀[9]。升降散[10]方中僵蠶辛苦，氣薄輕浮而升，為陽中之陽，能祛風(fēng)除濕、清熱解郁、除痰散結(jié)；蟬蛻甘寒，開宣肺竅，祛風(fēng)除濕，涼散風(fēng)熱，滌熱解毒；姜黃辛苦溫，行氣散郁，祛邪辟疫；大黃苦寒，上下通行，抑制亢盛之陽。本方具有辛涼宣透、寒溫并用、升清降濁、調(diào)暢氣機、解毒透穢、活血化瘀的功效，目前主要適用于膿毒癥初期。因為膿毒癥的發(fā)病原因在于免疫失衡，因此前期的研究主要集中在升降散對免疫系統(tǒng)的影響。現(xiàn)代藥理研究已經(jīng)證明僵蠶、蟬蛻、姜黃、大黃均具有對凝血功能有調(diào)節(jié)作用[11-13]。而且運用一些活血化瘀的中藥方劑在治療膿毒癥血瘀證時也取得了較好的效果[14]。所以我們有理由認為升降散會對凝血功能產(chǎn)生調(diào)節(jié)作用。

通過實驗我們觀察到升降散對于膿毒癥凝血系統(tǒng)確實有一定的作用，主要表現(xiàn)在內(nèi)源性凝血因子等方面，因為本次造模并沒有局限在膿毒癥的血瘀證，所以可以認為升降散可廣泛作用于膿毒癥的各種證型，而且本次實驗造模時間較短，應(yīng)該認為升降散還是作用于膿毒癥早期，纖溶系統(tǒng)并沒有啟動，這也是本次各組間FIB、D-Di沒有顯著性差異的可能原因。

綜上，本次實驗發(fā)現(xiàn)升降散能改善膿毒癥的凝血功能，為今后進一步研究升降散的治療機理提供了新的方向。

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